胆固醇转运相关基因NPC1、NPC2调节造血前体细胞的增殖和分化

目的采用NPC1、NPC2基因敲低的造血前体细胞(erythroid myeloid lymphoid,EML)作为模型,探讨NPC1、NPC2对EML细胞增殖、分化的影响。方法通过NPC1 shRNA、NPC2 shRNA重组慢病毒感染EML细胞获得NPC1、NPC2基因有效沉默的EML细胞模型。利用该模型以Filipin染色检测NPC1、NPC2基因敲低后对EML细胞内胆固醇分布的影响,采用CCK-8和台盼蓝染色检测细胞增殖,采用流式细胞仪检测NPC1、NPC2基因沉默后EML细胞干性标志物CD34、sca-1、c-kit及TER-119、CD11b、B220的变化,采用Western blot检测造血干细胞因子(stem cell factor,SCF)刺激细胞后c-kit磷酸化的改变。结果成功构建NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞模型,NPC1、NPC2基因在mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01)。NPC1、NPC2敲低的EML细胞中出现胆固醇蓄积,且在NPC1敲低的EML细胞模型中胆固醇蓄积更显著。沉默NPC1、NPC2基因后使得EML细胞增殖减慢(P<0.01),并且能够降低EML细胞CD34、sca-1和TER-119、B220的阳性率(P<0.01)。经SCF刺激后NPC1基因沉默的EML细胞中c-kit的磷酸化降低显著(P<0.01),但在NPC2基因沉默的EML细胞中c-kit磷酸化的改变差异无统计学意义。结论胆固醇转运相关基因NPC1通过调节细胞胆固醇流动参与了EML细胞的增殖和分化调控。

细胞自噬对造血干细胞功能特性的调节

细胞自噬是真核细胞一种进化上保守,周转细胞内物质的一个重要生理过程。细胞自噬既能清除胞质内异常的蛋白质和细胞器,又能在特定条件下维持细胞的生存,具有广泛的生理功能。造血干细胞是血液系统中一类能维持静息状态、自我更新和具有多向分化潜能的特殊细胞。近年来的研究不断揭示细胞自噬在造血干细胞的特性维持和调节中发挥着重要作用。现就细胞自噬在造血干细胞特性调节中的研究现状进行概述。