干扰素诱导蛋白16在结直肠癌中的表达及其与K-ras基因突变的相关性研究

背景与目的:结直肠腺瘤-癌序列是目前公认的结直肠癌演变过程,该过程伴随一系列基因突变及蛋白的异常表达和积累。本研究旨在探讨结直肠癌发生、发展过程中干扰素诱导蛋白16(interferon induced 16,IFI16)表达及其与K-ras基因突变之间的相关性。方法:收集云南省第一人民医院病理科2008—2009年门诊及手术的结直肠正常黏膜组织、腺瘤和腺癌各发展阶段标本,应用免疫组化SP法检测IFI16表达情况;应用PCR-RFLP法对结直肠癌标本K-ras基因12密码子进行检测,并与IFI16进行相关性分析。结果:IFI16在结直肠腺癌与腺瘤、腺瘤与正常结直肠黏膜组织中蛋白表达差异均有统计学意义(49.2%vs 25%,P<0.05;25%vs 0%,P<0.05)。结直肠癌患者K-ras基因突变率为38.3%;K-ras基因变异与IFI16表达无相关性(55.2%vs 44.4%,P>0.05),但与IFI16异位表达差异有统计学意义(13.8%vs 72.2%,P<0.05),两者之间呈显著相关(r=0.635,P<0.01)。结论:IFI16参与了结直肠癌的发生、发展过程,K-ras基因突变与IFI16异位在结直肠癌的发生、发展过程中起重要作用。

昆明汉族人群TCF7L2基因rs290487-T/C多态性与2型糖尿病相关性研究

目的探讨TCF7L2基因rs290487多态位点在云南昆明汉族人群中与2型糖尿病的相关性。方法采用套式PCR产物直接测序法对昆明汉族健康组94例,2型糖尿病组200例rs290487多态位点进行检测。结果云南昆明汉族人群rs290487三个基因型CC、CT和TT在病理组与对照组的频率分别为14%/6.4%、41.5%/46.8%和44.5%/46.8%。最少等位基因频率C在对照组与病理组为34.7%/29.8%,与2型糖尿病有趋势上的相关性,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论TCF7L2基因rs290487在昆明汉族人群中与2型糖尿病无相关性。

干扰素诱导蛋白16在结直肠癌中的表达及与p53、p21^(waf1/cip)表达的相关性

目的探讨结直肠癌组织中干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达与p53及p21waf1/cip表达间的相关性。方法免疫组化SP法检测56例不同病理组织分化结直肠癌标本IFI16、p53、p21waf1/cip的蛋白表达,Pearson等级相关分析法分析及其表达间的相关性。结果在结直肠癌细胞中IFI16除呈现胞核表达外,尚存在胞质的异位表达。IFI16的表达与p21waf1/cip表达呈正相关(r=0.365,P<0.01),而异位的IFI16与p21waf1/cip表达呈负相关(r=-0.298,P<0.05);IFI16的表达与p53表达无显著相关性(r=0.056,P>0.05)。结论 IFI16可能通过细胞表达及定位调控p21waf1/cip及其下游路径激活参与结直肠癌的发生、发展。

成纤维细胞生长因子诱导14在结直肠中的表达及其临床意义

目的:探讨成纤维细胞生长因子诱导14(Fn14)在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测Fn14在结直肠正常黏膜上皮细胞、腺瘤及腺癌中的表达状况。结果:Fn14在结直肠腺癌中表达率为56.7%,显著高于散发性腺瘤(7.1%)及正常结直肠黏膜上皮细胞的表达率(0%),差异有显著性(P<0.01)。Fn14蛋白表达与淋巴结转移相关(P<0.05),与病理组织分期及年龄、性别无相关性(P>0.05)。结论:Fn14的异常表达与结直肠腺癌的发生及淋巴结转移相关。

云南昆明地区乙型肝炎病毒基因亚型与血清亚型研究

目的研究云南乙型肝炎(HB)病毒基因亚型与血清型的分布情况。方法对云南97例乙型肝炎病毒(HBV)毒株S基因进行序列测定,通过Genebank HBV基因型分析网站确定毒株的基因型。通过序列比较、基因进化树的构建和相应位点特异氨基酸和核苷酸确定云南HBV毒株基因亚型和血清亚型。结果在所测的97例标本中,云南流行的HBV毒株有B基因型(75%)和C基因型(25%),没有发现其它基因型和基因混合型。B基因型有血清型adw2(占88%)和ayw1(12%);C基因型中以adrq+(96%)为主,仅1例为adw2(4%)。云南HBV B基因存在B2、B1、B4和B5亚型,其中以B2亚型为主,C基因型全为C2亚型。云南HBV C基因型毒株有其特异的核苷酸分布位点。结论云南HBV B基因型毒株与国内外参考株在S基因区没有显著的特异位点核苷酸分布,而C基因型则有显著的自身特征。

Meis1在结直肠腺瘤癌中的表达及其临床意义

目的:探讨meis1在结直肠正常黏膜腺瘤癌发展过程中的表达变化及其临床意义。方法:应用荧光定量RT-PCR及免疫组化检测meis1在结直肠腺瘤癌中的表达及其临床意义。结果:RT-PCR结果显示meis1在正常肠黏膜中有一定程度的表达,随着腺瘤癌的发展表达下调。免疫组化结果显示,在正常肠黏膜、腺瘤及癌中meis1的表达率分别为92.9%、87.5%及63.1%,腺癌与正常、腺瘤相比差异有显著性(P<0.05)。meis1表达部位随着正常黏膜向腺瘤癌发展过程中出现典型的胞核至胞浆异位,且异位与患者淋巴结转移相关(P<0.05)。结论:Meis1的表达下调及胞浆异位与结直肠癌的发生及进展相关。

云南三民族人群VDR基因多态性与HBV感染的相关性

目的:分析云南省西双版纳地区基诺族、傣族和僾尼族人群VDR Taq I和Fok I位点基因多态性的分布,并对其多态性与HBV感染的相关性进行探讨。方法:运用PCR-RFLP方法对三民族人群VDR Taq I和Fok I位点进行基因分型。结果:(1)僾尼族VDR Taq I和Fok I位点多态性与其他两民族显著不同:Fok I位点CC基因型和Taq I/Fok I TT单体型频率降低(僾尼族vs基诺族:χ2值分别为13.907和14.839,P值分别为0.001和<0.001;僾尼族vs傣族χ2值分别为6.766和6.134,P值分别为0.034和0.013)。(3)VDR多态性在HBV感染组(IF组)和健康对照组(HC组)中分布频率差异有统计学意义,IF组Fok I CC基因型(χ2<26.229,P<0.001,OR=2.305,95%CI为1.451～3.663)、Taq I/Fok I TC单体型(χ2=12.457,P<0.001)显著高于HC组,而TT单体型则低于HC组(χ2=25.599,P<0.001);(4)VDR多态性在HBsAg(+)组与HBsAg(-)组中分布频率差异有统计学意义,HBsAg(+)组CC基因型(χ2=13.321,P=0.001,OR=3.104,95%CI为1.676～5.750)、Taq I/Fok I TC单体型(χ2=12.525,P=0.001)显著高于HBsAg(-)组,而TT单体型则低于HBsAg(-)组(χ2=14.027,P<0.001)。结论:VDR Taq I和Fok I多态性具有民族差异,且其多态性与HBV易感性相关。

云南三民族人群eNOS G894T多态性与HBV感染的相关性研究

目的:分析云南省西双版纳基诺族、傣族和僾尼族人群eNOS G894T多态性与HBV感染的相关性。方法:采用整群随机抽样的方法运用PCR-RFLP方法对三民族人群eNOS G894T位点进行基因分型。结果:(1)僾尼族人群HBV感染率显著高于基诺族及傣族(P均为0.000)。(2)僾尼族人群eNOS G894T位点基因型与等位基因分布频率与其他两民族显著不同(P均小于0.005),GG基因型与G等位基因频率降低,而TT基因型与T等位基因频率升高。(3)HBV感染组eNOS G894T位点GG基因型与G等位基因频率显著低于正常对照组,而TT基因型与T等位基因频率显著高于HC组(P均为0.000)。(4)以非条件logistic回归校正混杂因素后,在G隐性模式下,HBV感染组与正常对照组差异有显著性意义(P为0.000;OR为0.311;95%CI为0.179～0.540)。结论:eNOS G894T基因型和等位基因频率具有民族差异,并且其多态性与HBV感染密切相关,基因型为GG纯合子的个体降低了HBV感染风险。

白细胞介素-18启动子基因在云南基诺族、傣族、僾尼族人群中的遗传多态性

目的:分析云南省西双版纳地区基诺族、傣族和僾尼族人群白细胞介素-18(IL-18)启动子基因多态性的分布情况。方法:运用PCR-测序的方法检测三民族人群IL-18启动子G-137C、C-607A和G-656T位点基因型及等位基因频率。结果:(1)基诺族人群G-137C位点基因型与等位基因分布频率与其他两民族显著不同,差异有统计学意义(P值均为0.000)。(2)C-607A与G-656T完全连锁,C-607A(G-656T)位点基因型与等位基因分布频率三民族人群相比均有统计学差异(均P<0.05)。结论:IL-18启动子G-137C、C-607A和G-656T多态性位点基因型和等位基因分布频率具有民族、种族差异。

云南少数民族人群MxA G-88T多态性与HBV感染的相关性

目的探讨云南省西双版纳地区世居少数民族人群粘病毒抵抗基因-1(MxA)G-88T多态性与HBV感染的关系。方法分别采用ELISA法及PCR测序方法对西双版纳地区基诺族、傣族和僾尼族人群行HBV感染状况及MxA G-88T位点基因多态性检测;分析其相关性。结果傣族和僾尼族人群HBsAg+与HBsAg-者比较,MxAG-88T基因型和等位基因分布频率有显著差异(P均<0.05);HBsAg+者GG基因型和G等位基因分布频率显著升高,而TT基因型和T等位基因显著降低。MxA G-88T位点等位基因与基因型频率在三民族人群中的分布无显著性差异。结论 MxA G-88T多态性与HBsAg携带密切相关,携带GG纯合子的HBV感染者更易发展成为HBsAg携带者,而TT基因型则更利于HBV的清除;MxA G-88T多态性不是造成三民族HBV感染差异的原因。

应用基因芯片技术检测参与大肠腺瘤癌变的表皮生长因子受体信号通路的基因

目的全面了解参与大肠腺瘤癌变的表皮生长因子受体信号通路(epidermal growth factor receptorpathway,EGFR pathway)基因.方法分别提取正常大肠粘膜、大肠腺瘤、DukesA、DukesB和DukesC-D大肠腺癌组织的总RNA,生物素标记cRNA探针,分别与5张Affymetrix U133 PLUS 2.0基因芯片杂交,GeneScanner 3000扫描,GCOS1.2软件处理杂交信号,将大肠腺瘤与大肠腺癌(包括DukesA,DukesB和DukesC-D大肠腺癌)与正常大肠粘膜组相比较筛选表达差异基因.应用PathwayV1.0软件对以上筛选出的表达差异基因进行通路分析.结果 EGFR信号通路参与正常大肠粘膜→腺瘤→腺癌这一过程(P<0.05),EGFR信号通路中共有包括MAPK,Shc1,SOS1、Grb和c-FOS基因等29个基因在大肠腺瘤癌变过程中有显著的表达差异(P<0.05),这些基因在大肠腺瘤癌变过程中发挥着重要作用.结论 EGFR信号通路中共有29个基因参与大肠腺瘤癌变,对选择EGFR及其下游信号转导因子作为抗肿瘤治疗的重要靶点有一定指导意义.

SCID小鼠腹腔内人B细胞非霍奇金淋巴瘤模型的建立

目的为探讨人B细胞非霍奇金淋巴瘤诊治策略提供动物模型。方法采用4-5周龄的SCID小鼠,经腹腔接种7.5×106个Namalwa细胞。观察小鼠的发病情况及生存时间。取瘤组织进行HE及免疫组化染色检测CD20,CD79a,Ki-67和CD3抗原的表达。结果 Namalwa细胞在SCID小鼠腹腔发病的主要表现是腹腔出现肿块,时间(18.67±1.94)d,伴竖毛、精神萎靡、行动迟缓,一般情况随时间的延长而不断恶化。荷瘤SCID小鼠中位存活时间(28.00±6.36)d。瘤细胞主要浸润肠壁、肠系膜,胃、胰、肝、脾、肾、肺的周缘、盆腔以及邻近肌组织和皮肤。CD20在瘤组织表达为散在阳性,CD79a和Ki-67为弥慢阳性,CD3为阴性。结论成功建立SCID小鼠腹腔人Namalwa细胞株B细胞非霍奇金淋巴瘤模型,为探索淋巴瘤提供载体。

恶性实体瘤患者自体细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫治疗的安全性改进

目的观察恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导杀伤细胞在自体血浆中的增殖特性及静脉回输治疗的安全性。方法用淋巴细胞分离液分离获取50例恶性实体瘤患者外周血单个核细胞,在含10%自体血浆的RPMI-1640培养液中添加rhIFN-γ、Anti-CD3mAb和rhIL-2联合诱导单个核细胞为细胞因子诱导杀伤细胞。在培养第13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型,并将细胞进行自体回输。结果在培养第13天,细胞因子诱导杀伤细胞得到大量扩增,细胞数增加30.0±5.2倍。CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13天分别占(93.0±6.1)%、(28.4±7.2)%、(65.5±4.5)%和(25.8±12.2)%。恶性实体瘤患者回输自体细胞因子诱导杀伤细胞的治疗过程中未观察到明显的毒副作用,主要表现有畏寒、发热。结论恶性实体瘤患者血浆可以高效扩增自体细胞因子诱导杀伤细胞,临床应用安全可靠,且无明显的毒副作用。

血管细胞黏附分子1 G1238C基因多态性与脑梗死的相关性研究

目的:研究脑梗死与血管细胞黏附分子1(VCAM-1)G1238C基因多态性的相关性。方法:采用PCR-RFLP法研究102例脑梗死患者及84例健康对照的VCAM-1 G1238C多态位点基因型及等位基因的分布频率。结果:脑梗死患者及健康对照中VCAM-1 G1238C多态位点均为G等位基因,GG基因型,未发现C等位基因及其他基因型存在。结论:VCAM-1 G1238C多态性与脑梗死无显著相关,说明VCAM-1 G1238C多态性可能不是脑梗死发病的遗传危险因素。

火鸡出血性肠炎病毒分子生物学研究进展

本文阐述了火鸡出血性肠炎病毒近年来在分子生物学方面的研究进展。HEV基因组全长 2 62 63 bp,是目前所知道最短的禽腺病毒。基因组中 G+C含量为 3 4.93 %。与其它腺病毒相似 ,含有 3 9bp的末端重复序列。晚期蛋白基因 ( 52 k, a,五邻体 ,核心蛋白 ,六邻体 ,肽链内切酶 ,1 0 0 k,P ,和纤维蛋白 ) ,早期基因(聚合病毒 ,末端蛋白 ,DNA结合蛋白 )和中期基因 VIa2及其编码蛋白与其它腺病毒相比具有相似性。基因组中无明显的 E1、E4区。然而 ,作为腺病毒分类的三个标准即基因组长度、末端重复序列及 G+C含量 ,其与牛腺病毒在分类地位上最接近。

HBV混合感染中前C/cp区变异与HBeAg的相关性研究

目的研究慢性乙型病毒性肝炎患者血清HBeAg表达与HBV混合感染中前C/C基因启动子cp变异的关系。方法采用聚合酶链反应扩增HBV-前C/cp基因,以PUC18为载体构建质粒,并进行DNA序列测定后用DNAStar软件包进行序列分析。结果9例患者体内共构建356份HBV-前C/cp质粒;测序结果显示同一患者体内均存在多种变异形式的HBV-前C/cp基因,HBeAg阳性患者体内多为野生株,而HBeAg阴性患者多为突变株;发现13种热点突变形式,其中12种在HBeAg阴性和HBeAg阳性患者体内分布有显著性差异。结论HBV前C/cp区基因变异是导致HBeAg阴转的重要原因之一;HBV感染者体内同时存在多种变异形式的病毒株,野生株/突变株的比例波动在一定程度上决定血清HBeAg的水平。

补体旁路活化对血小板形态的影响

目的:探讨酵母多糖A活化补体旁路对SD大鼠血小板形态的影响。方法:采集健康SD大鼠颈动脉血,制备富血小板血浆,分别加入(1.0、2.5、5.0)×10-3 g/L酵母多糖A,用血小板聚集仪测定血小板聚集曲线,电镜观察血小板的超微结构。结果:5.0×10-3 g/L酵母多糖A可引起血小板明显的变形和轻微的聚集。酵母多糖A在(1.0、2.5、5.0)×10-3g/L范围内,血小板的变形幅度与酵母多糖A剂量对数呈正相关(r=0.7835,P<0.01)。电镜观察见活化的血小板变形,有伪足样突起,胞质内颗粒减少或融合。结论:酵母多糖A可经补体旁路活化SD大鼠血小板,使血小板发生变形和释放胞质颗粒。

胃癌免疫治疗的研究进展

胃癌是中国发病率和病死率均较高的消化系统恶性肿瘤。早期胃癌的隐匿性较强,患者确诊时往往已经发展至晚期,失去了最佳的治疗机会。近年来,随着肿瘤学、免疫学以及分子生物学等相关学科理论和技术的快速发展,随着对机体抗肿瘤免疫应答和肿瘤免疫逃逸机制的深入了解,肿瘤免疫治疗的新策略已得到进一步的研究,肿瘤免疫疗法引起了广泛重视。肿瘤免疫疗法与传统的治疗方法不同,其通过激活患者机体自身的免疫系统从而达到杀灭肿瘤细胞的目的,已成为继手术、放疗、化疗后的第4种肿瘤治疗方式。近年来,免疫疗法在胃癌治疗领域亦显示出良好的应用前景。本文从天然免疫疗法、肿瘤疫苗疗法、过继性免疫疗法和单克隆抗体类免疫检查点抑制剂疗法4个方面对免疫疗法在胃癌治疗领域中的研究进展作一综述,以期为胃癌的免疫治疗提供新的思路。

白细胞介素-12抗肿瘤免疫治疗的研究进展

免疫治疗作为一种新兴疗法,近年来在抗肿瘤治疗中取得了令人瞩目的临床疗效。白细胞介素-12(IL-12)作为一种重要的细胞因子,在机体的免疫调节中发挥重要作用,是连接天然免疫与被动免疫的重要因子。它通过间接作用、直接作用发挥抗肿瘤效应,近年人们进一步发现它还可以通过旁分泌和外泌体等多种方式发挥远程抗肿瘤效应。此外,在临床治疗中,传统治疗方案中大剂量IL-12直接输注造成的极大机体不良反应严重限制其临床转化。近年来基因工程技术迅速发展,人们利用工程载体携载IL-12至肿瘤部位发挥局部抗肿瘤效应成为该领域新的研究方向。本文从抗肿瘤作用机制及临床转化研究两方面对IL-12的研究进展进行综述,旨为梳理IL-12的前沿研究方向。