栀子(Gardenia jasminoides Ellis)黄色素的水提制备及其稳定性的研究

由于人工合成色素多为芳香烃衍生物,有较强的慢性毒副作用和致癌性,天然植物色素作为食品添加剂越来越显示出其安全优势。栀子黄色素是从栀子果实中提取的自然界唯一存在的水溶性类胡萝卜素类天然色素,常包含藏花素、环烯醚萜苷、三萜酸等成分,在欧美、日本等国颇受欢迎。本研究目的是采用单因素试验,筛选栀子黄色素水提制备工艺最优条件。提取温度60℃、液固比8:1,提取次数2次,每次60min。总藏花素、总栀子苷和总三萜酸的提取率可分别达到1.09,106.89和72.13mg.g-1。采用的提取工艺简便易行、稳定性好。

中药莪术激活PXR及对大鼠肝细胞色素P450 3A的影响

目的考察莪术能否通过体外激活PXR调节细胞色素P4503A4(CYP3A4)的转录表达及对大鼠肝脏CYP3A在酶活性及mRNA表达的诱导作用。方法在HepG2细胞中,采用瞬时共转染报告基因实验研究莪术对PXR介导的CYP3A4的转录调节作用;在大鼠体内,采用紫外分光光度法和RT-PCR技术检测莪术对大鼠肝脏CYP450含量及CYP3A同工酶红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性和CYP3A基因mRNA表达的影响。结果在体外报告基因实验研究中,莪术提取物及其有效成分能不同程度的诱导CYP3A4的表达;在大鼠体内实验中,莪术提取物能够增加CYP450蛋白含量和CYP3A酶活性;在mRNA水平上,莪术提取物能够明显诱导CYP3A1及CYP3A2的基因表达。结论莪术提取物及其有效成分能够明显激活PXR并诱导CYP3A4的转录表达;莪术提取物对大鼠体内CYP3A的酶活性及mRNA表达均有明显诱导作用。

茅苍术提取物诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的;探讨茅苍术提取物对体外培育人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法;采用MTT法考察茅苍术提取物对HepG2增殖的抑制作用,普通光镜观察、荧光染色法观察细胞形态的改变及细胞凋亡,流氏细胞仪(FCM)观察细胞周期变化和凋亡峰的出现。结果;0．4～1．6mg／mL茅苍术提取物对HepG2增殖产生抑制作用,且呈明显的时-效果、量-效关系(P<0．05)。光镜观察可见贴壁细胞数量明显减少,细胞碎片和悬浮细胞数目明显增加,荧光染色显示细胞核显著收缩,呈致密浓染。FCM结果表明1．6mg/mL茅苍术提取物处理细胞24h后使HepG2出现明显的凋亡峰,并将细胞周期阻滞于S期和G2／M期。结论;茅苍术提取物能诱导诱导HepG2细胞凋亡。

1,3-丙二醇发酵生产的研究进展

对国内外1 ,3-丙二醇(1,3 -PD)发酵生产的研究成果进行了综述 ,包括其发酵机理、发酵方式及基因工程菌生产1,3-PD的现状等 ,探讨了1,3

良性前列腺增生患者经尿道前列腺电切术水中毒预防与治疗的方法探讨

目的:探讨良性前列腺增生(BPH)患者经尿道前列腺电切术水中毒预防与治疗的有效方法。方法:选取我院2014年5月至2016年5月收治的良性前列腺增生(BPH)患者100例,其中3例患者术中发生水中毒,水中毒发生率为3%,给予患者脱水利尿治疗,途径为对患者应用20%甘露醇,对高渗钠进行补充,将酸中毒及低血压纠正过来,膀胱前或腹腔间隙穿刺对积液进行引流,以将手术尽可能快地中止或结束,然后分析其治疗效果。结果:3例水中毒患者中,具有正常电解质、以较快的速度纠正生命体征、排除膀胱周围及腹腔间隙积液、没有对手术进程造成影响2例,具有正常的生命体征的时间为治疗1h左右后而将手术中止1例。回病房后均具有较为稳定的生命体征,术中输血400mL 1例,术后输血400mL 1例。术后1~3d、5d分别停止冲洗膀胱并将膀胱造瘘管拔除、将导尿管拔除出院。3例患者术后1个月均具有令人满意的排尿且没有显著并发症发生。结论:早期发现和治疗是BPH患者经尿道前列腺电切术水中毒预防与治疗的有效方法,值得临床充分重视。

经尿道前列腺电切术治疗高龄前列腺增生症165例

经尿道前列腺电切术为前列腺增生治疗的＂世界公认金标准＂,国内已广泛开展近25 a。但是,高龄前列腺增生患者多伴有心、脑、肺、肝、肾等合并症,一直被视为手术禁忌证。秦皇岛市第一医院2009年1月-2012年12月采用经尿道前列腺电切术治疗高龄前列腺增生患者165例,疗效满意。现报告如下。

MBP-gldABC融合蛋白基因的原核表达载体的构建

目的 :构建可高效生产甘油脱水酶的大肠杆菌工程菌。方法 :将编码甘油脱水酶的三个基因gldA、gldB、gldC ,分别克隆至克隆载体pMD18-T和pSIM -T中 ,经测序正确后 ,再亚克隆至表达融合蛋白的高效表达载体pMAL -c2X上 ,构建成表达质粒pMAL -gldABC ,并转化大肠杆菌E .coliDH5α。结果 :成功地将甘油脱水酶基因gldABC以同向串联方式克隆到大肠杆菌融合表达载体pMAL -c2X中。结论 :得到了含gldABC基因的MBP融合蛋白表达载体 ,为研究甘油脱水酶基因 (gldABC)的在原核表达载体中的串联表达奠定了基础。

经尿道前列腺电切术中膀胱爆破1例讨论

1病例报告 患者，男，64岁，2011-07—20无明显诱凶出现排尿闲难、排尿无力、尿线变细、尿等待；排尿次数明显增多，以夜尿为著，每晚排尿3～4次彩雹尿痛、血尿、脓尿等，无腰腹部疼痛，无高热、寒战。

Klebsiella pneumoniae甘油脱水酶α亚基基因的克隆与序列分析

甘油脱水酶是1,3 丙二醇发酵过程中的重要限速酶,具有很好的工业应用前景.其中α亚基为甘油脱水酶的主要组成部分,该基因的正确克隆与分析对甘油脱水酶的正确表达起重要作用.作者采用PCR技术,从肺炎克雷伯氏杆菌A.S.1.1736基因组中扩增得到了编码甘油脱水酶α亚基的gldA基因,并将其克隆至pMD18 T载体中.经核苷酸序列分析证实,gldA基因开放阅读框架由1668bp组成.经GenBank检索对照分析,gldA基因序列与国外文献报道的同源性达99.34%,表明所克隆的gldA基因即为克雷伯氏甘油脱水酶α亚基基因.

微生物源甘油脱水酶的研究进展

综述了甘油脱水酶的结构、性质、酶活测定及其在甘油发酵中的作用机理等研究情况,介绍了甘油脱水酶基因工程的研究进展,并对其参与甘油脱水酶自杀性失活的再生反应进行了介绍,探讨了甘油脱水酶的研究前景并提出一些建议.

制药工程专业学生学习生物化学积极性的培养与激发

本文介绍了几种有效的课堂教学方法,包括在教学过程中引入科学史、改进教学方法、介绍最新科学发展动态等,其目的是激发并培养制药工程专业学生学习生物化学课程的积极性,提高教学效果。

重组依赖辅酶B12的甘油脱水酶基因表达系统构建

采用PCR方法从肺炎克雷伯氏杆菌基因组中分别扩增得到了编码依赖辅酶B12的甘油脱水酶α、β、γ三个亚基的基因gldA、gldB、gld将gldBC基因克隆至pSIM—T载体上，经测序正确后亚克隆至pGEX-4T-1载体中。将gldA进行T-A克隆后测定核苷酸序列正确，亚克隆至连有gldBC基因的pGEX-4T-1载体中。从而成功的构建了gldABC基因的同向串联原核融合表达载体pGEX—gldABC。

携绿色荧光蛋白和调控元件的人胰岛素原基因在HepG2细胞的表达

目的研究含绿色荧光蛋白(GFP)和人胰岛素原基因的逆转录病毒表达载体在HepG2细胞中的表达。方法将IRES-EGFP片段克隆到含调控元件的人胰岛素原基因逆转录病毒表达载体(pLXSN-GI-Ins)中,构建得到表达质粒pLXSN-GI-Ins-EGFP,经脂质体介导转染HepG2细胞后,各孔分别加入含有不同浓度葡萄糖的培养液继续培养24 h,在荧光显微镜下观察GFP基因的表达,检测细胞上清液中的胰岛素值及考察细胞中胰岛素mRNA的表达量。结果成功构建逆转录病毒表达质粒pLXSN-GI-Ins-EGFP。转染HepG2细胞后48 h,葡萄糖浓度为4.0,12.0,24.0 mmol/L,表达GFP基因的细胞数目占总细胞数目的比值分别为(4.00±0.15)%,(10.00±0.07)%,(25.00±0.10)%;胰岛素分泌量分别为(4.05±0.82),(8.67±0.62),(30.70±1.55)mU/L,不同葡萄糖浓度诱导的胰岛素mRNA表达量明显不同。结论含GFP和调控元件的人胰岛素原基因逆转录病毒表达载体能够在HepG2细胞中成功表达,并且GFP基因的表达量反映了人胰岛素的分泌量。

1,3-丙二醇发酵条件的正交设计试验

通过正交设计试验,优化了巴氏梭状芽孢杆菌产1,3-丙二醇(1,3-propnaediol,简称1,3-PD)的最适发酵条件:发酵培养基最佳配方为:2%酵母膏+3.4%K2HPO4+1%(NH4)2SO4+50%甘油+0.015%FeCl2. 7H2O+0.2%(v/v)微量元素溶液;接种量5%,发酵温度30℃,发酵初始pH值7.0,恒温箱培养48小时,1,3-丙二醇产量达32.45g/L.

4种中药调节细胞色素P4503A4转录表达的研究

目的:从中药中筛选通过激活人孕烷X受体(PXR)诱导细胞色素P450 3A4(CYP3A4)转录表达的中药;研究其诱导能力与药物浓度和作用时间之间的关系。方法:在HepG2细胞中,采用瞬时共转染报告基因试验筛选对CYP3A4转录表达有诱导作用的中药,研究其在不同浓度和不同作用时间下对PXR介导的CYP3A4的转录调节作用。结果:中药莪术、苍术、白术和茯苓均能通过激活PXR诱导CYP3A4的转录表达,且具有浓度-效应关系和时间-效应关系。在浓度-效应关系中,500 mg.L-1的莪术、苍术、白术和茯苓,在作用时间24 h时,其诱导倍数分别为0.1%DMSO处理细胞的(6.82±0.09),(6.76±0.20),(5.49±0.13),(4.97±0.07)倍。在时间-效应关系研究中,500 mg.L-1的莪术、苍术、白术和茯苓,在作用时间为48 h时,其诱导倍数分别为0.1%DMSO作用细胞的(7.74±0.54),(7.34±0.10),(5.54±0.11),(5.32±0.18)倍。结论:中药莪术、苍术、白术和茯苓均能够通过激活PXR诱导CYP3A4的转录表达。

大黄素衍生物的合成及抗癌活性

通过对大黄素的C6位进行化学修饰,设计合成了7个含氮杂环的大黄素衍生物和3个含季铵盐基团的大黄素衍生物.通过红外光谱、1H NMR和质谱表征了所制备化合物的结构,并测试了它们对白血病细胞Molt-4和淋巴瘤细胞CA46的体外抑制活性.其中化合物8,9a+9b,20a,20b和20c均显示出比大黄素更高的抗癌活性,表明苯并咪唑基团和季铵盐基团是大黄素提高抗癌活性的有效药效团.

四种抗癌中药提取物对大鼠肝CYP3A酶活性及mRNA表达的影响

目的:研究4种抗癌中药提取物对大鼠肝脏细胞色素P450 3A(CYP3A)酶在酶活性及mRNA水平的调节作用。方法:采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体CYP450含量及CYP3A同工酶——红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性;采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测CYP3A1、CYP3A2 mRNA的表达。结果:莪术、苍术、白术的提取物均可明显增加CYP450蛋白含量及CYP3A酶活性,而茯苓提取物无明显作用。在mRNA水平上,莪术、苍术、白术的提取物均能明显诱导CYP3A1的基因表达,茯苓提取物无明显作用;对于CYP3A2的基因表达,莪术和苍术的提取物均有明显的诱导作用,而白术和茯苓的提取物则有显著的抑制作用。结论:莪术、苍术、白术的提取物对CYP3A酶的调控均发生在酶活性水平和转录水平,而茯苓提取物对CYP3A酶仅存在转录水平的调控。4种抗癌中药提取物对CYP3A酶的诱导或抑制可能会影响其他药物的体内代谢。

熊果酸抗肿瘤作用及其机制研究进展

通过有关试验研究及查阅国内外近期文献资料,概述分析熊果酸在医药领域的研究进展。熊果酸属五环三萜类化合物,具有广泛的生物活性,抗肿瘤活性是其最主要的药理作用,其抗肿瘤作用是多方面的,并且资源丰富,开发应用前景广阔,但是在动物体内熊果酸生物利用度较低,需通过化学修饰的方法,进一步提高熊果酸的抗癌活性和生物利用度,此方面的研究将是熊果酸系列抗癌药物研发的重要步骤及未来开发的一个方向和热点,熊果酸有望成为一种高效低毒的抗肿瘤新药。

熊果酸衍生物的合成、表征及其对癌细胞的抑制活性

以熊果酸为母体化合物,对其3-OH和17-COOH进行结构修饰,设计合成了9个熊果酸衍生物,其结构经IR、1HNMR和MS测试技术确证;噻唑蓝(MTT)比色法考察了所合成衍生物对体外人肝癌细胞HepG2培养增殖的抑制作用,结果显示受试衍生物均对细胞增殖有一定抑制作用,且呈剂量依赖性,其中衍生物9的抑制作用最强;衍生物9与细胞作用24h后,经Hoechst33342/PI双染色,倒置荧光显微镜下观察,出现细胞凋亡所具有的高蓝色/低红色荧光图;流式细胞术检测细胞周期发现:细胞被阻滞于S期,且阻滞作用随药物浓度的增加而增强。