芹黄素对人眼Tenon囊成纤维细胞增生的影响

背景青光眼滤过手术后人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的增生是滤过手术失败的主要原因，寻找抑制术后HTFs增生的药物可提高滤过手术的成功率。目的观察芹黄素对HTFs体外生长的抑制效应并探讨其作用机制。方法斜视手术中获取的人眼Tenon囊组织剪成1mm×1mm×1mm的组织块，进行原代培养，免疫荧光法进行细胞波形蛋白检测以鉴定培养的HTFs。取第3～5代HTFs接种于96孑L板中，加入0、20、40、80、160μmol／L芹黄素后继续培养，于24、48、72h后分别取一块96孔板，在酶联免疫检测仪上检测560nm波长处各组细胞的吸光度（A。）值，磺基罗丹明B（SRB）法测定细胞的增生能力。分别在培养基中加入40、80、160μmol／L芹黄素，同时在不同浓度芹黄素组培养基中均加入10汕g／LBrdU，继续培养48h，在各组同一个视野下分别拍摄荧光显微镜和光学显微镜照片，计算BrdU的标记率，以未添加任何芹黄素（0μmol／L）组为对照组。用Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察培养细胞的形态学改变，采用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和细胞周期的变化。结果培养的细胞生长状态良好，免疫荧光法检测可见细胞对波形蛋白呈阳性反应，为细胞质中均匀的绿色荧光，确定培养的细胞为HTFs。SRB法检测结果显示，HTFs的增生值（A。）随着芹黄素浓度的增加而逐渐下降，同浓度芹黄素组HTFsA。值随着作用时间的延长逐渐下降，差异均有统计学意义（F㈣u：480．306，P=0．000；F目目=555．144，P=0．000）。0、40、80~mol／L芹黄素作用HTFs48h后BrdU的标记率分别为（87．860＋-0．632）％、（61．520＋-4．306）％、（23．480~4．472）％，各组之间的总体比较差异有统计学意义（F=299．347，P=0．000），其中40μmol／L、80μmol／L芹黄素组HTFsBrdU的标记率均明显低于0μmol／L芹黄素组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。Hoechse33258染色发现，不同浓度芹黄素组的细胞数目减少，随着芹黄素浓度的增加，细胞核固缩和变形的细胞数目增加。流式细胞术检测发现，随着芹黄素浓度的增加，G。／G，期细胞的百分数逐渐增加，而S期和G：／M期细胞的百分数逐渐下降，差异均有统计学意义（Fc㈣1=58．621，P=0．000；Fs=32．357，P=0．001；Fc2／M=83．998，P=0．000）。0、40、80、160~mol／L芹黄素作用72h后，细胞的凋亡率分别为（4．77±0．21）％、（13．24±1．35）％、（18．33±1．86）％、（31．58±2．77）％，4个组的总体差异有统计学意义（F=204．791，P〈0．05）。结论芹黄素通过诱导细胞凋亡，并将细胞阻滞于C／C期而抽柏JHTFs的士曾堆苴椎田里剂骨和时问俯觞幛，

氯化锂对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的影响

目的:观察氯化锂(Lithium chloride)对人眼Tenon囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs)体外生长的抑制效应,并探讨其作用机制。方法:磺基罗丹明(SRB)法和BrdU法检测细胞生长抑制率;采用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期的变化;Hoechst33258染色后荧光显微镜观察细胞形态学的改变。结果:在40～160mmol/L范围内,氯化锂能够抑制HTFs的增殖,且呈剂量与时间依赖性。氯化锂使HTFs阻滞于G2/M期,且能诱导细胞凋亡,高浓度组尤为明显。结论:氯化锂能抑制HTFs增殖,机制为诱导细胞凋亡,并将细胞阻滞于G2/M期。

氯化锂对人Tenon囊成纤维细胞增生抑制作用的机制研究

目的探讨氯化锂对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)缝隙连接细胞间通讯(GJIC)的影响及其可能的作用机制。方法收集2019年4月于德州市人民医院眼科行斜视手术的1例患者的Tenon囊组织,剪成1 mmxl mmX1 mm的组织块,进行原代培养并传代,取第4代HTFs进行实验。将HTFs分为对照组和氯化锂处理组,对照组加入不含氯化锂的细胞培养基,氯化锂处理组加入含80 mmol/L氯化锂的细胞培养基,继续培养48 h。采用细胞划痕染料标记示踪法标记偶联指数,评估GJIC功能;采用细胞免疫荧光法检测HTFs中Cx43的表达和定位;采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测HTFs中Cx43 mRNA及蛋白的表达水平。结果培养的细胞呈长梭形并呈单层放射状或涡旋状贴壁生长,细胞质vimentin染色呈阳性。细胞划痕染料示踪实验结果显示,氯化锂处理组细胞偶联指数为9.04±0,53,明显高于对照组的4.94±0,39,差异有统计学意义(t=-18.79,P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,对照组可见Cx43荧光呈点状分布于细胞相连处的细胞膜上,氯化锂处理组Cx43染色明显增强。实时荧光定量PCR结果显示,对照组Cx43 mRNA相对表达量设为1,氯化锂处理组Cx43 mRNA相对表达量明显升高,为1.97±0,23,差异有统计学意义(t=-14.426,P<0.01)。Western blot检测结果显示,氯化锂处理组Cx43蛋白相对表达量为0.871±0,057,明显高于对照组的0.446±0.028,差异有统计学意义(t=-11.682,P<0.01)o结论氯化锂可上调HTFs中Cx43 mRNA及蛋白表达并增强HTFs间GJIC功能,提示氯化锂增强GJIC的功能可能是其抑制HTFs增生的机制之一。

2011/2014年德州市特定人群干眼症流行趋势及相关危险因素研究

目的：了解德州市干眼症的流行病学特点,分析不同年龄、不同职业人群干眼症患病率的差别,寻找相关危险因素,为制定干眼症诊疗措施提供科学依据。方法：对2011-02/2014-11在德州市疾病预防控制中心体检中心参加社会性体检的8 145名普通人群开展干眼症问卷调查和相关眼部检查。结果：目标人群中干眼症患者1 803例,患病率为22.14%;女性患病率高于男性,男女之间差异有统计学意义（χ2=45.12,P〈0.01）;干眼症随年龄升高呈上升趋势,5~20岁、21~40岁、41~60岁、61~72岁人群患病率分别为9.61%（109/1134）、22.84%（789/3455）、23.06%（433/1878）、28.13%（472/1678）,有统计学差异（χ^2=95.76,P〈0.01）;女性5~20岁、41~60岁及61~72岁两类人群干眼症患病率显著高于同年龄组男性;各职业患病率具有显著差异,离退休人员最高（27.48%）,有统计学差异（χ^2=59.80,P〈0.01）;主诉症状排前三位的为眼部干涩感（30.40%）、视物模糊或视力波动（24.73%）、畏光（14.53%）;多因素Logistic回归分析提示视频终端综合征、配戴角膜接触镜、滥用滴眼液、空气污染是干眼症的主要危险因素。结论：德州市干眼症防治情况严峻,应掌握主要临床表现特点,及时明确诊断,并针对不同人群采取有针对性的健康教育和行为干预措施。

腔隙性脑梗死患者眼底动脉硬化分级与部分脑动脉硬化危险因素变化的相关性研究

目的探讨腔隙性脑梗死(LI)患者眼底动脉硬化分级与部分脑动脉硬化危险因素变化的相关性。方法以我院收治的LI患者中随机选取110例患者为研究对象均行眼底照相检查,对患者的眼底动脉硬化进行分级,检测并观察患者的血压(BP)、LI病灶数及其受累部位数、颈动脉斑块面积、血糖(Glu)、同型半胱氨酸(Hcy)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、颈动脉内-中膜厚度(IMT)等指标。结果动脉硬化改变的有108例。眼底动脉硬化轻度组在收缩压(SBP)、LI病灶数及其受累部位数、颈动脉斑块面积、Glu值、IMT方面,均显著优于中重度组,差异具有统计学意义(P<0.05);且眼底动脉硬化与以上多种因素均有良好相关性。经分析发现,患者的眼底动脉硬化程度与LI病灶数及其受累部位数的关系更加密切;另外,两组的Glu值差异也具有统计学(P<0.05)。结论 LI患者眼底动脉硬化分级与患者的SBP、LI病灶数及其受累部位数、颈动脉斑块面积、Glu值、IMT等因素具有密切相关性,在临床诊断和治疗当中,可以将以上多种因素作为眼底动脉的观察指标。

青光眼术后并发白内障临床探析

目的探讨青光眼手术后并发白内障的临床治疗。方法回顾性分析2010年3月—2013年10月于我院进行青光眼手术之后并发白内障患者300例,对患者进行青光眼手术后并发白内障的临床情况进行研究。结果 300例患者中有156例患者在接受青光眼手术后并发白内障,青光眼术后并发白内障的机率为52%。结论导致青光眼术后并发白内障的因素较多,在临床治疗过程中要深入分析,找出实际原因对症下药,提高白内障治愈水平,促进患者早日康复。

麦考酚酸抑制翼状胬肉成纤维细胞的作用机制

背景研究表明麦考酚酸（MPA）可下调或抑制与组织增生和炎症相关细胞因子的表达和分泌，进而抑制组织的增生和炎症反应。翼状胬肉是球结膜组织炎性和增生性病变，MPA对翼状胬肉组织的增生是否有抑制作用尚未见报道。目的研究MPA对翼状胬肉组织成纤维细胞（PFBs）活性的影响，并对其相关机制进行探讨。方法翼状胬肉切除术中获取的组织经组织块培养法体外培养PFBs，并采用波形蛋白抗体免疫组织化学法进行鉴定。将0、0．125、0．250、0．500、1．000μmol／LMPA液加入培养孔中，未加入MPA液者作为对照。采用MTT比色法和5一溴脱氧尿嘧啶（BrdU）掺入法观察各组PFBs的生长情况；用Westernblot法检测各组PFBs中核因子-κB（NF—κB）、p65及NF—κBd抑制剂（IκB—a）蛋白的表达。结果培养的细胞为长梭形，呈漩涡状、放射状排列，波形蛋白表达阳性。MTT比色法检测表明，随着MPA浓度的增加，PFBs的增生值（A560）均逐渐下降，5个浓度组间PFBs增生值的总体比较差异有统计学意义（F=42．874，P〈0．01）。随着MPA作用时间的延长，PFBs的增生值（A560）逐渐下降，差异有统计学意义（F=26．038，P〈0．01）。BrdU免疫荧光染色发现，随着MPA浓度的增加，PFBsDNA合成量（A560）逐渐下降，5个组间总体比较差异有统计学意义（F=175．279，P〈O．05），各浓度MPA组PFBsDNA合成量与对照组比较均明显下降，差异均有统计学意义（P〈O．05）。DAPI免疫荧光染色结果表明，各浓度的MPA作用后均未见PFBs的形态学异常。Westernblot法检测显示，作用72h后，MPA组p65表达量为0．886±0．072，明显低于对照组的1．542±0．124，MPA组PFBs细胞质IκB-α的表达量为2．141±0．305，明显高于对照组的1．559±0．267，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论MPA可抑制PFBs的生长，其作用机制可能与其抑制PFBs的NF-κB通路有关。

麦考酚酸对翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的实验研究

目的研究麦考酚酸(MPA)对翼状胬肉组织成纤维细胞(PFB)活性的影响。方法体外培养PFB及Tenon囊成纤维细胞(TFB),以丝裂霉素C(MMC)为对照,MTT比色法、5-溴脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-deoxyuridine,Brdu)掺入法观察MPA对PFB的生长抑制作用,以流式细胞术等检测MPA对PFB、TFB的细胞毒性作用、细胞周期及凋亡的影响。结果 MPA可显著抑制PFB、TFB的增殖,呈时间、剂量依赖性,且不引起TFB的凋亡或坏死。MPA作用后,PFB的G0/G1期比例增加,S期及G2/M期比例减少。结论 MPA对PFB有显著的抑制作用,但不引起TFB的凋亡或坏死,且主要抑制在PFB的DNA合成期。

基于SEER数据库分析影响大唾液腺腺样囊性癌患者预后的临床病理因素

目的:利用SEER(Surveillance Epidemiology,and End Results)公共数据库分析大唾液腺腺样囊性癌(Adenoid cystic carcinoma,ACC)患者的临床病理特征与其生存预后的相关性。方法:从SEER公共数据库中下载2004-2015年大唾液腺(腮腺,颌下腺)腺样囊性癌患者数据,对其临床病理特征进行分析,采用单因素和多因素COX模型分析与腺样囊性癌预后相关的关键临床病理参数。结果:本研究共纳入临床随访信息完整的ACC患者共计428例,构建多因素COX模型分析发现,肿瘤部位、T分期、N分期、M分期、组织学分级是影响患者预后的独立因素(P值均<0.05)。结论:影响大唾液腺ACC患者临床预后的因子包括肿瘤部位、T分期、N分期、M分期、组织学分级,对临床治疗方案的制定具有指导意义。

基于SEER数据库构建腮腺鳞癌的生存预后模型

目的:利用SEER数据库中腮腺鳞癌(SCC)患者资料进行统计分析并构建生存预后模型。方法:选取2004~2015年美国SEER(Surveillance,Epidemiology,and End Results)数据库中腮腺SCC患者临床病理数据和随访资料。进行分组及绘制列线图,并对构建的列线图进行一致性检验(C-index),校准曲线和决策曲线(DCAs)验证。结果:纳入腮腺SCC患者826例。在单因素和多因素分析的基础上,成功构建患者预后的列线图,一致性检验、校准曲线、DCAs曲线结果表明列线图所预测的生存率与实际生存率具有较好的一致性。年龄、T分期、N分期、M分期、是否行颈部淋巴结清扫是影响腮腺SCC患者预后的独立临床病理因素。结论:本研究构建的列线图可以较好地预测患者预后。

中职机械类专业实训教学改革的实践研究

在中职机械类专业教学中,应该以企业的需要制定与之相适应的教学课程,努力培养企业需要的高技能人才。随着市场对中职机械类专业的学生提出更高更严要求,机械类专业实训教学必须进行改革。因此中职学校应注重实训教学的改革,提高机械类教学的质量和机械类专业学生操作能力,以满足社会的需要。本文就探讨目前机械类教学存在的问题,并提出几点关于如何深化中职机械类专业实训教学改革。

基于SEER数据库的唾液腺粘液表皮样癌预后因素分析

目的:本研究利用SRER(Surveillance,Epidemiology,and End Results)数据库对唾液腺粘液表皮样癌(Mucoepidermoid carcinoma,MEC)的临床病理资料进行统计分析并筛选其预后风险因素。方法:下载2004~2015年间美国SEER数据库中唾液腺MEC患者临床病理数据和随访资料。首先将SEER数据库纳入的MEC患者分为建模组和验证组,接着将国内数据库中的MEC数据作为独立的外部验证组。用单因素分析初步筛选了影响患者预后的临床病理因素;随后采用COX模型多因素分析获取影响患者预后的独立因素,并构建列线图(nomogram)并验证模型区分能力与一致性。结果:共纳入2209例唾液腺MEC患者,其中建模组1657例,验证组552例。从南京大学附属口腔医院和复旦大学附属肿瘤医院的肿瘤数据库中纳入234例唾液腺MEC患者进行外部验证。单因素分析结果显示年龄、性别、临床分期、T分期、N分期、M分期、组织学分级、是否手术、是否行颈部淋巴结清扫是影响患者预后的重要临床病理因素;多因素分析表明年龄、T分期、N分期、M分期、组织学分级、是否手术、是否行颈淋巴结清扫是影响患者预后的独立因素。成功构建了个体化预测唾液腺MEC患者预后的列线图,区分度检验显示一致性指数(concordance index C-index)为0.794(95%CI 0.744-0.844),表明该模型达到一个良好的区分度。建模组和内外部验证组的一致性检验的结果表明列线图所预测的生存率与实际生存率具有较好的一致性。结论:年龄、性别、临床分期、T分期、N分期、M分期、组织学分级、是否行颈部淋巴结清扫是影响唾液腺MEC患者的临床病理因素。本文构建的列线图可以较好地预测唾液腺MEC患者的预后。

人眼Tenon囊成纤维细胞缝隙连接细胞间通讯的检测

目的:观察体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs)缝隙连接细胞间通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)功能及其构成蛋白connexin43(Cx43)的表达及分布。方法:锐刀划痕罗氏黄(lucifer yellow)荧光染料传输法观察GJIC功能;RT-PCR及Western blot分别检测Cx43 mRNA及蛋白表达;免疫细胞化学方法检测Cx43的分布。结果:荧光染料自划痕线向邻近未损伤细胞传输达6级细胞以上,同时检测到Cx43 mRNA与蛋白的表达;免疫细胞化学法观察到Cx43分布于细胞膜。结论:培养的HTFs具有较强的GJIC功能,通过Cx43介导GJIC赋予细胞能够相互之间传递信息的能力,提示在创伤愈合过程中GJIC对成纤维细胞功能同步化方面发挥重要作用。