UPLC-TQD-MS法探讨关木通配伍干姜减毒存效机制

目的超高效液相色谱-三重四级杆质谱串联(UPLC-TQD-MS)法探讨关木通配伍干姜减毒存效机制。方法关木通配伍干姜的分析采用ACQUITYUPLC BEHC8色谱柱(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm);流动相1 mmol/L乙酸铵(含0. 1%乙酸)-甲醇;体积流量0. 2 m L/min;柱温30℃;采用电喷雾离子源正离子模式(ESI+)和多反映监测模式(NRM)进行质谱分析。结果马兜铃酸A在0. 809~51. 750μg (r=0. 999 5)的范围内线性关系良好,平均加样回收率为98. 18%,RSD为1. 4%。关木通-干姜(1∶2)配伍使用时关木通中马兜铃酸A显著降低,降低率达到87. 79%,对大鼠的利尿作用没有变化,对大鼠急性肾功能损伤程度明显低于关木通生品组。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于关木通配伍干姜的质量控制。

6-姜酚对马兜铃酸A诱导的HK-2肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的研究6-姜酚对马兜铃酸A诱导的HK-2肾小管上皮细胞损伤的保护作用。方法细胞分为正常组、马兜铃酸A组、6-姜酚+马兜铃酸A共处理组,用CCK-8法及FDA活细胞荧光染色法检测细胞存活和形态,Hoechst法观察细胞凋亡,比色法检测细胞上清液SOD、MDA、GSH、GSH-Px水平,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65、caspase-3及cleaved-capase-3蛋白的表达。结果与马兜铃酸A组相比,6-姜酚+马兜铃酸A组能够升高HK-2细胞存活率,改善细胞形态,减少细胞凋亡数目,降低细胞上清液中MDA、GSH-Px的水平,并增强SOD、GSH水平,降低HK-2细胞内p-NF-κB p65、cleaved-capase-3蛋白表达。结论6-姜酚对马兜铃酸A诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用。

UPLC-MS/MS法同时测定垂盆草总黄酮中8种成分的含量

目的:建立同时测定垂盆草总黄酮中金丝桃苷、槲皮苷、木犀草苷、山柰酚、槲皮素、芦丁、木犀草素、异鼠李素含量的方法。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法。色谱柱为ZOBAX SB C_(18),流动相为甲醇-5 mmol/L甲酸铵水溶液(45∶55,V/V),流速为0.4 m L/min,柱温为30℃,进样量为2μL;离子化模式为电喷雾电离,离子源温度为400℃,脱溶剂温度为300℃,脱溶剂流速为600 L/h,毛细管电压为3 000 V,雾化气压力为45 psi,工作模式为多反应监测模式,检测方式为负离子模式。采用建立的方法测定3批垂盆草总黄酮中8种成分的含量。结果:金丝桃苷、槲皮苷、木犀草苷、山柰酚、槲皮素、芦丁、木犀草素、异鼠李素检测质量浓度线性范围分别为10.0~640.0、0.5~32.0、4.5~288.0、8.0~512.0、50.0~3 200.0、2.0~128.0、12.5~800.0、25.2~1 612.8 ng/m L(r≥0.991 4),检测限分别为5.0、0.25、2.25、4.0、25.0、1.0、6.25、12.6 ng/m L,定量限分别为10.0、0.5、4.5、8.0、50.0、2.0、12.5、25.2ng/m L;精密度、稳定性(24 h)、重复性试验的RSD均≤4.3%(n=6),加样回收率为95.9%~100.6%,RSD为1.5%~3.8%(n=6)。3批垂盆草总黄酮中金丝桃苷、槲皮苷、木犀草苷、山柰酚、槲皮素、芦丁、木犀草素、异鼠李素的含量分别为507.88~560.37、42.95~50.36、63.52~71.80、1 695.10~1 753.27、10 569.28~10 612.99、25.76~30.13、2 795.22~2 877.43、4 869.55~4 971.30μg/g。结论:建立的方法可用于垂盆草总黄酮中8种成分含量的同时测定。

基于不同煎煮配伍法探讨关木通配伍干姜的减毒机制

目的比较干姜、关木通不同煎煮方法对大鼠急性肾功能损伤的影响,并在体外观察其对正常人肾小管上皮细胞(human kidney cell-2,HK-2)的影响,探讨关木通配伍干姜的减毒机制。方法将大鼠按随机数字表法分为空白组、阳性对照组、关木通组、合煎组、分煎组,每组8只。采用生理盐水灌胃法制备水负荷大鼠模型。各给药组灌胃相应药物后,收集大鼠尿液,测定24 h尿量。将大鼠按随机数字表法分为空白组、关木通组、合煎组、分煎组,每组8只。各给药组灌胃相应药物2周后,采用7600P全自动生化分析仪检测大鼠血清BUN、SCr水平及尿液中尿肌酐(urine creatinine,UCr)、尿蛋白(urinary protein,PRO)水平,采用HE染色观察各组大鼠肾组织病理学改变。体外培养HK-2细胞,并分为对照组、关木通组、合煎组、分煎组,相应药物干预24 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,赫斯特染色(Hoechst)法观察细胞凋亡情况。结果各组大鼠24 h排尿量比较差异无统计学意义(P>0.05);与关木通组比较,合煎组大鼠肾脏系数[(0.0101±0.0058)比(0.0133±0.0078)],血清SCr[(38.52±0.58)μmol/L比(46.61±0.72)μmol/L]、BUN[(8.55±0.12)mmol/L比(10.21±0.30)mmol/L],尿液UCr[(52.21±0.89)μmol/L比(57.71±0.67)μmol/L]、PRO[(29.89±0.18)mg/L比(34.23±6.05)mg/L]水平降低(P<0.05);合煎组HK-2细胞存活率[(72.45±3.70)%比(55.92±8.39)%]升高(P<0.01),细胞凋亡率[(7.9±2.6)%比(31.6±9.1)%]降低(P<0.01)。结论采用传统的合并煎煮法干姜配伍关木通可达到一定的减毒作用,而采用分煎合用法煎煮的配伍方法不能达到减毒作用。