落叶松毛虫AChE最佳反应体系建立及其对3种杀虫剂敏感性比较

通过正交试验和酶活性测定法研究了落叶松毛虫6龄幼虫乙酰胆碱酯酶(AChE)最佳反应体系及对3种杀虫剂的敏感性。结果表明:落叶松毛虫6龄幼虫AChE最佳反应条件为酶液质量浓度0.2g/mL、底物浓度0.8mmol/L、反应体系pH7.5、水浴温度35℃和反应时间5min。敌敌畏、高效氯氟氰菊酯和阿维菌素对落叶松毛虫6龄幼虫体外AChE活性产生不同的抑制作用,且抑制效应与杀虫剂呈现明显的剂量--效应关系;其中敌敌畏抑制效果最显著(IC50=3.018×10-4mg/mL),其次是高效氯氟氰菊酯(IC50=1.436×10-2mg/mL),而阿维菌素对AChE活性抑制效果最弱。

转蜘蛛杀虫肽＋Bt毒蛋白基因欧美杨108号对舞毒蛾的抗性

以转蜘蛛杀虫肽+Bt毒蛋白基因欧美杨108号2个株系为材料,以舞毒蛾幼虫为供试昆虫进行了抗虫性测定。结果表明:取食TP1和TP2的1～4龄幼虫发育历期分别比对照延长3.28和3.60d。取食TP1和TP230d后,幼虫体质量分别降低50.48%和46.79%,各龄期食叶量和排粪量均低于对照组,对舞毒蛾1～2龄幼虫具有27.78%～42.30%的致死亡率。

落叶松毛虫2种解毒酶的体躯分布特征及对3种杀虫剂敏感性比较

落叶松毛虫（Dendrolimussuperans）又称西伯利亚松毛虫，隶属鳞翅目（Lepidoptera）枯叶蛾科（Lasiocampidae）。国内分布于北京、东北、内蒙古、新疆北部，是我国东北林区的重要害虫，除危害落叶松（Larixspp．）外，也危害红松（Pinuskoraiensis）、油松（P．tabulaeformis）、樟子松（P．sylvestrisvar．mongolica）、云杉（Piceaspp．）、冷杉（Abiesspp．）等主要北方针叶树种。

榛子仁蛋白酶解工艺的优化及酶解物抗氧化能力的研究

以东北毛榛子为原料,通过响应面法对Alcalase碱性蛋白酶水解榛子仁蛋白的条件进行优化并建立回归模型,得到最佳水解条件为:酶与底物比3720U/g、酶解温度50.6℃、酶解pH 8.4,此工艺条件下的水解度预测值为14.41%,水解度实测值为(14.38±0.06)%。抗氧化能力测定结果表明:榛子仁蛋白酶解物的总还原能力约为VC的70%,清除DPPH自由基的半数抑制质量浓度(IC50)值为0.7311mg/mL,是VC值的138倍。

3种植物次生代谢物质对舞毒蛾的杀虫活性分析

为探究苦参碱、氧化苦参碱和山奈酚对舞毒蛾3龄幼虫的杀虫活性以及杀虫机理,本研究通过生物测定、离体和体内酶活性实验,分析了上述3种植物次生代谢物质对舞毒蛾的杀虫效果及对其谷胱甘肽S-转移酶(GST)、乙酰胆碱酯酶(ACh E)和羧酸酯酶(Car E)活性的影响。实验结果表明:苦参碱、氧化苦参碱和山奈酚均对舞毒蛾3龄幼虫有良好的杀虫效果,其中苦参碱杀虫效果最强,致死中质量浓度(LC50)为0.420 mg/m L;离体酶活性实验发现,3种植物次生代谢物质对舞毒蛾离体GST、ACh E和Car E活性均有抑制效果,其中氧化苦参碱对GST和ACh E抑制作用最强,抑制中质量浓度(IC50)分别为0.928和0.717 mg/m L,而苦参碱对Car E抑制作用最强,IC50为0.436mg/m L;而体内酶活性实验结果显示,苦参碱对GST抑制作用最强,在处理后48 h,GST活性达到最低,仅为同时期对照组的39%;而氧化苦参碱对ACh E和Car E抑制作用最强,在处理后72 h,ACh E和Car E活性最低,分别为对照组的44%和40%。以上结果表明苦参碱、氧化苦参碱和山奈酚对舞毒蛾幼虫GST、ACh E和Car E活性的抑制作用是其具有杀虫活性的原因之一。

毛榛榛仁肽的氨基酸营养组成与总还原能力评价

以超临界CO2脱脂制备出的毛榛榛仁粕为原料,经Alcalase碱性蛋白酶水解榛仁粕蛋白提取液后,采用葡聚糖凝胶G-25对水解液进行分离纯化,得到Ⅰ和Ⅱ2种榛仁多肽组分,测定其氨基酸组成,并对其营养和总还原能力进行了评价。研究结果表明:对于毛榛榛仁多肽组分Ⅰ和Ⅱ,其氨基酸比值系数分值分别为36.15和41.11,营养价值较低,限制氨基酸分别是赖氨酸和亮氨酸。抗氧化实验结果表明,在相同质量浓度条件下,多肽组分Ⅱ的总还原能力要高于多肽组分Ⅰ,但均小于VC。

欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因的研究

以欧美杨108号为外植体材料,利用农杆菌介导法成功地将抗虫基因(蜘蛛杀虫肽+B t毒蛋白的嵌合基因)导入受体中。通过PCR检测,凝胶电泳结果显示8个卡那霉素抗性芽中,6个存在目的基因;经PCR-Southern印迹杂交检测,阳性率为50%,进一步表明目的基因成功整合到欧美杨108号基因组内。

欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因转化系统的建立

通过除菌抗生素的筛选试验、叶片对头孢唑啉钠的敏感试验、叶片对卡那霉素的敏感度试验、茎段对卡那霉素的生根敏感试验,成功建立了欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因的转化系统。转化时所选的除菌抗生素为注射用头孢唑啉钠;除菌时,头孢唑啉钠的质量浓度为1000mg/L;在筛选转化体时,卡那霉素的临界质量浓度确定为30mg/L;确定了生根培养基中卡那霉素的临界质量浓度为20mg/L。欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因转化系统的成功建立为该杨树品种的基因工程提供了前提条件。

落叶松毛虫SOD和CAT对6种农药的敏感性比较

以落叶松毛虫6龄幼虫为研究对象,比较了高效氯氰菊酯、阿维菌素、辛硫磷、敌敌畏、灭幼脲和高效氯氟氰菊酯对其体内的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果表明:2种拟除虫菊酯类农药(高效氯氰菊酯和高效氯氟氰菊酯)对落叶松毛虫6龄幼虫离体SOD抑制性最强,其抑制中浓度IC50分别为2.41×10-3和1.53×10-2g.L-1,而2种有机磷类农药(敌敌畏和辛硫磷)对离体SOD抑制性最弱;激素类(灭幼脲)和抗生素类(阿维菌素)对离体CAT抑制强于其它农药。落叶松毛虫体内SOD和CAT活性与6种农药胁迫表现出明显的时间效应。落叶松毛虫6龄幼虫在不同农药胁迫下,其体内SOD和CAT活性因农药刺激强度而异,从而维持体内系统的平衡,这可能也是其适应逆境及形成抗药性的机制之一。

白屈菜总碱对舞毒蛾离体酶活性的影响

通过对白屈菜粗提物纯化获得白屈菜总碱,对舞毒蛾3龄幼虫5种离体酶活进行测定。测定结果表明:用AB-8大孔吸附树脂纯化白屈菜粗提物,得到5种生物单碱,含量从高到低依次为:黄连碱>白屈菜碱>盐酸小檗碱>血根碱>四氢黄连碱。纯化后的白屈菜总碱对5种离体酶活均有不用程度的抑制作用,对GST抑制作用最强,IC_(50)为5.333mg/mL,对CarE的抑制作用最弱,IC_(50)为3.475×10~3 mg/mL。白屈菜总碱对舞毒蛾3龄幼虫5种离体酶的敏感性依次为GST>AChE>CAT>SOD>CarE。

3种植物次生代谢物质对舞毒蛾生长发育的影响

通过生物测定、拒食活性测定和酶活测定试验,分析了3种植物次生代谢物质对舞毒蛾3龄幼虫的毒杀、拒食效果及其保护酶CAT、SOD活性的影响。试验结果表明:苦参碱、氧化苦参碱和山奈酚对舞毒蛾幼虫均具有良好的毒杀和拒食活性。其中,苦参碱杀虫效果最好,质量浓度为2.000 mg/mL的苦参碱对幼虫72 h死亡率达到71.67%,而山奈酚拒食效果最强,1.000 mg/mL时对幼虫72 h拒食率达到70.53%;离体酶活试验发现,苦参碱和氧化苦参碱对离体CAT、SOD活性均有较强的抑制作用;而低浓度的山奈酚则可以激活2种保护酶的活性;体内酶活试验显示,3种植物次生代谢物质对幼虫体内CAT、SOD活性的抑制作用会随着处理后时间的延长而减弱,其中苦参碱和氧化苦参碱处理组的2种保护酶活性均呈现先减小后增大的趋势,在处理后48 h活性达到最低并显著低于同时期对照组(P<0.05),而山奈酚处理组CAT活性则呈现出先增大后减小的趋势。

白化型蛹虫草活性成分分析及抗氧化活性测定

对白化型蛹虫草的活性成分及水提物抗氧化活性进行测定,研究了白化型蛹虫草与野生型蛹虫草活性成分差异和潜在的食药用价值。结果表明:白化型蛹虫草色素类物质中黄酮含量较野生型蛹虫草高28.19%,总类胡萝卜素和北虫草黄素的含量极低;虫草素、虫草酸、可溶性蛋白含量与野生型蛹虫草没有显著性差异,白化型蛹虫草多糖含量较野生型蛹虫草低13.78%。白化型蛹虫草水提物的总还原力、羟基自由基清除率、ABTS自由基清除率、DPPH自由基清除率、超氧阴离子清除率均显著高于野生型蛹虫草(P<0.01)。这说明白化型蛹虫草比野生型蛹虫草具有更强的抗氧化能力。

基于ITS中华散尾鬼笔的分类及抑菌活性研究

为了研究中华散尾鬼笔的分类地位和抑菌活性,试验采用PCR产物直接测序的方法,将获得的中华散尾鬼笔内部转录间隔区(ITS)序列在NCBI上进行序列比对,并根据比对结果绘制N-J系统发育树;分别以正丁醇、乙醚、乙酸乙酯、石油醚、氯仿作为提取溶剂萃取中华散尾鬼笔的培养液,采用生长速率法进行抑菌活性试验并计算抑菌率。结果表明:中华散尾鬼笔属于笼头菌科,其亲缘关系更接近竹荪属真菌;培养液对尖孢镰刀菌、灰葡萄孢菌和拟盘多毛孢菌的抑菌率分别为47.53%、59.82%及50.26%;正丁醇的提取效果最好,其他4种提取溶剂的效果差异不明显;以正丁醇作为提取溶剂获得的粗提物对上述3种林木病原菌的抑菌率分别为45.35%、37.08%及15.58%。说明中华散尾鬼笔可作为新的研究对象用于微生物源农药的开发。

樟子松云杉八齿小蠹发生规律及防治初探

为减轻内蒙古红花尔基地区樟子松上的虫害,研究樟子松主要害虫小蠹的种类及发生规律,并采用无公害农药对其进行防治。在主要害虫为害期采用样方调查法确定害虫的种类、生活史及为害程度,进而定点施药开展无公害防治。查明该地区樟子松上主要优势害虫种为云杉八齿小蠹,该虫1年1代,6月中旬至7月中旬为成虫为害盛期,7月下旬至8月中旬为化蛹高峰期。在成虫为害期、虫口密度53.05头/株的条件下,利用1.2%烟碱·苦参碱烟雾剂对堆垛受害枝桠进行熏蒸处理,施药量2.25 g/m^(3),可获得良好防效。

舞毒蛾DnaJ1基因克隆分析及对甲萘威胁迫响应

Dna J蛋白是Dna K/Hsp70的辅助分子伴侣,通过调节Hsp70的ATPase活性来影响蛋白复合体的合成与组装。为明确舞毒蛾Lymantria dispar的LdDnaJ1基因特性及对杀虫剂甲萘威的胁迫响应,通过克隆LdDnaJ1全长基因并运用实时荧光定量RT-PCR技术测定了甲萘威对其LdDnaJ1基因表达量的影响。结果表明,舞毒蛾Ld Dna J1全长基因开放阅读框为1 062 bp,编码353个氨基酸,分子质量为39.91 kD,理论等电点为5.65;舞毒蛾Dna J与柑橘凤蝶Papilio xuthus Dna J亲缘关系较近。甲萘威对舞毒蛾2龄幼虫24 h和48 h的致死中浓度LC50分别为74.04 mg/L和31.48mg/L。低剂量(LC_5、LC_(10)和LC_(30))甲萘威胁迫下,舞毒蛾2龄幼虫Ld Dna J1基因表达量均下调,LC_(30)甲萘威处理后72 h时LdDnaJ1基因表达量最低,仅为对照的15.70%。表明甲萘威可抑制舞毒蛾LdDnaJ1基因的表达,且呈现明显的时间和剂量效应。