血清巨噬细胞抑制因子-1在胰腺癌临床检测诊断中的应用价值

目的:探讨MIC-1作为新的肿瘤标志物在胰腺癌临床血清学诊断中的应用价值.方法:采用酶联免疫方法检测101例胰腺癌、10例胰腺良性病变患者及50例正常人血清中的MIC-1表达水平,并与肿瘤标记物CA199进行比较.结果:胰腺癌患者血清中MIC-1表达水平(1427±1056 ng/L)显著高于胰腺良性肿瘤(362±177 ng/L)和正常人血清水平(299±159 ng/L)(P<0.001).MIC-1检测胰腺癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和AUC分别为81.2%、94%、96.5%、71.2%和0.92.分别高于CA199的相应对应值72.4%、89.6%、93.4%、61.4%和0.86.与CA199联合检测时,敏感性可提高至91.1%.结论:MIC-1有可能成为用于胰腺癌临床诊断的新肿瘤标记物.

ATP-生物荧光法在筛选卵巢癌化疗药物中的应用

为了探讨ATP -生物荧光法在临床体外化疗药敏试验中应用的可行性 ,本文以卵巢癌细胞株A2 780为实验模型 ,建立稳定和适宜的实验条件 ,并对卵巢癌临床化疗药物体外筛选进行了初步研究。结果表明该方法稳定性好 ,能检测出不同药物浓度对细胞作用的剂量 -效应关系 ,最小检出细胞数为 4 0个 ,实验变异系数小于 8.2 % (0 .2 % - 8.2 % ) ,预测准确率高 (90 .6 % )。ATP -生物荧光法稳定性、重复性和敏感性均较好 。

HPV16Z-Hsp65-E6／E7无佐剂重组蛋白疫苗的研究

目的:研究治疗性HPV16Z-Hsp65-E6／E7无佐剂重组蛋白疫苗的抗肿瘤活性。方法:通过淋巴细胞增殖实验和细胞毒性杀伤实验研究该疫苗激发的细胞免疫反应及反应强度;观察该疫苗对小鼠TC-1肿瘤细胞移植瘤的体内治疗作用和对小鼠生存期的影响。结果:重组蛋白疫苗免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞与该疫苗体外混合培养增殖明显,并可特异性地在体外杀伤TC-1细胞;体内抑瘤试验显示该疫苗对HPV16病毒转化的TC-1细胞小鼠移植瘤的生长有显著的抑制作用。结论:该疫苗能激发特异性细胞免疫反应;显著抑制HPV16转化的TC-1肿瘤细胞生长。

HPV16^+治疗性无佐剂蛋白疫苗——HPV16z-Hsp65-E6/E7的构建、表达及纯化工艺研究

目的:研制针对我国宫颈癌高危相关的HPV16型的治疗性无佐剂蛋白疫苗。方法:应用PCR技术自我国山西宫颈癌高发现场分离到的毒株——HPV16z中获得E6/E7转化基因片段,自卡介苗菌株中克隆获得Hsp65基因片段,对E6/E7基因片段定点突变修饰,构建pET28a-Hsp65-E6/E7表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白,并研究重组蛋白的纯化方案和工艺。结果:成功构建pET28a-Hsp65-E6/E7重组表达载体,E6/E7突变位点正确,融合蛋白在亲和层析柱上正确复性和初步纯化,经阴离子交换色谱纯化后蛋白纯度达到95%。结论:该研究为无佐剂治疗性重组蛋白疫苗Hsp65-E6/E7的进一步功能研究奠定了基础。

NADPH氧化酶在rd小鼠遗传性视网膜变性中的活化表达

背景研究表明，小胶质细胞中烟酰胺二磷酸腺苷（NADPH）氧化酶的活化在中枢神经系统神经元损伤及神经变性疾病中发挥重要作用。已有研究证实NADPH氧化酶在rd小鼠视锥细胞退行性改变中的作用，但关于其在rd小鼠视网膜变性早期视杆细胞病变过程中的作用研究较少。目的研究NADPH氧化酶在rd小鼠感光细胞凋亡过程中的活化表达，探讨其在遗传性视网膜变性中的致病作用。方法取出生后8、10、12、14、16、18d的rd小鼠各18只，过量麻醉法处死后提取视网膜总RNA和总蛋白，并制备视网膜切片，分别用实时荧光定量PCR及Western blot法测定在rd小鼠感光细胞凋亡过程中视网膜中NADPH氧化酶亚单位gp91phox mRNA及蛋白的定量表达变化；采用免疫组织化学及gp91phox和CD11b免疫荧光双染法确定gp91phox在不同鼠龄rd小鼠视网膜中的表达及定位，并与其近交系C57BL／6N小鼠进行比较。结果实时荧光定量PCR研究证实，C57BL／6N小鼠视网膜中未见gp91phox mRNA的表达，而生后8d的rd小鼠视网膜中即有少量gp91phox mRNA的表达，随着鼠龄的增加，gp91phox mRNA表达量（gp91phox mRNA／β-actin）逐渐增加，生后14d达到高峰。不同鼠龄rd小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量差异有统计学意义（F=17．81，P=0．00）；生后10、12、14、16、18d的Td小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量均明显高于出生后8d小鼠，差异均有统计学意义（均P〈0．05），以出生后14d表达量最高，为1．136±0．370。随着小鼠鼠龄的增加，视网膜中gp91phox蛋白表达量（A值）与其基因表达变化趋势一致，不同鼠龄及C57BL／6N对照小鼠间视网膜中gp91phox蛋白表达的差异有统计学意义（F=354．00，P〈0．01），不同鼠龄rd小鼠出生后视网膜中gp91phox蛋白表达量均明显高于C57BL／6N对照小鼠，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。免疫组织化学法检测表明，rd小鼠出生后10d视网膜内层gp91phox阳性细胞开始增多，出生后14d达到高峰，外核层也可见到gp91phox阳性细胞。免疫荧光双染结果显示，gp91phox与小胶质细胞标志物CD11b共表达，呈现橙色荧光。结论NADPH氧化酶在rd小鼠视网膜中的表达随着鼠龄的增长而增多，其表达与小胶质细胞活化及感光细胞的凋亡相平行，提示NADPH氧化酶可能在小胶质细胞活化导致的感光细胞凋亡中发挥致病作用。

氟尿嘧啶壳聚糖缓释剂瘤内注射治疗小鼠肝癌的实验研究

目的 探讨生物可降解氟尿嘧啶壳聚糖注射胶用于肿瘤内局部给药的抗肿瘤活性 ,为临床应用提供实验依据。方法 80只小鼠随机分为 8组 ,分别瘤内注射氟尿嘧啶壳聚糖胶、壳聚糖空白胶、氟尿嘧啶注射液及腹腔注射氟尿嘧啶注射液。观察荷瘤鼠肿瘤生长、荷瘤鼠给药前、后血象及给药后肿瘤组织凋亡指数。结果 瘤内注射氟尿嘧啶壳聚糖缓释液组小鼠 (6 0mg/kg ,qw×2 )肿瘤生长缓慢 ,瘤体明显小于氟尿嘧啶腹腔注射给药组 ,并呈现良好的量效关系。结论 瘤内应用氟尿嘧啶壳聚糖缓释剂的抗肿瘤效果优于局部和全身单纯氟尿嘧啶给药 ,有重要研发价值。

ATP生物荧光技术在卵巢癌体外药敏检测中的应用

目的 评价ATP生物荧光肿瘤药敏检测与临床疗效的相关性,探讨其临床应用价值。方法 对34例卵巢癌新鲜瘤组织和腹水进行肿瘤细胞分离、原代培养,以ATP生物荧光体外药敏检测技术进行检测。结果ATP生物荧光法测定细胞数量具有相关性好(r=0.9981),量程宽(10-100000个细胞),敏感性高(最小检测10个活细胞)的优点,其检测结果与其他方法相比有较高的相关性。32例卵巢癌病人体外药敏结果表明,其整体预测值为90.6％;其中阳性预测值为94.7％,阴性预测值为84.6％,敏感性90％,特异性91.7％。各种药物体外药敏检测结果与临床资料基本相符。结论 ATP生物荧光肿瘤药敏检测结果与临床疗效具有较好的相关性。该药敏检测方法对于筛选及临床应用新药,研究和确定新的化疗方案和治疗原则,评估联合用药方案,实现肿瘤病人的个体化化疗具有指导作用。

人乳腺癌细胞异质性及其生物学行为研究

目的 探讨人乳腺癌细胞系亚群的异质性及对癌细胞生物学行为的影响及其临床意义。方法 应用Percoll不连续密度梯度离心分离乳腺癌细胞系MCF 7亚群 ,以流式细胞仪测定人乳腺癌细胞系各亚群的DNA含量、细胞周期时相分布 ,以MTT法测定各亚群对抗癌药物敏感性的差异。结果 乳腺癌细胞系各亚群间在DNA含量、细胞周期时相分布方面存在异质性 ,该异质性可导致各亚群细胞增殖能力和对抗癌药物敏感性方面的差异。结论 肿瘤细胞自身遗传不稳定性可使肿瘤细胞在其演进过程中失去单克隆性 ,并发生亚克隆性生长 ,从而导致肿瘤细胞的异质性 ,包括DNA含量、细胞周期时相分布的差异 ,并且最终导致细胞增殖能力。

格雷夫病中医发病机制及治法探讨

格雷夫病（Graves）是一种伴甲状腺激素分泌增多的自身免疫性甲状腺疾病，本病与血清中存在针对甲状腺细胞TSH受体的特异性自身抗体“TRAb”有关，该抗体能模拟垂体TSH，刺激甲状腺细胞的增生和功能增加。本病属于中医学“瘿气”范畴，中医学对甲状腺疾病认识历史悠久，笔者就该病的发病机制及治疗法则探讨如下。