盐酸普罗帕酮片及注射液的HPLC测定

建立了测定盐酸普罗帕酮片及注射液含量与有关物质的 HPL C法。采用 Shim - pack CL C ODS色谱柱 ,流动相为乙腈 - 0 .0 1mol/ L磷酸氢二铵溶液 (2∶ 1,用磷酸调节 p H值至 4.6 ) ,检测波长为 2 46 nm。线性范围为 30～ 2 70μg/ ml,相关系数为 0 .9999,片剂和注射液的平均回收率分别为 10 1.4% (RSD =1.4% )和 10 1.3% (RSD =0 .96 % ) ;盐酸普罗帕酮、环氧酚和 AK- 2 6的最低检出量分别为 0 .3、0 .17和 0 .39ng。

乳果糖口服液中乳果糖及有关物质的高效阴离子交换色谱法测定

建立了高效阴离子交换色谱-积分安培检测器法测定乳果糖口服溶液中乳果糖及其5种有关物质。采用CarboPac PA20色谱柱及预柱,以250mmol/L氢氧化钠溶液-100mmol/L乙酸钠溶液-水(3︰3︰96)为流动相,金电极为工作电极,银-氯化银电极为参比电极。乳果糖及其5种有关物质分别在3.2～28.8、0.32～2.88、0.10～0.86、0.22～1.98、0.48～4.32和0.03～0.29μg/ml浓度范围内线性关系良好,检测限为0.02～0.04ng,回收率为97.5%～103.4%,RSD为0.5%～2.2%。

蛋白质含量测定方法的规范化研究

组成蛋白质的基本单位是氨基酸，氨基酸通过脱水缩合形成肽链。蛋白质是由一条或多条多肽链组成的生物大分子，其含量测定是生化药品研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前其常用的测定方法有凯氏定氮法、福林酚法、双缩脲法。

人乳铁蛋白转基因和非转基因山羊奶中蛋白质含量与必需氨基酸总量的检测与分析

目的测定人乳铁蛋白转基因山羊奶及非转基因山羊奶中蛋白质含量和7种必需氨基酸总量,考察两种羊奶的上述两种成分是否存在显著差异,为人乳铁蛋白转基因山羊奶的实质等同性评价提供依据。方法采用凯氏定氮法测定两种山羊泌乳30、60、90d采集的羊奶中各90个样本的蛋白质含量;采用OPA-FMOC柱前衍生高效液相色谱法测定山羊奶中的7种必需氨基酸总量,用SPSS软件对测定结果进行统计学处理。结果泌乳30、60、90d采集的样本中,转基因山羊奶的平均蛋白质含量分别为43.41、35.98、35.64g/L,7种必需氨基酸的平均总量分别为17.73、14.91、14.78g/L;非转基因山羊奶的平均蛋白质含量分别为52.22、49.06、41.26g/L,7种必需氨基酸的平均总量分别为21.38、21.39、18.09g/L。结论在3个时间段采集的样本中,转基因与非转基因山羊奶中的蛋白质含量均存在显著性差异(P≤0.05)。除30d天采集的样本外,60d及90d采集的样本中,两种羊奶的7种必需氨基酸总量均存在显著性差异(P≤0.05)。

枸橼酸莫沙必利及其制剂的HPLC测定

目的 建立枸橼酸莫沙必利及其颗粒和片剂含量测定的HPLC ,为原料和制剂的质量控制提供有效的分析手段。方法 色谱柱 :DiamonsilC18柱 ;流动相 :甲醇 水 冰醋酸 三乙胺 (6 0 0∶40 0∶0 .5∶1) ;检测波长 :2 74nm。结果 制剂中辅料和有关物质对主药无干扰 ,枸橼酸莫沙必利在浓度 39.6 2～ 35 6 .6 μg·mL-1范围内线性关系良好 ,相关系数r=0 .9999(n =5 ) ;颗粒与片剂的平均回收率 (n =6 )分别为 10 0 .2 % (RSD =0 .70 % ) ,10 0 .9% (RSD =1.1% )。结论 本法专属性强 ,准确 ,简便。

13种氨基酸和牛磺酸的柱前衍生化HPLC测定

建立了OPA-FMOC柱前衍生化HPLC法同时测定复方氨基酸注射液中13种氨基酸和牛磺酸的含量。采用C18柱,梯度洗脱,自动在线衍生,检测波长338/262nm。结果表明13种氨基酸和牛磺酸均线性关系良好(r>0.9992),各组分的平均回收率为99.2%～101.5%,RSD为0.11%～0.92%(n=9)。

单核细胞激活实验在疫苗类生物制品热原检测中的应用研究

目的:研究人早幼粒白血病HL-60单核细胞激活实验在疫苗类生物制品热原检测中的应用。方法:将HL-60单核细胞分别与不同浓度热原(内毒素、酵母多糖和脂壁酸)标准品溶液、样品溶液进行孵育,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测孵育体系中IL-6的含量。以热原标准品浓度为横坐标,IL-6量为纵坐标做标准曲线,将样品测得的IL-6值代入该标准曲线,计算样品中热原的含量。选取处于标准曲线中间点的热原浓度,作为样品干扰试验中添加的热原浓度,参照《中国药典》细菌内毒素检查法中光度测定法中的干扰试验,用HL-60/IL-6单核细胞激活实验检测三种热原在流感疫苗、冻干甲型肝炎减毒活疫苗、冻干人用狂犬病疫苗、麻腮风联合减毒活疫苗、麻疹腮腺炎联合减毒活疫苗、双价肾综合征出血热灭活疫苗和A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗7种疫苗中的回收率及其热原含量。结果:1不同浓度内毒素、酵母多糖和脂壁酸三种热原标准品刺激HL-60细胞后,该细胞分泌IL-6的量与热原浓度线性良好,R^2分别为0.996,0.993,0.997。2该方法测定三种热原在以上7种疫苗中的回收率,回收率均在50%~200%之间。3以上方法测2个厂家10个批号A群C群脑膜炎疫苗中的内毒素含量,厂家A的6批样品内毒素平均值为134.73 EU·ml^(-1),厂家B的4批样品内毒素平均值为40.75 EU·ml^(-1)。该方法检测其他6种疫苗中热原含量,结果均为阴性。结论:该方法适用于以上7种疫苗样品的热原检测。

生化药注射剂的质量评价策略与技术要点

生化药注射剂具有生物多样性和组成不确定性的特点,是风险较高的一类品种。该文从国内制剂现状和相关技术法规要求方面,阐述了生化药注射剂的评价策略,并对该类制剂的质量评价要点和技术方法展望进行了分析和总结,以期为生化药注射剂一致性评价或再评价工作的开展提供参考。

甾醇组成分析结合化学计量学识别8种植物油脂

探讨了甾醇组成分析结合化学计量学识别植物油脂种类的可行性。从植物油脂中提取不皂化物,并经液相色谱分离,再经衍生化后通过气相色谱测定了8种植物油脂共21批样品的甾醇组成,并以15种甾醇组分的含量作为基础数据,进行聚类分析与主成分分析。结果表明,2种化学计量学方式对甾醇组成的分析结果基本一致,都可以对植物油脂进行识别分析。因此,化学计量学是植物油脂中的甾醇组成分析的有效方法,甾醇组成可作为植物油脂种类识别的测量指标之一。

复方氨基酸注射液中乙酸的离子色谱法测定

建立了离子色谱法测定复方氨基酸注射液中的乙酸。采用IonPac ICE-AS1色谱柱和AMMS-ICE II微膜抑制器,以0.5mmol/L辛烷磺酸为淋洗液,以5mmol/L四丁基氢氧化铵为再生液,采用电导检测器。结果乙酸在0.3～2.7mmol/L浓度范围内线性关系良好,定量限为8.0×10-6mmol。4种复方氨基酸注射液中乙酸的平均回收率为98.7%～101.2%。

利用限制性片段长度多态性技术鉴别梅花鹿骨种属来源的研究

目的:建立一种基于限制性片段长度多态性技术鉴别梅花鹿骨粉的种属来源的方法。方法:对脱钙后的动物骨粉样品进行核糖核酸提取,通过聚合酶链式反应对梅花鹿特征片段进行扩增,并通过限制性片段长度多态性分析进一步对其种属来源进行确证。结果:通过对特征片段进行聚合酶链式反应扩增,可将梅花鹿及马鹿来源的骨粉样品与牛、猪、狗等动物骨粉样品进行区分。通过对限制性内切酶XbaI进行酶切后的片段长度进行分析,可进一步区分梅花鹿与马鹿来源的骨粉样品。结论:建立了一种基于限制性片段长度多态性技术的梅花鹿骨粉种属来源的鉴别方法。

肝素钠中猪、牛及羊源性成分的PCR检测

目的:采用常规PCR及实时荧光PCR方法检测肝素钠粗品及原料药中的猪、牛、羊源性成分。方法:利用土壤基因组DNA提取纯化试剂盒从肝素钠粗品及原料药中提取残留核酸,以其为模板,通过常规PCR及实时荧光PCR法进行动物源性成分鉴定。以提取猪肝、牛心、羊肝的DNA为对照品,验证所建立的常规PCR法及实时荧光PCR法的特异性及灵敏度,并用以上两种方法对3批肝素钠粗品及4批肝素钠原料药进行动物源性成分鉴定。结果:采用的两种PCR方法对猪、牛、羊源性成分的鉴定具有特异性,且灵敏度分别达到pg级及10-1pg级。通过土壤基因组DNA提取纯化试剂盒成功从肝素钠粗品及原料药中提取获得适用于PCR反应的模板DNA,显示7批肝素钠样品均为猪源性产品,且未检出牛、羊源性成分污染。结论:建立了一种快速有效地从肝素钠粗品及原料药中提取DNA的方法,并成功通过两种PCR方法对其猪、牛、羊源性成分进行鉴定,为监督药品规范生产,保证用药安全提供了技术支持。

3种方法测定玻璃酸钠的分子量比较

目的:比较3种方法测定玻璃酸钠注射液中玻璃酸钠分子量的结果。方法:采用黏度法测定玻璃酸钠注射液中玻璃酸钠的分子量,并采用体积排阻色谱法(SEC)及多角度激光光散射仪与体积排阻色谱法联用(MALLS-SEC)对其分子量及分子量分布(Mw/Mn)进行测定。结果:MALLS-SEC法与黏度法的测定结果较为接近,且同时可测定样品的Mw/Mn。3批样品分子量4次测定的平均值分别为991 962,1 007 438,990 232;RSD分别为6.5%,4.6%,2.2%(n=4)。分子量分布4次测定的平均值为1.6,1.6,1.6;RSD为7.2%,3.2%,3.2%(n=4)。结论:MALLS-SEC法测定准确度及精密度较好,可用于玻璃酸钠样品的质量控制。

柱前衍生化HPLC法测定酱油中(半)胱氨酸的含量

目的探讨建立柱前衍生HPLC法测定胱氨酸和半胱氨酸总含量的方法：方法以二硫代二丙酸（DTDPA）及异硫氰酸苯酯（PITC）为柱前衍生剂，采用反相高效液相色谱法测定酱油中胱氨酸和半胱氨酸总含量。通过对反应温度、反应时间、衍生溶液体积及浓度等影响两步衍生反应效率的因素的研究，获得了优化的实验参数。结果在酱油基质中进行方法认证，线性范围为0．02～1．00mg／ml（R^2=0．9999）。日内和日间精密度RSD〈8％；日内和日间准确度（回收率）分别在100．1％～101．3％和96．4％～103．4％之间，结论本方法适用于酱油中的（半）胱氨酸检测，为鉴别“毛发水酱油”提供了有效的监测手段。

基于细胞系的体外热原检测方法研究进展

19世纪40年代以来,随着静脉注射药物的发展,热原检测技术相继被引入到各国药典中,以保证用药安全。目前,广泛采用的热原检测方法包括家兔热原试验和细菌内毒素试验（LAL试验）。但是这两种方法均存在许多不足之处：家兔试验只能进行定性分析且灵敏度低、成本高,对化疗药物、细胞因子药物、免疫抑制药等影响家兔发热的药物适用性不强;细菌内毒素试验只能特异性地检测细菌内毒素,不能检测革兰阳性菌、真菌和病毒来源的热原物质。

HL60-IL6单核细胞活化反应法在注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ热原检测中的应用研究

目的:探讨HL60-IL6单核细胞活化反应法在注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ热原检测中的应用。方法:参照2015年版中国药典通则1193,确定注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ热原测定限值及最小有效稀释浓度。采用细胞增殖抑制试验、IL-6 ELISA试剂盒干扰试验和热原干扰试验分别探讨对HL60细胞生长、对IL-6和热原测定无影响的供试品浓度,进而确定适用于注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ体外热原测定的HL60-IL6方法。用该方法对1个厂家7批注射用肝水解肽、1个厂家6批注射用辅酶Ⅰ进行热原测定。结果:注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ最小有效稀释浓度分别为0.003 mg·ml^-1和0.0002 mg·ml^-1;对HL60细胞增殖无影响的最高浓度分别为1 mg·ml^-1和10 mg·ml^-1,对IL-6和热原测定无影响的最高浓度均为0.1 mg·ml^-1。根据以上实验结果确定了适合该方法的注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ浓度均为0.1 mg·ml^-1。用该方法对1个厂家7批注射用肝水解肽、1个厂家6批注射用辅酶Ⅰ供试品进行热原测定,结果均为阴性。结论:HL60-IL6方法适用于注射用肝水解肽和注射用辅酶Ⅰ热原测定。

白细胞黏附抑制实验在核糖核酸药物免疫活力测定中的应用研究

目的:建立核糖核酸类药物免疫活力测定方法。方法:选用小鼠白细胞黏附抑制试验,对实验重要参数,如小鼠品系、药物作用浓度,黏附时间,缓冲液成分和细胞密度等进行探讨研究,初步建立了该类药物的免疫活力测定方法。并用该方法对核糖核酸Ⅰ、核糖核酸Ⅱ和核糖核酸Ⅲ各2批样品进行了免疫活力测定。结果:确定了适合该类产品免疫活力测定方法的实验参数:小鼠品系对实验结果无影响,药物作用浓度为10 mg·ml-1,黏附时间为2 h,缓冲液中必须含钙镁离子,细胞密度约为4×107个/ml。用该方法对该类产品进行免疫活力测定,3次重复实验,结果均合格,RSD均低于20%。结论:白细胞黏附抑制试验可作为评价核糖核酸类药物免疫活力的方法。

GC法直接测定药用辅料油酸乙酯的脂肪酸组成

目的:建立气相色谱法直接测定药用辅料油酸乙酯的脂肪酸组成。方法:采用聚乙二醇毛细管柱HP-INNOWAX(0.25 mm×30 m,25μm),起始温度为178℃,维持2 min,以每分钟3.3℃的速率升温至240℃,维持2.5 min,进样口温度为250℃,检测器温度为270℃。结果:油酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯和亚油酸乙酯能完全分离,线性关系好,均大于0.9999,且方法重复性、灵敏度好。结论:使用该方法对供试品中油酸乙酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯和亚油酸乙酯进行测定,可全面有效地控制药用辅料油酸乙酯的质量。

酶联免疫法检测绒促性素和尿促性素中乙肝表面抗原的规范化

目的:规范检测绒促性素(HCG)和尿促性素(HMG)中乙肝表面抗原(HBsAg)的酶联免疫方法。方法:用5个厂家生产的HBsAg诊断试剂盒,按各厂家试剂盒说明书进行操作,分别检测3个厂家生产的11批HCG和2个厂家生产的8批HMG中的HBsAg,同时进行回收率试验。结果:5个厂家生产的试剂盒检测HCG中HBsAg的回收率为66%～125%,平均回收率为88%,HMG中HBsAg的回收率为64%～101%,平均回收率为84%。结论:用HBsAg诊断试剂盒(酶联免疫法)检测HCG和HMG中HBsAg的同时必需进行回收率试验,回收率符合要求前提下的检测结果才是可信的。

体外生物学活性测定法试验数据分析流程探讨

目的:探讨建立规范的体外生物学活性测定法试验数据分析流程。方法:参照美国药典通则<1034>介绍的生物检定试验数据分析流程,选择以抗TNF-α全人源单克隆抗体的体外生物学活性试验数据分析为例,根据其国家药品注册标准、企业内控标准及历史数据制定分析流程中系统适用性和样品适用性等各项评价指标的可接受标准,对1批抗TNF-α全人源单克隆抗体3次独立试验数据按照拟定标准进行分析和评价。结果:抗TNF-α全人源单克隆抗体3次独立测定的结果均符合各项系统适用性和样品适用性评价指标要求,3次独立结果合并计算的效价值和可信区间可作为有效结果出具报告值。结论:本研究参照美国药典尝试建立了规范的抗TNF-α全人源单克隆抗体体外生物学活性试验数据分析流程,以期为其他药品的生物学活性测定试验数据分析提供参考。