金属螯合亲和色谱介质的合成及其色谱特性研究

详细研究了亚氨基二乙酸（ＩＤＡ）在硅胶基质上键合的适宜条件，利用国产小颗粒大孔径硅胶（７μｍ，３０ｎｍ）制备了固定有Ｃｕ２＋，Ｎｉ２＋，Ｃｏ２＋，Ｚｎ２＋的金属螯合吸附剂，比较了蛋白质在金属螯合柱和裸柱上的保留特性，利用合成的Ｃｕ－ＩＤＡ－硅胶柱分离了来自牛血红细胞的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）。

银纹夜蛾多角体的诱发及分离

报道了对银纹夜蛾进行温度、紫外线照射、微生物（苏云金杆菌）处理，以诱发银纹夜蛾核型多角体病毒。经分离、提取、光镜、电镜及染色观察，可见到有多角体被诱发产生，初步鉴定该多角体为核型多角体。实验发现后者对害虫有致死作用。

金属螯合亲和色谱中固定金属与蛋白质的作用

在不同pHNaCl的磷酸缓冲体系 ,比较了牛血清蛋白 (BSA)、核糖核酸酶 (RNase)、细胞色素C(Cyt C)和溶菌酶 (Lys)在IDA裸柱和一些金属螯合柱上的保留特性 ,考察了固定金属对蛋白质保留行为的影响。指出蛋白质在强结合IDA Cu柱上的保留主要受固定金属和蛋白质间配位作用支配。在弱亲和的IDA Ni、IDA Co和IDA Zn柱上的保留主要受静电作用控制 ,配位作用为辅。讨论了金属螯合亲和色谱中影响蛋白质和金属配位的主要因素 :金属离子的电荷和半径、配位原子对中心离子外层d轨道的影响 ,以及蛋白质表面配位的组氨酸数目、离解常数和取向。影响金属螯合配体和蛋白质静电作用的主要因素为溶液的pH和蛋白质的等电点pI。

流动相组成、浓度和pH对蛋白质在金属螯合柱上的保留特性的影响

系统研究了流动相中盐的性质和浓度、溶液 pH以及竞争配体对蛋白质在金属螯合色谱中保留值的影响。导出了描述蛋白质在金属螯合色谱中保留特征的数学表达式 ,提出用洗脱强度指数ε表征盐溶液的洗脱能力。根据不同色谱条件下蛋白质的保留特性 ,发现蛋白质在金属螯合色谱中的保留是配位、静电和疏水的协同作用。对与蛋白质强结合的金属螯合柱 ,以配位作用为主 ,静电作用为辅 ;对弱结合的金属柱 ,以静电作用为主 ,配位作用为辅。在流动相中加入高浓度非成络盐 ,可增强蛋白质和固定相间的疏水作用。利用金属螯合配体和蛋白质间的作用力与色谱条件的相关性 ,对不同类型金属螯合柱可选择不同的洗脱方式。对弱结合的金属螯合柱可用低浓度盐或 pH梯度洗脱 ,对强结合的金属螯合柱通常用竞争洗脱剂洗脱。实验证明 ,NH3 是一种优秀的竞争洗脱剂 ,它不仅效能高 ,而且价廉 ,固定金属流失少 ,浓度易控制。改变色谱条件可改变金属螯合配体和蛋白质间的作用力 ,提高金属螯合色谱的选择性。

胍变蛋白的构象变化及尺寸排阻色谱行为

通过比较６种天然和变性蛋白的色谱行为，提出在不含盐酸胍的非变性体系中利用尺寸排阻色谱法研究蛋白质的构象变化。根据色谱峰数可以判断蛋白质变性时形成变体的数目；利用峰高可以描述蛋白质变性的完全程度；根据不同波长下峰高的变化可以推断蛋白质表面氨基酸残基暴露情况；利用保留时间可以比较各种变体相对体积的大小。

提高胱氨酸产率的工艺改进

研究了采用减压蒸馏出部分盐酸以提高胱氨酸收率的新方法，考查了酸水解、中和和脱色过程中一些工艺条件对胱氨酸生产的影响，并对部分反应机理做了探讨，使胱氨酸收率稳定在７％～８％。