Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立

参考GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了一对引物,建立了适合DHV-Ⅰ快速检测的RT-PCR检测方法。以该方法对实验室分离并保存的DHV强毒株Z10株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到了预期大小为699 bp的目的片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果与GenBank中的DHV-Ⅰ的相应基因序列比对分析,同源性均达90%以上,表明为DHV-Ⅰ的基因序列,对NDV,IBDV,DPV和GPV等常见病毒扩增结果为阴性。该方法敏感性检测结果表明,最低RNA模板检出量为24 pg。表明所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于I型鸭病毒性肝炎病毒的快速诊断。

Race法扩增4株鸭肝炎病毒3′末端序列及其克隆分析

利用3’RACE方法扩增并克隆了4株鸭肝炎病毒（DHV）（ZYM株、Z05株、Z07株和Z10株）的基因组的3’末端真实序列，包括部分非结构蛋白（3D）基因以及紧接着3D基因下游的3’端非编码区（untranslated region，UTR）和poly（A）尾巴。测序结果表明，扩增的特异性片段长度为597nt（不包括polyA尾巴）。各毒株3’UTR均为315nt，位于终止密码子TGA之后，比对分析结果表明各毒株间的同源性较高；4株DHV 3’末端核苷酸序列（不包括polyA尾巴）之间的同源性为96．3％～100％，而与参考毒株之间的同源性为93．5％～99．7％。在系统发生进化树上，各毒株亲缘关系较近。

微生物原生质体融合技术研究进展

原生质体融合技术在遗传学、动植物远缘杂交育种、生物学、免疫学、兽医学以及医药、食品、农业等方面都有广泛的应用价值,文章就原生质体制备、再生及其融合过程中的影响因素做了综述,另外还对原生质体融合方法和融合子的筛选方法进行了比较,为选择适宜有效的诱导融合方法和筛选方法提供依据。

鸭疫里默氏杆菌原生质体制备与再生的研究

以耐药标记的鸭疫里默氏杆菌TXRA1(Chlr,Erys)为亲本菌株,在DNase I始终存在的条件下,采用Lysozyme-EDTA法制备原生质体,然后在高渗琼脂平板上再生。系统地优化了影响原生质体制备及再生的各种条件,摸索出鸭疫里默氏杆菌TXRA1以Lysozyme 0.1 g/L作用20 min后补加EDTA至终浓度为0.01 mol/L继续作用45 min为最佳试验条件,并成功获得了92%的原生质体制备率和38.77%的再生率。

大肠杆菌O78原生质体制备与再生的研究

以耐药标记的鸭大肠杆菌ZBO78(Eryr,Chls)为亲本菌株,在DNaseⅠ始终存在的条件下,采用溶菌酶-EDTA法制备原生质体,然后在高渗琼脂平板上再生。通过优化溶菌酶-EDTA的工作浓度与作用时间、原生质体不同的处理方式和再生培养基中蔗糖浓度等条件,摸索出ZBO78以0.2g/L溶菌酶作用20min后补加EDTA至终浓度为0.01mmol/L继续作用16min为最佳试验条件,并成功获得了91.94%的原生质体制备率和37.29%的再生率,为下一步进行融合试验提供了依据。

基于定向进化技术提高地衣芽孢杆菌L-天冬酰胺酶活性

为提高地衣芽孢杆菌L-天冬酰胺酶活性,通过定向进化技术对其进行分子改造。经过两轮易错聚合酶链式反应和一轮DNA shuffling,从19 100多个突变株中筛选到突变体S10、S16和S21,其酶比活力较野生型分别提高了106%、74%和43%,且突变酶K_(cat)/K_m都有所增大。其中,突变体S10氨基酸序列发生3个突变,K43E、N67S和I269L。三维模拟结果显示,第43位氨基酸突变为谷氨酸、第67位氨基酸突变为丝氨酸,可能提高了底物亲和力和催化效率,从而提高酶活性。圆二色谱分析表明,相比野生酶,突变酶的α-螺旋数减少、无规则卷曲有所增加,表明其刚性略有降低,柔性有所增加。利用定向进化策略能够有效地提高地衣芽孢杆菌L-天冬酰胺酶活性。

政府会计制度改革对事业单位的影响

2017年我国财政部颁布了《政府会计制度——行政事业单位会计科目和报表》(新政府会计制度),并定于2019年1月1日实施。会计制度的改革对于推动落实党的十九大精神有着重要的作用,对于推动财税制度的变革同样有着非凡的意义。本文主要阐述了实施新政府会计制度对事业单位的影响。

企业内部会计控制制度的必要性及其对策

企业内部会计控制是内部控制的重要组成部分,对于提高企业内部工作效率具有重要的作用。本文在论述建立企业内部会计控制制度必要性的基础探讨在我国建立企业内部会计控制体系的方法和对策。

基于定向进化技术提高巨大芽孢杆菌谷氨酸脱羧酶活性

为提高巨大芽孢杆菌谷氨酸脱羧酶活性,通过定向进化技术对其进行酶工程改造。经过二轮易错聚合酶链式反应,从13 000多个突变株中筛选到突变株A5-3、E2-4、E3-11,相对于野生型,其酶比活力提高了157%、115%、97%,且K_(cat)/K_m都有所增大。其中A5-3氨基酸序列发生了2个突变(A55D和D451E)。三维模拟结果表明,第55位丙氨酸突变为天冬氨酸很可能为酶促反应提供H^+,从而加快酶促反应效率;突变株E2-4第34位由亮氨酸突变成谷氨酰胺,一定程度上改善了酶的热稳定性;突变株E3-11的第325位由丙氨酸突变成丝氨酸有利于蛋白内部形成更多氢键,增大了该部位的柔性,更有利于氨基酸残基之间发生相互作用。圆二色谱分析表明,突变株与野生型具有相似的三维结构,相比于野生酶,突变酶的α-螺旋减少,无规则卷曲增加,说明突变酶刚性有所下降而柔性增加。利用定向进化技术可以明显改善谷氨酸脱羧酶的酶活性,为其工业化的应用提供实验参考。

财政局加强会计预算管理的有效措施

随着我国市场经济的不断发展，新的经济类型层出不穷。为财政局带来了新的挑战的同时也提醒着财政局应该首先抓紧财务预算。本文将从如何在财政局现存的问题上找出加强会计预算管理有效措施进行具体分析。

管理会计在地方财政预算管理中的应用

本文主要分析了管理会计与财政预算管理的相关性,并从实践角度出发,对管理会计技术在地方财政预算管理中的应用提出几点对策与建议。

浅谈财务报告的缺陷和改进

传统财务报告模式是工业经济的产物，在新的经济环境下，它的局限性日益凸现。现行财务报告无法适应知识经济需要的典型表现，在于对一些非财务信息、前瞻性信息、不确定性信息以及一些潜力巨大的企业巨额无形资产在财务报告中不能得到反映，从而无法满足信息使用者预测的需要。

基层畜牧兽医技术管理存在的问题及对策探讨

基层畜牧兽医动物防疫工作的开展对于促进我国畜牧业的发展有着极为重要的作用。然而,当前动物防疫检疫工作在实践过程中仍然存在一些问题,导致防疫检疫工作没有落实到位。在本文中,笔者将阐述目前基层畜牧兽医动物防疫工作中存在的问题,并提出相关解决对策。

鸡免疫的有关知识

鸡的传染病严重影响养鸡业的发展,如禽流感、鸡新城疫等传染病会在鸡群中快速传播、流行,进而导致鸡的大量死亡或蛋鸡生产性能急剧下降,给养鸡场造成经济损失。为减少养鸡业的经济损失,应加强鸡的饲养管理和疫病预防等综合防控措施。

动物体内营养物质的代谢

动物营养不良会造成机体的组织器官受到影响,造成组织器官生物形态和生理活动不正常,从而发生各种营养不良性疾病,因此研究动物营养物质的代谢,了解动物营养不良对动物机体的影响,才能正确认识和区别健康和疾病状态动物的表现。

鸭肝炎病毒浙江分离株全基因组测序及其VP1基因的序列分析

利用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术及RACE方法扩增得到鸭肝炎病毒（DHV）浙江分离株Z10的全基因（5′,3′末端序列用RACE法扩增）及4株DHV分离株的VP1基因。结果表明,分离株Z10的全基因片段长7 689 bp,有1个大的开放读码框（ORF）,ORF位于626~7 326位核苷酸,编码2 249个氨基酸。Z10分离株全基因序列与GenBank登录的6株具有代表性的DHV核苷酸序列比对,同源性94.5%~98.4%;所测得的DHV分离株的VP1基因的序列与目前GenBank上发表的具有代表性的DHV-ⅠVP1基因进行比对分析,结果4株Ⅰ型DHV的VP1基因cDNA长度均为714 bp,编码238个氨基酸。4株DHV-Ⅰ之间VP1基因的核苷酸序列同源性为93%~99.7%,氨基酸序列同源性为95.0%~100%;与参考毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为92.2%~100%,氨基酸序列同源性为95.0%~100%;表明各分离毒株的亲缘关系较近,属于同一基因群。

鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病多重PCR诊断方法的建立

参考GenBank中鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,应用PrimerPremier5.0软件在二者高度保守区设计了2对引物,建立了适合鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的快速检测的多重PCR检测方法。以该方法对已分离并保存的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌进行PCR扩增,分别扩增出与试验设计相符的670、408bp的特异性DNA片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果表明分别为鸭疫里默氏菌和大肠杆菌OmpA基因序列。该方法对鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的检测下限分别为4×104CFU/mL和3×104CFU/mL。表明所建立的PCR方法具有特异、快速和敏感的特点,可用于诊断鸭疫里默氏菌、大肠杆菌以及两者的混合感染。

鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌双型融合菌株的构建

以耐药标记的鸭疫里默氏杆菌TXRA1(Chlr,Erys)和大肠杆菌ZBO78(Eryr,Chls)作为亲本菌株,在DnaseⅠ始终存在的条件下,采用Lysozyme-EDTA法制备2菌株的原生质体,原生质体制备率分别达到了92.00%和91.94%,再生率分别达到了38.77%和37.29%。通过PEG法进行2菌株原生质体融合,成功获得31株具有双亲本耐药性(Chlr,Eryr)的融合菌株,并应用双重PCR方法对融合株的部分外膜蛋白A(ompA)基因进行扩增,其中有11株融合菌株能够表达2亲本的ompA基因,有20株仅表达亲本大肠杆菌的ompA基因。融合菌株的形态、染色特性和生化特性等介于2亲本菌株之间,连续传15代后融合菌株的上述性状仍能够稳定遗传。