ALK基因蛋白在肿瘤细胞和正常细胞中表达的意义

背景与目的:以往的研究认为CD30是间变性大细胞淋巴瘤(amaplasticlargecelllymphoma,(ALCL)的诊断指标,但是该指标特异性并不强,需要寻找更特异指标。已有研究表明,在ALCL的三种染色体移位产生的融合基因中,均涉及ALK,设想ALK比CD30和P80在诊断ALCL时更特异。本文的目的是探讨间变性淋巴瘤激酶(anaplasticlymphomakinase,ALK)基因蛋白在多种肿瘤细胞和正常细胞中表达的意义,以此作为进一步研究的基础。方法:应用免疫组化链霉素-过氧化酶染色法检测了14例ALCL、10例霍奇金淋巴瘤/病(Hodgkinslymphoma/disease,HLorHD)、46例B细胞淋巴瘤(Bcelllymphoma,BCL)、13例T细胞淋巴瘤(Tcelllymphoma,TCL)、21例恶性星形胶质细胞瘤、5例髓母细胞瘤、5例室管膜瘤、75例各种上皮来源的癌、19例不同间叶组织来源的肉瘤以及多种正常组织中ALK基因蛋白的表达。结果:(1)ALCL中ALK蛋白表达率为64.3%,显著高于HD、BCL和其它TCL(P<0.01)。(2)ALK在肝细胞癌、恶性星形胶质细胞瘤和髓母细胞瘤中有较强的表达。(3)ALK在胎盘组织和胶质细胞神经元中有少量表达。结论:(1)ALK蛋白是ALCL的重要分子标志,对ALCL的诊断和鉴别诊断具有很高价值。(2)ALK基因可能参与了肝细胞癌、恶性胶质细胞瘤和髓母细胞瘤的发生和发展。

胃癌组织中p53、c-erbB-2、EGFR、nm23、E-cadherin基因表达及预后价值

目的：寻找胃癌临床病理特征和预后的可靠分子指标，建立一种能被临床普遍应用的简易方法。方法：应用免疫组化法检测了具有随访资料的171例胃癌标本中p53、nm23、c-erbB－2、EGFR和E-钙粘蛋白（E－cadherin，简写为E－cad）的表达。结果：（1）Cox比例风险模型多因素分析表明，p53、c－erbB－2、EGFR和E－cad是影响胃癌预后的因子；p53、c－erbB－2及EGFR表达的胃癌病人预后差，而E－cad表达则病人预后好。（2）nm23和E－cad的表达与浸润深度显著相关，癌组织浸润越深，其表达越少（P＜0．05）；有淋巴结转移和远处转移者的p53和EGFR表达率高于无淋巴结转移和无远处转移者（P＜0．05），而有淋巴结转移和远处转移者的nm23和E－cad的表达率低于无淋巴结转移和无远处转移者（P＜0．05）。结论：（1）测定EGFR、E－cad、c－erbB－2和p53基因的表达，对临床判断病人预后及指导治疗有较大的帮助；(2)c-erbB－2和EGFR同步表达对胃癌的进展可能有协同作用。

色素上皮源性因子与胃癌组织血管生成和临床病理因素的关系

【目的】研究色素上皮源性因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌组织中的表达及与癌组织中微血管密度(MVD)的关系,探讨PEDF在胃癌组织血管生成中的作用及PEDF与胃癌临床病理因素的关系。【方法】用S-P免疫组织化学法检测82例人体胃癌组织标本中胃癌细胞内PEDF和VEGF的表达;标记CD34分子显示血管内皮细胞,并计数上述胃癌组织内的微血管密度;统计学分析上述分子标记物间的关系以及各分子标记物与胃癌临床病理因素间的关系。【结果】所有的正常胃黏膜均有PEDF表达,胃癌组织PEDF表达率约43%,VEGF表达率约54%;与高分化胃癌相比,低分化胃癌组织PEDF表达率低(P<0.05),MVD高(P<0.05);PEDF低表达的胃癌细胞易侵犯浆膜(P<0.05),易淋巴结转移(P<0.01)和远处转移(P<0.01);胃癌组织PEDF表达与MVD(P<0.01)和VEGF(P<0.01)表达呈负相关关系,VEGF表达与MVD呈正相关关系(P<0.01)。【结论】PEDF低表达和VEGF高表达可能是胃癌组织内微血管生成的分子基础,是促进胃癌细胞发生淋巴及血道转移的重要因素。

p16基因研究进展

ｐ１６基因研究进展邵春奎（上海第二医科大学附属瑞金医院外科，上海２０００２５）王亚新（上海第二医科大学生化教研室，上海２０００２５）关键词ｐ１６基因抑癌基因肿瘤美国冷泉港实验室于最近发现新的抑癌基因——ｐ１６基因［１］。该基因在多种癌细胞中有缺陷，与...

p53抑癌基因与肿瘤病人的预后

正常野生型ｐ５３基因表达的蛋白具有调节细胞周期、诱导受损伤细胞凋亡的功能，ｐ５３抑癌基因与肿瘤病人预后的关系是肿瘤生物学行为研究的热点之一。通过总结近年来关于ｐ５３抑癌基因与肿瘤病人预后方面的文献，分析结论不一致或相互矛盾的原因，指出研究方法的差异，阐述了ｐ５３抑癌基因作为肿瘤病人预后因子时与经典的ＴＮＭ分期系统之间的关系。

建立显微分离细胞技术并检测胃癌细胞内p53基因突变

目的：获取较纯的微量胃癌细胞并检测ｐ５３基因的突变。方法：在显微镜下，直接分离出胃癌组织中微小癌灶内细胞，并应用单链构象多态（ＳＳＣＰ）技术分析该微量癌细胞中ｐ５３基因的突变。结果：在１７１例胃癌组织的石蜡标本中，有 ７０例获得可靠结果包括 ６例早期胃癌和 ６４例进展期胃癌，该方法总成功率为 ４１.０％。结论：显微分离细胞技术十分有利于观察癌前病变、原位癌及浸润癌的基因变化；该方法直接证明早期胃癌细胞中ｐ５３基因发生了突变。

三株B_(16)黑色素瘤细胞对NK细胞敏感性及细胞核DNA的测定

利用125I－UdR标记具有不同转移能力的B16黑色素瘤三个克隆株，并分别观察其对自然杀伤细胞（NK细胞）的敏感性;同时用流式细胞仪测定每株细胞的DNA含量。结果表明：高转移株细胞对NK细胞敏感性低，细胞DNA指数（DI）大，多为非整倍体细胞，增殖指数（PI）较小。此外，作者探讨了三株细胞对NK细胞的敏感性及细胞核DNA含量与体内生物学行为的可能关系。

胃癌组织中p53蛋白表达的临床意义

目的：观察ｐ５３蛋白表达能否作为判断胃癌病人的预后指标，为该指标的合理应用提供科学依据。方法：利 用免疫组化技术检测１７１例胃癌切除标本内ｐ５３蛋白的表达，分析ｐ５３蛋白表达与临床病理及预后之间的关系，探讨 ｐ５３蛋白表达与传统ＴＮＭ分期在预测预后中的关系。结果：４３．３％的胃癌组织有ｐ５３蛋白表达，弥漫型胃癌中的 ｐ５３蛋白表达率高于肠型胃癌（Ｐ＜０.０５）；有ｐ５３蛋白表达的胃癌组织易于发生淋巴结转移（Ｐ＜００５）；有ｐ５３蛋白表 达的胃癌病人预后差（Ｐ＜０．０１）。结论：ｐ５３蛋白对推测的胃癌病人淋巴结转移率及判断预后十分有益，将ｐ５３蛋白 表达与经典的ＴＮＭ分期结合，使该指标的应用更具科学性。

3株B_（16）黑素瘤克隆化细胞自发转移性和形态特点研究

本文用单细胞克隆技术从Ｂ＿（１６）黑素瘤母系中建立２２株克隆亚系，将其中３株（Ｂ＿（１６－１），Ｂ（１６－３），Ｂ（１６－４））分别接种于Ｃ＿（５７）小鼠腹腔。结果发现：Ｂ＿（１６－３）株细胞成瘤率高于Ｂ（１６－１）株（Ｐ＜０．０５）；自发性肺转移结节数均高于Ｂ（１６－１）、Ｂ（１６－４）株（Ｐ分别＜０．０１）；荷瘤小鼠存活时间最短（Ｐ＜０．０１）。形态观察：Ｂ（１６－３）株细胞分化差，低贴壁依赖性生长；移植瘤及转移瘤细胞核分裂像多。揭示Ｂ＿（１６）黑素瘤母系的异质性，探讨了３株瘤细胞自发转移性与形态学之间的关系。

三株B_16克隆化细胞体外增殖力及移动性比较研究

本文比较具有不同转移潜能的３个Ｂ１６黑素瘤克隆株（Ｂ１６－１，Ｂ１６－３，Ｂ１６－４）细胞体外的增殖能力和移动性。结果显示，高转移力的Ｂ１６－３株体外增殖力和移动速率显著地低于低转移力的Ｂ１６－１株（Ｐ＜０．０１）。

EBV相关胃癌中Fas/FasL的表达及其与凋亡的关系

背景与目的:大约有10%的胃癌组织EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV阳性,但EBV在胃癌发生发展中的作用尚不明确。本研究检测Fas、FasL在EBV相关胃癌(EBV-associated gastric carcinoma,EBVaGC)中的表达,及其与肿瘤细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)凋亡的相互关系。方法:采用免疫组织化学方法检测49例EBVaGC、20例EBV阴性胃癌(EBV-negative gastric carcinoma,EBVnGC)以及12例正常胃黏膜中Fas、FasL的表达,并采用TUNEL技术检测细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:12例正常胃黏膜和69例胃癌组织的Fas阳性率分别为91.7%和76.8%,FasL阳性率分别为16.7%和58.0%,差异有统计学意义(P<0.05);Fas在EBVaGC和EBVnGC组织中的阳性率分别为71.4%和90.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。FasL在EBVaGC和EBVnGC组织中的阳性率分别为63.2%和45.0%,差异有统计学意义(P<0.05),且在弥漫型中的表达高于肠型(P=0.015);EBVaGC肿瘤细胞AI显著低于EBVnGC(P=0.002);TIL在EBVaGC的数量和AI均较EBVnGC高(P<0.05),且TIL的AI值与肿瘤细胞FasL表达呈正相关(r=0.237,P=0.028)。结论:EBVaGC中FasL蛋白表达的上调及TIL凋亡的降低有利于肿瘤细胞逃避机体免疫监视,为肿瘤的发生发展创造条件。

肝癌癌变过程中端粒酶逆转录酶、c-myc、PCNA表达和细胞凋亡观察

目的观察肝癌癌变过程中端粒酶逆转录酶(h-TERT)、c-myc、增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡活性的改变,分析它们在肝癌发生发展过程中的意义。方法所用标本包括47例原发性肝细胞肝癌、52例肝炎性肝硬变及56例慢性病毒性肝炎,采用原位杂交法检测h-TERT和c-mycmRNA表达,免疫组化SP法检测PCNA表达,用3'-OH末端DNA原位标记技术进行凋亡细胞检测。结果在慢性病毒性肝炎、肝炎性肝硬变及原发性肝细胞肝癌中:h-TERT阳性表达率分别为19.6%(11/56)、82.7%(43/52)和93.6%(44/47);c-myc阳性表达率分别为12.5%(7/56)、40.4%(21/52)和55.3(26/47);凋亡细胞阳性率分别为(27.3±4.7)%、(16.5±2.6)%和(8.7±1.3)%;PCNA分别为(l7.1±2.9)%、(49.3±7.8)%和(62.5±9.1)%。h-TERT、c-myc、PCNA及凋亡细胞阳性表达率在慢性病毒性肝炎、肝炎性肝硬变及原发性肝细胞癌各组中未见相关(P>0.05)。结论肝炎及肝硬变的癌变是一个由量变到质变的过程,h-TERT和c-myc基因的过表达、PCNA升高及凋亡活性下降与肝细胞的恶性转化有关。

CK19和甲状腺过氧化物酶表达在甲状腺疾病诊断中的作用

目的探讨CK19和甲状腺过氧化物酶(TPO)在甲状腺癌和良性甲状腺病变中的表达情况,以提高甲状腺癌的诊断和鉴别诊断水平。方法应用SP免疫组织化学法检测了62例甲状腺癌(30例典型乳头状癌、22例滤泡型乳头状癌和10例滤泡型癌)和44例良性甲状腺病变(22例结节性甲状腺肿、14例甲状腺腺瘤和8例桥本氏甲状腺炎)中CK19和TPO的表达。结果CK19在甲状腺癌中表达率为96.8%,在良性甲状腺病变中极少表达或小灶性弱表达,表达率为4.5%,两者有显著性差异(P<0.01);TPO在良性甲状腺病变中的表达率为100%,在甲状腺癌中极少表达或小灶性表达,表达率为3.2%,两者有显著性差异(P<0.01)。结论CK19和TPO在甲状腺癌的病理诊断和鉴别诊断中具有重要意义和临床实用价值。

8例B细胞淋巴瘤的T细胞基因CD4 V4突变及其相关蛋白的表达

【目的】检测B细胞淋巴瘤组织中T细胞的CD4V4基因突变情况及其相应病例的Fas/FasL、CD4、bcl 2和CyclinD1蛋白表达特征。【方法】PCR SSCP技术筛选检测 5 6例B细胞淋巴瘤CD4分子的V4外显子突变状况。用免疫组化方法检测有突变的B细胞淋巴瘤组织中L2 6 ,UCHL1,CD3,Fas ,FasL ,bcl 2和CyclinD1蛋白表达情况。【结果】 8例 / 5 6例(14 2 % )T细胞CD4V4外显子有变异。其中小淋巴细胞性淋巴瘤 (smalllymphocytelymphoma,SLL)和淋巴母细胞性淋巴瘤(lymphoblasticlymphoma ,LBL)的Fas,FasL和CD4蛋白均为弱或无表达 ;滤泡性淋巴瘤 (follicularlymphoma ,FL) 3项均强表达 ;3例弥漫性大B细胞淋巴瘤 (diffuselargeBcelllymphoma ,DLBL)和 1例套细胞淋巴瘤 (mantlecelllymphoma ,MCL)Fas和FasL强表达 ,CD4无或弱表达。Fas和FasL双强表达的 4例 ,均有bcl 2和 /或CyclinD1过表达。【结论】B细胞淋巴瘤中CD4V4基因有突变 ,并提示这种突变与细胞死亡和细胞周期调控异常有关。

肺癌组织p53、HER-2蛋白的表达及意义

目的 :探讨 p5 3、HER - 2蛋白在肺癌的表达及意义。方法 :应用免疫组织化学S -P法检测肺癌组织中p5 3、HER - 2蛋白表达。结果 :p5 3、HER - 2蛋白在 5 1例肺癌组织中的阳性表达率分别为 5 8.82 % ,5 6 .86 %。其中p5 3蛋白在鳞癌、腺鳞癌和腺癌的表达无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,但有淋巴结转移者(77.2 7% )显著高于无淋巴结转移者 (4 4.82 % ,P <0 .0 5 ) ;HER - 2蛋白阳性表达在腺癌、腺鳞癌均为75 .0 0 % ,显著高于鳞癌 (34 .78% ,P <0 .0 5 ) ,与淋巴结转移也显著相关 (P <0 .0 5 )。结论 :p5 3、HER - 2蛋白阳性的肺癌患者更易发生淋巴结转移 ,HER -

蛋白酶体抑制剂MG132对NK/T淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-leu-leu-leu-CHO,三肽基乙醛)对NK/T淋巴瘤细胞的增殖和细胞周期分布的影响,研究蛋白酶体抑制剂MG132治疗NK/T细胞淋巴瘤的潜在应用价值。方法:用蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞,噻唑蓝[3(4,5二甲基噻唑2)2,5二苯基四氮唑溴盐,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡。结果:1μmol/LMG132作用24h,HANK1细胞增殖抑制率为(57.72±7.44)%,而0.1μmol/LMG132作用24h,增殖抑制率仅为(3.98±0.07)%;MG132剂量大,增殖抑制率高;1μmol/LMG132作用24h后,HANK1细胞G1和G2期细胞分别为(72.33±3.44)%和(12.86±1.29)%,对照组为(63.63±2.29)%和(7.94±1.91)%,用药组G1和G2期细胞明显高于对照组(P<0.01,P<0.05);早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞分别为(33.57±2.10)%和(16.66±0.47)%,而对照组仅为(7.18±0.82)%和(3.81±1.06)%,与对照组相比,凋亡率明显增高(P<0.01,P<0.01)。结论:MG132抑制NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖,使细胞周期G1和G2期阻滞,促进细胞凋亡,并存在剂量和时间依赖关系,蛋白酶体抑制剂MG132很可能成为治疗进展期NK/T细胞淋巴瘤的药物。

EBV LMP2A对胃癌细胞生物学特性的影响

【目的】探讨EBV LMP2A基因对人胃癌细胞生物学特性的影响。【方法】用包含LMP2A基因的逆转录病毒载体转染人胃癌细胞株(SGC7901),QRT-PCR检测LMP2A基因的表达,CCK8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕试验和transwell检测细胞迁移能力;克隆形成试验检测细胞成瘤能力。【结果】LMP2A基因转染的胃癌细胞生长速度增快、凋亡减少、迁移能力增强,在平板和软琼脂中集落形成能力增强。【结论】LMP2A基因能明显增强胃癌细胞的恶性生物学行为。

Mohs外科手术治疗颜面皮肤恶性肿瘤31例疗效观察

目的:探讨颜面部皮肤恶性肿瘤的皮肤外科手术治疗方法。方法:应用Mohs外科手术切除25例颜面皮肤基底细胞癌和6例皮肤鳞状细胞癌。结果:31例患者切口均Ⅰ期愈合,其中采用局部转移皮瓣者16例,全厚皮片移植者10例,其余患者采用直接缝合。术后随访4～26个月,患者均对手术后的外形满意,美容效果好,眼、耳、鼻未见损害,肿瘤无复发。结论:Mohs外科手术治疗颜面部皮肤恶性肿瘤具有损伤小、美容效果好、复发率低和安全性好的优点。

nm23及E-钙黏连素蛋白表达与原发性肝癌肝移植术后肿瘤复发转移的关系

目的探讨nm23及E-钙黏连素(E-cadherin)蛋白表达与原发性肝癌(肝癌)肝移植术后肿瘤复发转移的关系。方法选取2003年10月至2005年5月在中山大学附属第三医院行肝癌肝移植术的92例患者临床资料和术后病理标本。根据有否发生肿瘤复发(包括肝内复发和肝外转移)分为复发组(37例)和未复发组(55例)。病理标本为两组患者手术切除的肿瘤组织和癌旁肝组织。采用免疫组织化学(免疫组化)方法对组织标本进行检测。比较92例患者的肝癌组织和癌旁肝组织中nm23和E-cadherin的蛋白表达差异;分析nm23和E-cadherin蛋白表达与肝癌患者临床病理特征的关系;比较复发组和未复发组患者的肝癌组织中nm23和E-cadherin蛋白表达的差异。结果 92例患者中,肝癌组织nm23蛋白阳性表达49例(53%),癌旁肝组织则全部表达阳性(100%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);肝癌组织E-cadherin蛋白表达缺失39例(42%),而癌旁肝组织中有4例(4%)表达缺失,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织中,nm23蛋白表达阴性与肿瘤分化程度、有否门静脉癌栓显著相关(均为P<0.05);E-cadherin蛋白表达缺失与术前血清甲胎蛋白(AFP)水平、肿瘤大小及有否门静脉癌栓显著相关(均为P<0.05)。复发组和未复发组的nm23蛋白表达阳性率分别为32%(12/37)和67%(37/55),两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。复发组和未复发组的E-cadherin蛋白表达缺失率分别为62%(23/37)和29%(16/55),两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论肝癌组织中nm23和E-cadherin蛋白的表达对预测肝癌肝移植术后肿瘤复发转移具有重要意义。

蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞凋亡、细胞周期及UBE1基因表达的影响

【目的】探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞凋亡、细胞周期及泛素活化酶(UBE1)基因表达的影响。【方法】5μmol/L的MG132处理Raji细胞24h,形态学观察细胞生长情况;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法分析细胞凋亡、PI单染法分析细胞周期;荧光定量RT-PCR检测UBE1基因mRNA表达,Westernblot检测UBE1蛋白表达。【结果】MG132处理组细胞生长缓慢,死亡及凋亡多见,细胞凋亡率(26.06±1.10)%较对照组(0.30±0.26)%上升(P<0.05),G2/M期细胞比率(33.2±1.2)%较对照组(12.5±1.1)%升高(P<0.05);MG132处理组UBE1mRNA表达量(0.35±0.05)较对照组(1.00±0.08)下降(P<0.05),抑制率为65%;UBE1蛋白表达量(0.93±0.07)较对照组(1.62±0.22)下调(P<0.05),蛋白表达率为(58±6)%。【结论】蛋白酶体抑制剂MG132可诱导Raji细胞发生凋亡和G2/M期阻滞,同时抑制UBE1的mRNA和蛋白表达,机制仍待深入研究。