重组腺相关病毒2、6、8、9型玻璃体腔注射在小鼠视网膜中的趋向性表达

目的比较腺相关病毒(AAV)不同血清型对小鼠视网膜层的趋向性。方法构建pFastBacDual-inCap衣壳质粒和pFastBacDual-ITR-CMV-EGFP基因组质粒;包装重组腺相关病毒2型(rAAV2)、rAAV6、rAAV8、rAAV9;以感染复数(MOI)2000的比例感染HEK293T细胞,24 h后观察荧光表达;应用随机数字表法将C57BL/6小鼠分为rAAV2、rAAV6、rAAV8、rAAV9组和对照组,每组5只,分别双眼玻璃体腔注射rAAV2、rAAV6、rAAV8、rAAV9和磷酸盐缓冲液(PBS)各1μl,注射后2周,制作眼球冰冻切片以及视网膜铺片,分别应用倒置荧光显微镜和激光扫描共焦显微镜观察rAAV不同血清型增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光强度和感染部位。应用倒置荧光显微镜观察玻璃体腔注射rAAV2后2周、1个月、3个月EGFP荧光强度变化。结果重组病毒对HEK293T的感染效率从高到低依次为rAAV2、rAAV6、rAAV8和rAAV9,转导效率分别为39.5%、18.4%、8.7%和4.6%;在小鼠视网膜中,rAAV2和rAAV6在神经节细胞表达水平较高,rAAV8和rAAV9在视网膜色素上皮(RPE)和光感受器细胞中表达水平较高;rAAV2介导EGFP可于注射后2周、1个月、3个月内在视网膜稳定表达。结论rAAV不同血清型对视网膜RPE细胞和神经节细胞具有高趋向性和高效表达,rAAV2玻璃体腔注射后转导效率较高,且在注射后3个月内稳定表达。

紫花苜蓿原生质体转基因植株再生

紫花苜蓿(Medicago sativa L)是世界上分布最广的一种多年生豆科牧草,也是我国最重要的豆科牧草之一。它不仅产量高而且营养丰富。但是,紫花苜蓿也存在一些需要改进的性状,譬如,紫花苜蓿植株的含硫氨基酸偏低。含硫氨基酸的含量直接与动物营养有关,并与动物毛产量成正相关。紫花苜蓿用农杆菌共培养法获得转化体已有报道。Reich等用显微注射法将Ti质粒导入紫花苜蓿原生质体,得到转化的愈伤组织。

REGENERATION OF TRANSGENIC PLANTS FROM PROTOPLASTS OF ALFALFA (Medicago sativa L. )

Alfalfa (Medicago sativa L. ) is one of the perennial forage legumes with high yield and rich nutrients most widely distributed in the world, and is one of the most important forage legumes in China. However, some characteristics of alfalfa plants such as deficiency of sulfur amino acid need to be improved. The quantity of sulfur amino acid relates to the nutrition of animals, and is positively related to the wool yield of animals. It has been