嗜肺军团菌血清I型菌株随机扩增多态性DNA指纹图谱研究

目的采用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法研究我国58株嗜肺军团菌血清1型(Lp1)菌株的基因型特征。方法58株嗜肺军团菌血清1型菌株来自北京和深圳市的集中空调冷却塔水和温泉水,随机引物采用5’-CGGCGGCG-GCGG-3’序列,分析Lp1型军团菌RAPD基因型和温度、pH值的关系。结果58株Lp1型菌株共分为17个RAPD基因型。与集中空调冷却塔水Lp1型菌株相比,温泉水分离的菌株基因型具有较高的多态性。深圳市29株集中空调冷却塔水分离的Lp1菌株,共呈现出3个RAPD基因型,北京市24株来自温泉水的Lp1菌株分为12个RAPD型,5株来自集中空调冷却塔水的Lp1型菌株分为两个RAPD型。温泉水Lp1菌株的基因型差异和水温度和pH值无明显的关联。结论RAPD分型方法可用于我国Lp1菌株的基因分型,不同地区和来源的Lp1型军团菌菌株具有特征性的RAPD基因型,温泉水中分离的Lp1菌株较集中空调冷却塔水分离菌株基因型呈现较高的基因多态性。

传染性非典型肺炎临床诊断病例血清标本不同非典型肺炎病原体抗体检测

目的研究传染性非典型肺炎(SARS)临床诊断病例血清标本中常见的不同非典型肺炎病原体感染抗体分布情况。方法选取2003年SARS流行期间90份SARS临床确诊病例血清标本和40份健康志愿者血清标本进行血清抗体检测。结果90份临床诊断的传染性非典型肺炎(SARS)病例急性期血清标本中,21.1%(19/90)标本SARS抗体阳性,79.9%(71/90)标本SARS抗体阴性。肺炎支原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、军团菌、肺炎衣原体等抗体检测呈现不同的分布。结论2003年SARS流行期间,SARS抗体阴性的传染性非典型肺炎临床确诊病例可能存在或合并其它病原体感染。

16SrRNA基因序列分析用于诊断病原性细菌感染初步研究

目的建立一种可适用于多种病原菌检测的方法,以提高病原学诊断率,有利于传染病的病原学监测。方法细菌16SrRNA基因通用引物对直接从血液、尿液、脑脊液标本中提取的细菌DNA进行PCR扩增,并对16SrRNA基因扩增产物进行克隆和序列分析。结果检测了28份临床标本,16SrRNA基因序列分析与尿液细菌培养结果不完全吻合;血液和脑脊液的16SrRNA的检出率均高于细菌培养。结论16SrRNA基因检测分析和细菌培养均具有良好的诊断效果,而针对16SrRNA基因的PCR直接扩增核酸并进行序列分析可对分离培养阴性的标本进行有效的补充诊断,可检测到多种病原菌如肠球菌,大肠杆菌,表皮葡萄球菌,牛链球菌,猪链球菌,布鲁氏菌,表皮葡萄球菌和脑膜炎球菌等,为疾病的诊断提供良好的线索。

49株脑膜炎奈瑟菌体外抗菌药物敏感性检测

目的了解2005-2006年中国脑膜奈瑟菌分离株(Neisseria meningitides,Nm)的抗菌药物敏感性变化趋势,为选择抗菌药物对流行性脑脊髓膜炎(流脑)患者进行治疗提供参考。方法采用肉汤稀释检测最低抑菌浓度(MICs)方法、药敏纸片扩散(K-B)法和E-test试纸条检测方法对本实验室收集的49株(16株A群、33株C群)2005-2006年分离的患者Nm菌株进行体外抗菌药物敏感性检测。结果16株A群Nm菌株对复方新诺明、四环素、左氧氟沙星、萘啶酸4种抗菌药物耐药,对环丙沙星耐药或中度敏感。33株C群Nm菌株对复方新诺明耐药,31株(93.9%)C群菌株对萘啶酸耐药,20株(60.6%)C群菌株对左氧氟沙星耐药,17株(51.5%)C群菌株对环丙沙星耐药。分别发现对青霉素不敏感的4株A群和1株C群Nm菌株。结论2005-2006年,中国的A群和C群Nm菌株对磺胺类药物和喹诺酮类药物普遍耐药,此两类药物不适合中国流脑的临床用药及人群预防性给药。K-B药敏纸片和肉汤稀释MICs及E-test方法具有较高的一致性。

上海口岸管道水中军团菌污染状况及其细胞内生长能力研究

目的 了解口岸公共场所管道水军团菌污染状况和细菌在细胞内的生长能力.方法 采集上海市口岸管道水132份,采用GVPC（军团菌选择性培养基）培养计数法对水样中军团菌进行定性和定量分析.用小鼠巨噬细胞J774细胞对分离菌株进行菌株致病性研究.结果 平板培养法检测管道水中军团菌阳性率为18.94％,25份培养阳性标本中军团菌定量数值为50～1 320菌落形成单位（CFU）/L.分离的25株军团菌中17株是嗜肺军团菌;其中血清1型2株、8型13株、7型1株、5型1株;其余8株为米克戴德军团菌.细胞内生长实验结果显示,4个血清型的嗜肺军团菌均具有很高的细胞内生长能力,而米克戴德军团菌细胞内生长能力较低.结论 管道水中军团菌污染率和含菌量较高,且菌株具有很高的细胞内生长能力,提示其具有一定致病性,有引起军团菌病的危险,应采取相应消毒和预防措施.

MLVA方法在军团菌分子分型中的应用评价

目的探讨MLVA方法在军团菌分型中的可应用性。方法选用文献报道的9个军团菌VNTR位点,对我国环境水中分离的81株Lp1型军团菌菌株和2株参考菌株进行分子分型研究,并与PFGE和SBT分型结果进行了比较。结果 81株分离菌株9个VNTR位点的等位基因型别数分别为6,3,4,2,3,3,2,4和7,其中部分菌株的某些位点无扩增产物或产物为非目的片断。7个位点PCR产物具有重复单元;Lpms3位点PCR产物无重复单元;Lpms31位点部分菌株PCR产物有重复单元,另一些菌株无重复单元。对于具有重复单元的序列,不同菌株间以及同一菌株内各重复单元的序列变异均较大,3个位点存在不完整的重复单元。根据8个位点的PCR产物电泳结果,81株Lp1型分离菌株分为19个MLVA型。通过PFGE和SBT方法,81株Lp1型分离菌株分别分为46种PFGE带型和21种ST型。结论 MLVA方法的分型能力不及PFGE方法,而与SBT方法分型能力相当。但是,MLVA方法操作简单、成本低廉,而且可对培养阴性的标本进行分型,因此,该方法适合在基层推广应用。

少动鞘氨醇单胞菌引起小儿败血症合并脑膜炎1例

本文报道1例罕见的由少动鞘氨醇单胞菌引起的小儿败血症合并脑膜炎。该患儿突发高热起病,伴有皮肤散在瘀点。根据实验室微生物分离和鉴定,确诊为少动鞘氨醇单胞菌引起的败血症;同时根据脑脊液生化常规结果,诊断为合并细菌性脑膜炎。少动鞘氨醇单胞菌引起的小儿败血症合并脑膜炎属罕见病例,且该患儿有类似流行性脑脊髓膜炎的症状,易被误诊为春季小儿流行性脑脊髓膜炎,需引起临床及实验室工作人员的重视。

1987～1997年中国钩端螺旋体病流行态势分析

１１９８７年以来全国钩体病流行态势：钩体病自５０年代早期，在我国被认为是一个公共卫生问题以来，全国发生几十次规模较大的流行。广泛的流行病学调查、预防和控制进一步的研究使全国钩体病的发病率下降。但在８０年代末期（１９８７年）全国钩体病又发生大流行，发病...

脉冲场凝胶电泳技术用于脑膜炎奈瑟菌的研究

目的利用脉冲场凝胶电泳技术分析流行性脑脊髓膜炎(简称"流脑")病例及其密切接触者分离出的脑膜炎奈瑟菌(Nm)的同源性以及不同病例分离出Nm的相关性。方法对6例疑似流脑病例的血液和脑脊液标本以及对密切接触者咽拭子进行脑膜炎奈瑟菌的培养分离,分离菌进行氧化酶试验、血清学分群鉴定、糖原利用试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)鉴定试验。结果 6例疑似流脑病例与其密切接触者共分离出21株菌,均为Nm C群,5株为AH 1型,14株为AH 2型,2株为AH 47型。结论流脑病例分离出的Nm与其密切接触者分离出的Nm完全同源,其中4例病例病原菌来自同一菌株。

广西军团菌流行病学监测研究

目的了解广西军团菌在肺炎病人感染和外环境污染状况,为制定有效的防控措施提供科学依据。方法 2009～2012年在广西部分地区调查和采集符合病例定义的肺炎病例尿液、下呼吸道标本以及公共场所水体进行嗜肺军团菌尿抗原检测、病原培养及鉴定。结果对1 052例肺炎病例调查和采样未检出军团菌阳性;416份公共场所水体标本共检出嗜肺军团菌97株,阳性率23.32%,以7～9月检出阳性率为最高(36.36%～42.42%),中央空调冷却塔水阳性率高达31.56%;不同类型公共场所以酒店、宾馆阳性率最高为44.23%,次为医疗机构40.00%;97株嗜肺军团菌中Lp1型占55.67%,Lp2-15型占44.33%。40株Lp1型经脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,获得36种基因型别,带型分散,未发现绝对优势带型。结论尽管未发现军团菌所致肺炎病例,但公共场所水体军团菌污染严重,对人群健康构成潜在威胁,需加强人群和公共场所集中空调通风系统军团菌监测和卫生监督。

pYV质粒对小肠结肠炎耶尔森氏菌粘附侵袭上皮细胞及细胞毒性作用的影响

小肠结肠炎耶尔森氏菌是一个重要的肠道致病菌，对其毒力质粒的研究已引起广泛关注。本文研究了含质粒和不含质粒菌株对上皮细胞（Ｈｅｐ－Ⅱ）粘附、侵袭、细胞毒性作用的差别。结果表明，质粒在该菌对上皮细胞的侵袭性方面没有明显影响，对粘附和细胞毒性作用却有较为明显的影响。

睡眠嗜血杆菌复合体病研究进展

睡眠嗜血杆菌细菌分类学为变形杆菌纲、γ-变形菌纲、巴斯德氏菌目、巴斯德菌科、嗜血菌属,是血管栓塞性脑膜脑炎等疾病的重要病原体。睡眠嗜血杆菌通过呼吸道和泌尿生殖道等途径传播,可引起血管炎、败血症和多发性关节炎,经血到脊髓和脑可引起脑膜脑炎。致病机理是血管炎症和血管内血栓形成。血管炎,缺血性坏死是血管栓塞性脑膜脑炎的病理特征。诊断依据包括病原体的分离、血清学检测、基因检测和病理诊断等。土拉霉素是高度有效的治疗与预防睡眠嗜血杆菌感染的药物。疾病暴发流行时积极的监测、疫苗接种和适当的抗生素预防治疗是标准的推荐方法。

杜莫氏军团菌对上皮细胞A549粘附侵袭和胞内生长能力的研究

目的探明杜莫氏军团菌(Legionella dumoffii,L.dumoffii)对上皮细胞A549的粘附、侵袭和胞内生长能力。方法实验使用菌株为L.dumoffiiTEX-KL(ATCC 33343)、L.dumoffiiNY23(ATCC 33279)和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1(ATCC 33155)。配制1×108菌悬液,将其以100 MOI(Multiplicity of Infection)的比例与肺泡上皮细胞A549相互作用。通过吉曼尼兹染色和菌落计数的方法,测定菌株的粘附、侵袭和胞内生长能力。结果杜莫氏军团菌L.dumoffiiTEX-KL、L.dumoffiiNY23和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1三株细菌在体外生长能力和体内对A549细胞的粘附能力方面无明显差别。L.dumoffiiTEX-KL侵袭进入细胞内的菌数是其他两株菌的1 000倍,差异有统计学意义。结论 L.dumoffiiTEX-KL与L.dumoffiiNY23和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1相比,对A549细胞具有更高的侵袭力,因此也具有较高的上皮细胞内生长能力。

杜莫氏军团菌对上皮细胞A549粘附侵袭和胞内生长能力的研究(英文)

目的探明杜莫氏军团菌(Legionella dumoffii,L.dumoffii)对上皮细胞A549的粘附、侵袭和胞内生长能力。方法实验使用菌株为L.dumoffii TEX-KL(ATCC 33343)、L.dumoffii NY23(ATCC 33279)和嗜肺军团菌L.pneumo-phila philadelphila-1(ATCC 33155)。配制1×108菌悬液,将其以100MOI(Multiplicity of Infection)的比例与肺泡上皮细胞A549相互作用。通过吉曼尼兹染色和菌落计数的方法,测定菌株的粘附、侵袭和胞内生长能力。结果杜莫氏军团菌L.dumoffii TEX-KL、L.dumoffii NY23和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1三株细菌在体外生长能力和体内对A549细胞的粘附能力方面无明显差别。L.dumoffii TEX-KL侵袭进入细胞内的菌数是其他两株菌的1 000倍,差异有统计学意义。结论 L.dumoffii TEX-KL与L.dumoffii NY23和嗜肺军团菌L.pneumophila philadelphila-1相比,对A549细胞具有更高的侵袭力,因此也具有较高的上皮细胞内生长能力。

聚合酶链反应检测嗜肺军团菌的实验研究

目的探讨并建立聚合酶链反应(PCR)用于检测嗜肺军团菌的方法。方法用PCR方法扩增嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子基因(mip)片段,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物;分析其特异性和敏感性。结果在嗜肺军团菌14个血清型参考株均扩增出特异的340 bp片段,而三株非嗜肺军团菌及其他需鉴别诊断的常见病原菌均未扩增出此特异条带。检测灵敏度为2.6 pg/ul基因组DNA。结论依据mip基因建立的嗜肺军团菌PCR检测方法具有高度的敏感性和特异性,是诊断与鉴别诊断嗜肺军团菌感染的一种有效手段。