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白喉毒素突变体CRM197在白喉杆菌中的表达纯化 被引量:3
1
作者 朱涛 邓立功 +4 位作者 段磊 常云松 邵忠琦 毛慧华 宇学峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期182-186,共5页
CRM197是一种白喉毒素突变体,第52位的甘氨酸突变为谷氨酸,作为载体蛋白广泛用于疫苗开发。将阐述一种新的生产CRM197方法。将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pCKM4.1中,表达质粒pCKM5.1电转化至大肠杆菌E.coli S17-1中,通过结合转... CRM197是一种白喉毒素突变体,第52位的甘氨酸突变为谷氨酸,作为载体蛋白广泛用于疫苗开发。将阐述一种新的生产CRM197方法。将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pCKM4.1中,表达质粒pCKM5.1电转化至大肠杆菌E.coli S17-1中,通过结合转移转化至白喉杆菌(ATCC?27010TM的白喉杆菌)中,载体上的导肽序列可以使得CRM197作为可溶性蛋白分泌到胞外表达,CRM197蛋白可占到菌体总蛋白的70%。增强对铁的调控,进一步优化培养基及发酵条件以提高产量。经过Q膜、硫酸铵沉淀、阴离子交换纯化步骤获得纯度达到95%的CRM197样品,提高了蛋白得率,节约了纯化时间和成本。 展开更多
关键词 CRM197白喉杆菌 接合转移 可溶蛋白 铁调控 阴离子柱
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链球菌属的一个新种 被引量:1
2
作者 周东坡 平文祥 +3 位作者 宋秀娟 史玉英 陈宏伟 邵忠琦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第2期79-83,共5页
自君子兰(Clivia miniata)软腐病病株的叶片病灶中分离到两株致病菌。经鉴定其中一株(85-2)多为双球状,也有呈单个存在,极少为四个细胞相连的短链。无芽孢,无鞭毛、不运动,革兰氏染色阳性,抗酸染色阴性,兼性厌氧生长;可从多种糖类产酸,... 自君子兰(Clivia miniata)软腐病病株的叶片病灶中分离到两株致病菌。经鉴定其中一株(85-2)多为双球状,也有呈单个存在,极少为四个细胞相连的短链。无芽孢,无鞭毛、不运动,革兰氏染色阳性,抗酸染色阴性,兼性厌氧生长;可从多种糖类产酸,但不产气;接触酶和苯丙氨酸脱氨酶均为阴性;不液化明胶,还原石蕊牛奶并凝固、胨化;生长温度范围为15—53℃,DNA中G+C含量为41.7mol%。由于其性状与链球菌属的各已知种均不相同,故定为一个新种,命名为君子兰链球菌(Streptococcus miniatus Zhou,Ping et Shao sp.nov.)。 展开更多
关键词 链球菌属 君子兰链球菌
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铝佐剂类型及吸附率对吸附无细胞百白破联合疫苗免疫原性的影响 被引量:6
3
作者 韩露 朱涛 +1 位作者 邵忠琦 司伟雪 《免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第7期580-584,共5页
目的研究铝佐剂类型及吸附能力对吸附无细胞百白破联合疫苗免疫原性的影响,筛选最佳佐剂。方法用磷酸铝(AP)、不同浓度磷酸盐处理的氢氧化铝(PTAH)以及氢氧化铝(AH)佐剂吸附百白破抗原,检测不同佐剂对各抗原的吸附率。制备不同佐剂类型... 目的研究铝佐剂类型及吸附能力对吸附无细胞百白破联合疫苗免疫原性的影响,筛选最佳佐剂。方法用磷酸铝(AP)、不同浓度磷酸盐处理的氢氧化铝(PTAH)以及氢氧化铝(AH)佐剂吸附百白破抗原,检测不同佐剂对各抗原的吸附率。制备不同佐剂类型和吸附率的制剂,腹腔免疫NIH小鼠,ELISA法测定免疫后各组小鼠血清抗体滴度。结果百日咳丝状血凝素(FHA)在所有佐剂中吸附率≥95%,百日咳类毒素(PT)、百日咳溶血素(PRN)、精制白喉类毒素(DT)和破伤风类毒素(TT)则随着铝佐剂中磷酸根增多吸附率降低。动物实验产生PT抗体水平大小关系:AP/AH>PTAH/无佐剂组;产生FHA抗体水平大小关系:AP/PTAH-3/AH>PTAH-2/PTAH-3>无佐剂组;产生PRN抗体水平大小关系:PTAH/AP/AH>无佐剂组;产生DT抗体水平大小关系:AP>PTAH>AH>无佐剂组;产生TT抗体水平大小关系:PTAH>AH/AP/无佐剂组。结论铝佐剂吸附力不影响抗原(DT除外)免疫原性,磷酸铝更适合作吸附无细胞百白破联合疫苗的佐剂。 展开更多
关键词 铝佐剂 百白破疫苗 吸附率 免疫原性
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南京地区儿童患者肺炎链球菌的血清型分布 被引量:1
4
作者 苗丹青 徐飞 +4 位作者 李军强 刘婧筠 邵忠琦 朱涛 钟天鹰 《中国医学工程》 2016年第2期12-15,共4页
目的了解南京地区儿童患者的肺炎链球菌血清型的分布,为疫苗研发的血清型选择提供支持。方法采用多重聚合酶链式反应(PCR)方法,对从南京地区儿童中分离的323株肺炎链球菌株进行测定,以确定其血清型。结果南京儿童医院分离的肺炎链球菌共... 目的了解南京地区儿童患者的肺炎链球菌血清型的分布,为疫苗研发的血清型选择提供支持。方法采用多重聚合酶链式反应(PCR)方法,对从南京地区儿童中分离的323株肺炎链球菌株进行测定,以确定其血清型。结果南京儿童医院分离的肺炎链球菌共323株,分型检定结果表明,最常见的血清型为19 F,所占的百分比为31.3%,其次为19 A(13.3%),14型(12.7%)和6 A/B(10.8%)。结论南京地区儿童患者所携带的血清型以19 F、19 A、14和6 A/B型最为常见,现有7价疫苗的覆盖率较低约为62%,而13价肺炎结合疫苗(PCV13)的血清型覆盖率较高约为85%。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 血清型 疫苗 覆盖率
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南京地区儿童肺炎链球菌临床分离株的PspA 蛋白分型 被引量:2
5
作者 钟天鹰 朱涛 +4 位作者 徐飞 孟夏萌 邵忠琦 常云松 宇学峰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期927-932,共6页
目的:调查由来自PspA家族1和PspA家族2的3个PspA蛋白组成的重组蛋白疫苗在流行的肺炎链球菌中的覆盖率。方法采用ELISA方法,分别用这3个蛋白的抗血清与159株南京地区儿童中的肺炎链球菌分离株(包括47株侵袭性菌株)进行反应,对PspA... 目的:调查由来自PspA家族1和PspA家族2的3个PspA蛋白组成的重组蛋白疫苗在流行的肺炎链球菌中的覆盖率。方法采用ELISA方法,分别用这3个蛋白的抗血清与159株南京地区儿童中的肺炎链球菌分离株(包括47株侵袭性菌株)进行反应,对PspA 蛋白分布情况进行研究。结果分属于9个血清型的47株侵袭性菌株中,10.7%的菌株为PspA家族1菌株,89.3%的菌株为PspA家族2菌株,而没有PspA家族3的菌株。在所有159个菌株中,属于PspA家族1的菌株为10.1%,属于PspA家族2的菌株为88.0%,另有1.9%的菌株不能用本研究中所采用的方法进行PspA蛋白分型,但仍然没有发现属于PspA家族3的菌株。结论这3个PspA蛋白组成的疫苗可以覆盖本研究中(南京地区)几乎所有的临床侵袭性和非侵袭性分离株。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 PspA蛋白 疫苗 覆盖率
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脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(CRM197)结合物中游离多糖含量检测方法的建立及验证 被引量:2
6
作者 朱涛 朱婉玉 +2 位作者 宇学峰 毛慧华 邵忠琦 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第4期402-405,410,共5页
目的 建立一种脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(CRM197)结合物中游离多糖含量的检测方法,并进行验证。方法 根据脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,NaDC)在酸性条件下可沉淀蛋白的原理,分别对标准蛋白溶液和CRM197蛋白溶液进行酸沉淀处理,... 目的 建立一种脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(CRM197)结合物中游离多糖含量的检测方法,并进行验证。方法 根据脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,NaDC)在酸性条件下可沉淀蛋白的原理,分别对标准蛋白溶液和CRM197蛋白溶液进行酸沉淀处理,考察其蛋白沉淀效果;向脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中标加多糖衍生物,计算加标回收率,验证方法的准确性;分别采用NaDC沉淀法处理脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(A、C、Y、W135群)结合物,检测其游离多糖含量,试验重复6次,验证方法的重复性;向标准蛋白溶液中标加不同浓度的NaDC溶液,验证NaDC对蛋白检测的干扰,考察方法的耐用性。结果 不同浓度的标准蛋白溶液经NaDC沉淀法处理后,蛋白浓度在100-300μg/ml范围内,沉淀中蛋白回收率在90%-110%之间,蛋白浓度大于300μg/ml的样品回收率显著降低;4种脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物标加多糖衍生物后,再经NaDC沉淀法处理后的游离多糖含量回收率均在80%-110%之间;4种脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物6次检测结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均〈15%;当溶液中NaDC的浓度不高于2%时,对蛋白检测无干扰。结论NaDC沉淀法准确性、重复性和耐用性良好,可用于脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中游离多糖含量的测定。 展开更多
关键词 脑膜炎球菌多糖 白喉类毒素 结合物 游离多糖 脱氧胆酸钠
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四价脑膜炎球菌多糖疫苗中结合物多糖抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证 被引量:1
7
作者 朱涛 邓捷 +3 位作者 邓新 邵忠琦 毛慧华 宇学峰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期170-176,共7页
目的建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法以白喉类毒素无毒变异体(CRM197)特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特... 目的建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法以白喉类毒素无毒变异体(CRM197)特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特异性单抗为捕获抗体,建立可定量检测脑膜炎球菌各血清群结合物多糖含量的双抗体夹心ELISA法,确定方法的最佳线性范围和检测限,并对方法的特异性、准确性和重复性进行验证。结果定量检测A群脑膜炎球菌结合物(GAMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为3.75~120 ng/ml,检测限为3.75 ng/ml;定量检测C群脑膜炎球菌结合物(GCMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~30 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml;定量检测W135群脑膜炎球菌结合物(GWMPCRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为7.5~240 ng/ml,检测限为7.5 ng/ml;定量检测Y群脑膜炎球菌结合物(GYMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~60 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml。A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法均能特异性地检测相应的结合物多糖抗原含量,而不与其他群的结合物多糖抗原发生交叉反应;A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法的回收率均在80%~120%之间,检测相应的结合抗原样品时,变异系数(CV)均小于15%。结论建立的双抗体夹心ELISA法特异性较强,准确性较高,重复性良好,可用于四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群结合物多糖抗原的定量检测。 展开更多
关键词 四价脑膜炎球菌多糖疫苗 双抗体夹心ELISA 结合物 多糖
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基于Luminex技术的多组分百日咳疫苗血清抗体效价快速检测方法的建立
8
作者 朱涛 骆鹏 +4 位作者 宋琳琳 邓捷 毛慧华 宇学峰 邵忠琦 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期79-83,共5页
目的建立基于Luminex技术的多组分百日咳疫苗血清抗体效价快速检测方法。方法将百日咳类毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)、百日咳杆菌黏附素(pertactin,PRN)、百日咳菌鞭毛蛋白2,3型(fimbrial-2 ... 目的建立基于Luminex技术的多组分百日咳疫苗血清抗体效价快速检测方法。方法将百日咳类毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)、百日咳杆菌黏附素(pertactin,PRN)、百日咳菌鞭毛蛋白2,3型(fimbrial-2 and fimbrial-3,FIM 2,3)分别与4种不同型号的微球耦联,耦联的抗原在同一孔中与血清孵育,通过生物素标记抗体和链霉素标记藻红蛋白双重识别,用Luminex荧光检测得到荧光中位数值(MFI),进行效价分析,并通过百日咳标准血清建立五组分百日咳疫苗血清抗体检测的标准曲线。采用ELISA法检测同一组血清样品中的抗体效价,并对两种方法的检测结果进行比较。结果与ELISA法相比,Luminex法的线性范围更宽。两种方法检测五组分百日咳疫苗血清抗体效价的分布范围接近,Luminex法检测50份五组分百日咳疫苗免疫小鼠血清抗体效价的平均值分别为PT 65.365 IU/ml、FIM 15.052 IU/ml、FHA 545.236 IU/ml、PRN 7.876 IU/ml,ELISA法检测的平均值分别为PT 72.640 IU/ml、FIM 16.480 IU/ml、FHA 589.474 IU/ml、PRN 7.345 IU/ml,两种检测方法的检测结果具有良好的相关性,相关系数(R2)分别为:PT 0.905 8、FIM 0.979 1、FHA 0.930 9、PRN 0.997 6。结论与ELISA法相比,基于Luminex的多重分析物的检测方法具有减少样品消耗量、节省成本和测定时间、使多种目标分子之间相关性的分析更准确等优点,可用于五组分百日咳疫苗血清抗体效价的检测。 展开更多
关键词 百日咳疫苗 效价 LUMINEX 多重检测 酶联免疫吸附测定
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腺病毒为载体的新型结核病疫苗Ad5Ag85A 被引量:2
9
作者 邵忠琦 ZHOU Xing +1 位作者 朱涛 宇学峰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期73-78,共6页
结核病是一个在全球范围内严重威胁人类健康的呼吸道传染性疾病。据世界卫生组织(WHO)估计,世界上约有1/3的人口受到结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的感染,其中1/10的人可能会最终患上结核病。全球每年的新病例超过... 结核病是一个在全球范围内严重威胁人类健康的呼吸道传染性疾病。据世界卫生组织(WHO)估计,世界上约有1/3的人口受到结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的感染,其中1/10的人可能会最终患上结核病。全球每年的新病例超过900万,约200万人死于结核病[1]。 展开更多
关键词 结核病疫苗 腺病毒 呼吸道传染性疾病 世界卫生组织 载体 结核分枝杆菌 人类健康 新病例
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氢氧化铝吸附重组肺炎蛋白疫苗解吸附方法 被引量:3
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作者 韩露 杨丽霞 +3 位作者 司伟雪 孟欣 邵忠琦 朱涛 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期998-1001,1023,共5页
目的:建立氢氧化铝吸附重组肺炎蛋白疫苗原液及制剂的解吸附方法。方法:在各重组肺炎蛋白的氢氧化铝吸附原液或4组分疫苗制剂半成品中加入解吸附试剂[含0.4%(m/v)十二烷基二甲基甜菜碱(BS-12),0.25 mo L·L-1的磷酸盐缓冲液,p H 6.5... 目的:建立氢氧化铝吸附重组肺炎蛋白疫苗原液及制剂的解吸附方法。方法:在各重组肺炎蛋白的氢氧化铝吸附原液或4组分疫苗制剂半成品中加入解吸附试剂[含0.4%(m/v)十二烷基二甲基甜菜碱(BS-12),0.25 mo L·L-1的磷酸盐缓冲液,p H 6.5],37℃下静置4.5 h,通过Lowry蛋白检测、SDS-PAGE和HPLC对蛋白的解吸附率进行测定。结果:结果显示该方法可将重组肺炎蛋白疫苗的4种蛋白从氢氧化铝佐剂上解吸附下来,解吸附率达95%以上,且不影响蛋白的完整结构。结论:建立了重组肺炎蛋白疫苗4个组分蛋白的氢氧化铝吸附原液及制剂半成品的解吸附方法,可用于疫苗吸附原液和制剂半成品定量分析的前处理。 展开更多
关键词 重组肺炎蛋白疫苗 氢氧化铝 解吸附 Lowry法 蛋白凝胶电泳 高效液相色谱
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用于ACYW 135群脑膜炎球菌多糖-CRM 197结合物分子量检测的SEC-RI-MALS联用方法的建立及验证 被引量:1
11
作者 杨丽霞 汪竹 +3 位作者 李璐 董建芹 邵忠琦 朱涛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第8期841-847,共7页
目的建立分子筛层析(size exclusion chromatography,SEC)-示差检测(refractive index,RI)-多角度激光光散射(multi-angle laser light scattering,MALS)联用方法检测ACYW135群脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物的分子量,并对方法进行验证。... 目的建立分子筛层析(size exclusion chromatography,SEC)-示差检测(refractive index,RI)-多角度激光光散射(multi-angle laser light scattering,MALS)联用方法检测ACYW135群脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物的分子量,并对方法进行验证。方法首先单机测定ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗中各血清群多糖-CRM97结合物的dn/dc值(折射率增量),再采用SEC-RI-MALS联用技术,以0.9%Na Cl为流动相,TSKgel G5000PWxl为色谱柱,在流速0.4 ml/min的条件下,对结合物的分子量进行测定。对方法的重复性和日间精密性进行验证,并通过对样品进行高温或冻融处理,分析SEC-RI-MALS法在监测分子量变化上的应用。结果各血清群多糖-CRM197结合物的高、中、低浓度样品平行测定3次重均分子量的相对标准偏差(RSD)均小于10%,不同浓度下测定的分子量大小无显著差异,其分子量分布曲线重合性好;连续5日检测各血清群多糖-CRM197结合物分子量的RSD值均小于10%,其分子量分布曲线重合性好。经沸水浴处理,各血清群多糖-CRM197结合物的分子量分布情况均发生了明显的变化;冻融处理对A、C群多糖-CRM197结合物的分子量无太明显的影响,W135和Y群多糖-CRM197结合物在冻融过程中出现了一定的分子聚集现象。结论建立的SEC-RI-MALS联用测定多糖-CRM197结合物分子量的方法具有良好的重复性和日间精密性,能够用于ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗中结合物分子量的检测,并可对结合物在不同保存条件下的稳定性进行监测。 展开更多
关键词 SEC-RI-MALS联用 dn/dc值 ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗 多糖-CRM197结合物 分子量
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肺炎链球菌血清型7F荚膜多糖结合物中游离多糖含量的测定 被引量:4
12
作者 韩悦颖 邵忠琦 +3 位作者 杨丽霞 常云松 郝杰清 朱涛 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第21期2501-2505,2541,共6页
目的:建立一种肺炎链球菌血清型7F荚膜多糖结合物(Pn7F-CRM197)中游离多糖含量的检测方法。方法:在不同的酸性p H下分别对Pn7F纯化多糖和多糖蛋白结合液进行脱氧胆酸钠酸沉处理,筛选出可以完全沉淀结合物但不沉淀多糖的p H范围;对含有... 目的:建立一种肺炎链球菌血清型7F荚膜多糖结合物(Pn7F-CRM197)中游离多糖含量的检测方法。方法:在不同的酸性p H下分别对Pn7F纯化多糖和多糖蛋白结合液进行脱氧胆酸钠酸沉处理,筛选出可以完全沉淀结合物但不沉淀多糖的p H范围;对含有不同蛋白浓度的结合液进行脱氧胆酸钠酸沉处理,筛选出结合物酸沉的最适蛋白浓度范围;验证该方法的准确度和重复性并考察蒽酮法分析多糖浓度的专属性。结果:当p H在2.5~4.0之间且蛋白浓度为100~300 mg·L-1时,脱氧胆酸钠对结合物的沉淀效果最好,对纯化多糖无沉淀作用。结论:脱氧胆酸钠在所选定的p H条件下能专一沉淀结合物,而对游离多糖无沉淀作用,该方法的准确度和重复性均可达到检测要求,多糖浓度的分析方法专属性好,可用于Pn7FCRM197结合物中游离多糖含量的检测。 展开更多
关键词 肺炎 结合疫苗 Pn7F-CRM197 游离多糖 脱氧胆酸钠
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基于新载体的b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备及免疫原性研究 被引量:2
13
作者 苗丹青 李军强 +2 位作者 杨鸣鸣 邵忠琦 朱涛 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期739-744,共6页
目的:评价Hin47-HiD融合蛋白作为b型流感嗜血杆菌结合疫苗新型载体的可行性。方法:应用重叠延伸PCR法构建Hin47-HiD融合基因,克隆至表达载体p ET-9a,并转化至大肠杆菌中诱导表达。融合蛋白经柱层析纯化后与Hib多糖结合,免疫小鼠并用间接... 目的:评价Hin47-HiD融合蛋白作为b型流感嗜血杆菌结合疫苗新型载体的可行性。方法:应用重叠延伸PCR法构建Hin47-HiD融合基因,克隆至表达载体p ET-9a,并转化至大肠杆菌中诱导表达。融合蛋白经柱层析纯化后与Hib多糖结合,免疫小鼠并用间接ELISA法测定小鼠血清中针对Hib多糖和Hin47、HiD蛋白的抗体滴度。结果:本研究表达、纯化了Hin47-HiD融合蛋白,并制备了以该蛋白为载体的Hib结合疫苗;两针免疫后,免疫Hib-Hin47-HiD结合物的小鼠血清中的抗Hib抗体水平远高于接种Hib多糖的小鼠;此外,Hib-Hin47-HiD结合物还诱导出高水平的针对Hin47和HiD的抗体。结论:Hin47-HiD融合蛋白可以有效的提高Hib多糖的免疫原性,是一个有潜力的新型结合疫苗蛋白载体。 展开更多
关键词 b型流感嗜血杆菌荚膜多糖 结合疫苗 融合蛋白 免疫原性
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离子色谱法检测冻干AC-Hib联合疫苗成品中的游离多糖 被引量:5
14
作者 原素英 杨尧 +1 位作者 杨丽霞 邵忠琦 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期874-881,共8页
目的:采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)检测法测定冻干AC群脑膜炎球菌(结合)b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗成品(以下简称冻干AC-Hib联... 目的:采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)检测法测定冻干AC群脑膜炎球菌(结合)b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗成品(以下简称冻干AC-Hib联合疫苗)中游离多糖的含量,并对方法进行验证。方法:合并15支成品用3 k Da超滤离心管浓缩,通过冷酚法分离游离多糖和多糖蛋白结合物,用2 mol·L^(-1)盐酸水解游离多糖,得到对应的单糖;采用HPAEC-PAD法对水解的游离多糖进行分析,根据检测信号峰面积计算对应水解单糖含量,通过化学结构式确定多糖与水解后对应单糖摩尔比,计算出游离多糖的含量。结果:标准曲线R2>0.99;不同多糖加标回收率均在80%~120%;A群多糖、C群多糖和Hib多糖的定量限分别为0.025,0.03和0.05μg·mL^(-1);对HPAEC-PAD法检测游离多糖的重复性和中间精密度进行验证,相对标准偏差(RSD)分别小于10%和15%;方法专属性、系统适用性及耐用性良好。结论:冷酚法与HPAEC-PAD法相结合可用于冻干AC-Hib联合疫苗中游离多糖的含量检测,为产品的质量控制和稳定性研究提供参考。 展开更多
关键词 高效阴离子交换色谱 游离多糖 冷酚法 多糖蛋白结合疫苗
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