超声微泡介导微RNA治疗肝细胞癌的研究进展

基因治疗正逐渐成为肝细胞癌(HCC)、尤其晚期HCC的治疗方案。足够剂量的特定微RNA(miRNA)可抑制HCC细胞生长,超声微泡介导基因和药物递送治疗策略可促使miRNA于肿瘤区域靶向释放,从而达到治疗效果。本文对超声微泡介导miRNA治疗HCC研究进展进行综述。

超声靶向微泡破坏技术在心肌梗死基因治疗中的应用

急性心肌梗死(AMI)是严重威胁人类健康的疾病之一。心肌梗死时由于受累心肌细胞功能丧失,导致心功能受损甚至进展为心力衰竭。AMI的一线治疗是尽早通过经皮冠状动脉介入治疗(PCI)对闭塞的冠状动脉进行再灌注。然而,目前临床上的手术和药物等治疗手段均不能挽救死亡的心肌细胞,大面积心肌梗死后仍可能发生心室功能障碍。近年来,靶向基因治疗逐渐应用于临床,已成为AMI可能的有效干预措施。但是,由于缺乏安全有效的靶向递送系统,转染基因难以持续表达,基因治疗的临床应用受到限制。超声靶向微泡破坏技术(UTMD)是一种介导基因转染的新技术,通过将基因递送到特定的解剖和病理部位,在心血管疾病中具有潜在的治疗价值。本文对UTMD在心肌梗死基因治疗中的应用研究进展进行综述。

miR-195真核表达载体的构建与生物信息学分析及其靶向PD-L1介导淋巴细胞增殖的实验研究

目的目前在肝癌细胞中miR-195与PD-L1表达关系和作用机制尚不完全清楚。构建miR-195真核表达载体,研究其与肝癌细胞中PD-L1的关系及其对淋巴细胞增殖的影响,并通过生物信息学预测miR-195靶基因及其参与的信号通路。方法以正常宫颈脱落细胞DNA为模板,通过PCR对目的片段进行扩增,将真核表达载体pcDNA3.1(+)与目的片段分别连续单酶切、纯化、连接、送测序鉴定。用pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1-miR-195分别转染HepG2细胞和H22细胞48 h后,分别记为空白对照组、pcDNA3.1组和miR-195组,通过RT-PCR检测HepG2细胞中miR-195及PD-L1基因表达水平,流式细胞仪检测肿瘤细胞表面PD-L1蛋白的表达,以及miR-195对淋巴细胞增殖的影响。实验分为4组:淋巴细胞组(L组),淋巴细胞+H22细胞组(L+T组),淋巴细胞+H22细胞+pcDNA3.1组(L+T+pcDNA3.1组)和淋巴细胞+H22细胞+pcDNA3.1-miR-195组(L+T+miR-195组),流式细胞术检测miR-195对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。利用在线数据库预测miR-195靶基因,并对靶基因集合进行KEGG通路富集分析。结果成功构建pcDNA3.1-miR-195真核表达载体,生物信息学预测PD-L1为miR-195的靶基因。RT-PCR结果提示与对照组和pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1-miR-195组中miR-195的表达量上调、PD-L1表达量下调(P<0.01)。流式细胞仪结果提示miR-195可降低肝癌细胞中PD-L1表达量(P<0.01),并可促进淋巴细胞增殖(P<0.05)。与L组(1.455±0.050)淋巴细胞比较,L+T组(1.280±0.141)和L+T+pc-DNA3.1组(1.240±0.424)增殖降低,差异具有统计学意义(P<0.05);L+T+miR-195(1.640+0.099)组与L+T组相比,淋巴细胞增殖增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。KEGG信号通路分析提示miR-195主要富集在PI3K-Akt、MAPK、Hippo和Wnt等信号通路。结论通过上调肝癌细胞中miR-195的表达量可靶向下调PD-L1表达,并促进淋巴细胞的增殖。通过对miR-195靶基因集合进行KEGG通路分析,为后续研究miR-195在肝癌发生、发展过程中的相关调控机制提供依据。