参芪扶正注射液联合化疗治疗恶性肿瘤的临床研究

目的比较参芪扶正注射液联合化疗与单纯化疗治疗恶性肿瘤的临床疗效及不良反应。方法入选的62例患者随机分为两组,观察组32例,采用参芪扶正联合化疗,平均化疗5.7周期。对照组30例,单纯化疗,平均化疗5.6周期。结果观察组完全缓解(CR)3例,部分缓解(PR)12例,稳定(NC)11例,进展(PD)6例,总有效率46.9%。对照组CR 1例,PR 9例,NC 11例,PD 9例,总有效率33.3%。治疗组与对照组比较,治疗组T细胞亚群CD3、CD4和CD4/CD8比值明显升高,差异有显著性(P<0.01)。治疗组生活质量较对照组明显改善。结论参芪扶正注射液联合化疗治疗恶性肿瘤可以减轻化疗的不良反应,使患者化疗依从性更好,增强机体的免疫功能,改善患者生活质量。

hTERT启动子特异驱动IL-24重组腺病毒的包装及鉴定

目的包装并鉴定人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子特异驱动白介素-24(IL-24)的重组复制缺陷型腺病毒。方法全基因合成优化后的hTERT启动子,插入质粒pGL3-basic的多克隆位点(pGL3-phTERT);从人外周血单核细胞扩增IL-24,插入pGL3-phTERT质粒的hTERT启动子下游获得pGL3-phTERT-IL24;随后将phTERT-IL24插入pShuttle中间质粒,使用AdEasyTMAdenoviral Vector System包装Ad-phTERT-IL24重组腺病毒;同时包装CMV启动子驱动IL-24的腺病毒载体为阴性对照(Ad-CMV-IL24),以空载腺病毒Ad作为空白对照。用20 MOI重组腺病毒感染SGC-7901、MKN-45、HF细胞,采用PCR及Western blot检测IL-24在RNA及蛋白水平的表达。结果成功包装Ad-hTERT-IL24重组腺病毒。感染Ad-hTERT-IL24后,hTERT阳性肿瘤细胞内IL-24表达显著上调,但hTERT阴性的HF细胞则无IL-24表达;感染阴性对照Ad-CMV-IL24后,hTERT阳性或阴性细胞内均有IL-24表达,感染空白对照Ad后,hTERT阳性或阴性细胞内均无IL-24表达。结论 AdhTERT-IL24腺病毒载体可有效介导IL-24特异表达于hTERT阳性肿瘤细胞内。

miR-138对人胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的:探讨microRNA-138(miR-138)对人胃癌SCC-7901细胞株增殖能力的影响及可能的机制。方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine2000将miR-138 RNA转染人胃癌SGC-7901细胞株,采用荧光实时定量PCR检测miR-138表达丰度;采用流式细胞术检测转染后的细胞周期;采用MTT法检测细胞生长曲线;采用Western blotting检测人端的端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白的表达。结果:转染miR-138 RNA后,SGC-7901细胞内miR-138表达丰度升高,细胞增殖能力受到显著抑制,同时hTERT蛋白表达水平下调。结论:miR-138可抑制人SCC-7901细胞的增殖能力,机制可能是通过抑制靶基因hTERT蛋白的表达。

胸腔内注射重组人5型腺病毒治疗晚期肺癌恶性胸腔积液的疗效观察

目的:观察胸腔内注射重组人5型腺病毒(安柯瑞)治疗肺癌恶性胸腔积液的有效性和安全性。方法:将我院52例肺癌恶性胸腔积液患者随机分为安柯瑞治疗组(26例)和顺铂对照组(26例),胸腔内分别注射安柯瑞或顺铂,观察治疗有效率、不良反应。结果:安柯瑞治疗组和顺铂对照组治疗有效率分别为69.23%及53.84%,两组间比较具有显著差异(P<0.05),两组均出现不同程度的白细胞减少,但较之顺铂对照组,安柯瑞治疗组不良反应明显较轻。结论:安柯瑞胸腔内注射治疗晚期肺癌恶性胸腔积液疗效较好,毒副反应轻。

腺病毒介导miRNA-29a过表达抑制人胃癌细胞的增殖

目的:利用重组人5型复制缺陷型腺病毒载体介导miRNA-29a(miR-29a)过表达,观察miR-29a对人胃癌细胞系SGC-7901及AGS的增殖抑制作用。方法:构建含pre-miR-29a的重组腺病毒Ad-miR29a及含LacZ基因的对照腺病毒Ad-LacZ,分别感染人胃癌SGC-7901及AGS细胞,采用real-time PCR法检测SGC-7901及AGS细胞中miR-29a的表达,CCK-8法检测miR-29a对SGC-7901及AGS细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测SGC-7901及AGS细胞的细胞周期,Transwell法检测miR-29a对SGC-7901及AGS细胞迁移能力的影响。结果:与Ad-LacZ对照组相比,Ad-miR29a组感染后胃癌SGC-7901及AGS细胞中miR-29a的表达均显著增加[(17.35±0.71)vs(1.12±0.09),(26.50±1.09)vs(0.95±0.04);均P<0.01];且胃癌SGC-7901及AGS细胞增殖明显受到抑制,感染6 d后D值均显著降低[(0.54±0.03)vs(0.77±0.04),(0.70±0.03)vs(0.88±0.04);均P<0.01)],而Ad-LacZ感染组与未感染组相比则无明显变化(P>0.05);与Ad-LacZ对照组相比,Ad-miR29a组SGC-7901及AGS细胞中G0/G1期细胞比例均显著增加[(63.10±4.91)%vs(47.60±5.31)%,(69.80±3.15)%vs(54.60±4.22)%;均P<0.05],但胃癌SGC-7901及AGS细胞的迁移能力并没有明显差异。结论:miR-29a过表达可有效抑制胃癌SGC-7901及AGS细胞的增殖,miR-29a有望成为治疗胃癌的新靶标。

miR-29在胃癌中的表达及其临床意义

目的观察胃癌组织中miR-29的表达情况及其与年龄、性别、分化程度、淋巴结转移、TNM分期和预后的关系,探讨miR-29在胃癌中表达的临床意义及其价值。方法收集胃癌手术标本,采用Trizol试剂抽提总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测86例胃癌组织中miR-29的表达水平,并对所有病例进行随访。结果有淋巴结转移的胃癌患者miR-29低表达的比例显著高于无淋巴结转移组(59.6%vs.25.0%,P=0.004),Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者miR-29低表达的比例显著高于Ⅲ、Ⅳ期患者(63.8%vs.40.0%,P=0.029),miR-29与年龄、性别、分化程度无关。43例miR-29低表达胃癌患者的中位生存期为35.0月,3年生存率为39.6%;43例高表达者的中位生存期为44.0月,3年生存率为66.1%,两组差异显著(P=0.007)。结论 miR-29在胃癌组织中高表达能抑制肿瘤淋巴结转移进而改善预后,可作为胃癌的预后判断指标及治疗靶标。

负载hTERT调控相关miR-138复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定

目的包装负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关miR-138前体全长cDNA(pre-miR-138)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR138)。方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒(pDC315-miR138),与腺病毒包装质粒pBHGloxDel-taE1、3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-miR138并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Ad-miR138进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/mL。电镜可见病毒在HEK293细胞中大量复制。PCR双引物鉴定Ad-miR138可扩增出Ad及pre-miR-138特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出Ad特异片段,不能扩增出pre-miR-138特异片段。结论成功包装了负载miR-138全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究微RNAs(microRNAs)在肿瘤发生、发展中的作用,以及hTERT调控相关miR-138在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。

胃癌组织中miR-29的表达及其临床意义

目的:研究胃癌组织中miR-29的表达情况及其与临床病理特征和预后的关系。方法:收集2005年至2010年中国人民解放军第324医院收治的进展期胃癌113例患者的手术标本,定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织内miR-29的表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果:胃癌组织内miR-29的表达显著低于对应的癌旁组织(2.62±1.17vs3.14±1.70,P=0.006),伴淋巴结转移的胃癌患者低表达miR-29百分率显著高于无淋巴结转移组(58.9%vs32.5%,P=0.007),miR-29低表达胃癌患者中位生存率显著低于miR-29高表达者(33.0vs44.0个月,P=0.013)。结论:胃癌组织低表达miR-29,miR-29有可能成为胃癌的预后判断指标及治疗靶标。

miR-138在胃黏膜癌变过程中的表达及意义

目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白和hTERT调控相关miR-138在正常胃黏膜(NM)、肠上皮化生(IM)、异型增生(DYS)、早期胃癌(EGC)和进展期胃癌(AGC)中的表达及其意义。方法选取经病理证实的胃黏膜病变组织96例,用免疫组化SP染色法检测hTERT表达水平,real-time PCR检测miR-138表达丰度。结果在NM、IM、DYS、EGC和AGC 5组标本中,hTERT阳性表达率逐渐升高,分别为0.0%、26.1%、33.3%、75.0%和77.4%;miR-138表达水平呈逐步下降趋势,分别为2.93±1.24、2.12±0.98、1.90±0.58、1.27±0.89和1.68±1.02;低表达miR-138组织的百分率在低、未分化组中显著高于高、中分化组(83.3%vs 36.5%,P<0.01),而与性别、年龄、有无淋巴结转移及TNM分期等无关。结论 miR-138表达丰度的下降,是胃黏膜癌变过程中的早期事件;miR-138有望成为新的胃癌早期诊断指标及治疗靶标。

经内镜射频治疗消化道息肉869例临床分析

目的 探讨经内镜射频治疗消化道息肉的方法、疗效及适用范围.方法 我科2006年1月～2012年12月采用射频治疗胃肠道息肉患者869例,术后观察不良反应、内镜随访,评价治疗的安全性及有效性.结果 869例患者共1465颗息肉（息肉直径＜0.5 cm 368颗,0.5 ～2.0 cm 1062颗,＞2.0 cm 35颗）,其中1452颗均一次性治疗成功,13颗直径＞3.0 cm广基息肉分2次处理.1个月后复查胃肠镜,所有息肉均脱落,黏膜恢复正常,少数留有白色瘢痕.术后不良反应有腹胀78例,轻度腹痛30例,烧心9例,对症治疗后均缓解.术后出血1例,予以镜下金属止血夹治疗,得到控制.无穿孔病例发生.结论 经内镜射频治疗消化道息肉,安全有效,操作简单,价格低廉,特别适合于直径0.5 ～2.0 cm的广基或亚蒂息肉.

活体生物光学分子成像技术研究进展

活体生物体内光学成像技术是近年发展起来的新兴技术,在生命科学研究中占有重要地位。其原理为采用荧光报告基团或荧光染料标记的目的细胞,通过灵敏的光学成像仪器,检测活体生物体内细胞生物学行为。按发光模式可分为生物自发光和荧光激发光两类。相对于传统光学成像技术,具有无创、可多次重复、实时活体成像、灵敏、安全等优势,目前已成为肿瘤诊断、治疗、疗效判断及抗肿瘤药物筛选等研究领域中不可缺少的工具。

树状串联hTERT表位肽负载mDC疫苗体外激发抗瘤免疫应答的效应研究

目的通过树状串联hTERT表位肽的髓样树突状细胞(mDC)递呈,刺激同源淋巴细胞,探索一种更优的肿瘤免疫治疗方法。方法人工固相合成4分支的树状串联hTERT表位肽(MAP)及其各分支单肽,免疫荧光检测hTERT的表达情况,免疫磁珠分选mDC,尼龙毛柱纯化T细胞,ELISA检测mDC的IL-12p70和淋巴细胞的(LC)TNF-α、IFN-γ分泌量,流式细胞技术检测mDC、LC的相关表面分子以及效应性T细胞对HLA-A2型肿瘤A549、MDA-MB-231和SW480的杀伤率,并作统计学分析。结果所有肿瘤细胞都表达hTERT,且胞核大于胞浆;MAP和混合单肽对3种肿瘤细胞都有杀伤效应,且MAP的杀伤效应大于混合单肽,有统计学差异。结论人工合成hTERT的MAP肽通过mDC能足够强的激活同源淋巴细胞,在肿瘤疫苗的研发中有重要意义。

hTERT多表位肽致敏mDC诱导CTL对HLA-A24^+肿瘤细胞的特异性杀伤作用

目的:研究人工合成人端粒酶逆转录酶(hTERT)多表位混合肽经髓样树突状细胞(mDC)提呈后,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HLA-A24+肿瘤细胞的免疫杀伤效应。方法:人工合成四分支的树状串联hTERT表位肽(MAPs)及其各单表位多肽。取HLA-A24+健康志愿者的外周血,用免疫磁珠分选并培养mDC。用尼龙毛柱纯化T淋巴细胞并培养。以各表位肽致敏mDC后,诱导特异性CTL增殖,并以表达hTERT且以HLA-A24+肿瘤细胞株SMMC-7721及HLA-A24-肿瘤细胞株SKOV3为靶细胞行杀伤实验。用ELISA法检测不同时间点培养基上清液中IL-12、TNF-α的分泌量;用流式细胞术检测CTL对肿瘤细胞的杀伤效应。结果:以源于hTERT的T淋巴细胞表位I540(ILAKFLHWL)、V461(VYGFVRACL)及L766(LTDLQPYMRQFVAHL)合成4分支MAPs多肽及各单表位混合多肽。以人工合成的hTERT多表位混合肽致敏mDC后,能刺激CTL增殖,并可诱导对HLA-A24+肿瘤细胞株SMMC-7721的特异性杀伤作用,且MAPs多肽较单表位混合多肽的致敏效果更具显著性(P<0.05)。结论:以人工合成的hTERT多表位混合肽致敏mDC能激活同源淋巴细胞(CTL),可特异性杀伤HLA-A24+的肿瘤细胞,在肿瘤免疫治疗中具有重要的意义。

miR-29在胃癌患者血清中的表达及其对预后的影响

目的观察胃癌患者术前、术后血清标本中miR-29的表达情况及其与预后的关系,探讨胃癌患者血清中miR-29的检测在胃癌早期诊断及预后判断中的价值。方法采用实时荧光定量PCR技术检测46例胃癌患者手术前后及30例健康成年人血清中miR-29的表达水平。结果胃癌患者血清中miR-29表达水平显著低于健康成年人;胃癌患者术后血清中miR-29表达水平较术前上调,且上调水平越高预后则越佳。结论 miR-29在血清中的表达水平可作为胃癌早期诊断及预后判断的miRNA指标。

重症急性胰腺炎肠屏障功能障碍研究

重症急性胰腺炎患者常伴有肠屏障功能障碍,正常肠道屏障由机械屏障、化学屏障、免疫屏障与微生物屏障4部分构成。肠屏障功能障碍通常指上述4种屏障功能出现不同程度的破坏,本文就重症急性胰腺炎肠道屏障功能障碍时上述4种屏障的病理生理改变作一概述。

miR-29a抑制胃癌细胞内靶基因VEGF-A的表达及意义

目的验证胃癌细胞株SGC-7901内miR-29a对靶基因VEGF-A的直接调控作用。方法采用负载miR-29a的腺病毒载体(Ad-miR29a)感染人胃癌细胞株SGC-7901,上调SGC-7901细胞内miR-29a的表达丰度后,采用RT-qPCR及Western blot法分别检测SGC-7901细胞内VEGF-A在mRNA及蛋白水平的表达;进一步采用双荧光素酶实验及突变实验,验证miR-29a是否通过结合在VEGF-A 3'UTR而直接抑制靶基因表达。结果与感染阴性对照Ad-LacZ的SGC-7901细胞相比,感染Ad-miR29a的SGC-7901细胞内VEGF-A蛋白表达下降(0.42±0.02 vs.0.91±0.03,P<0.01),且VEGF-A mRNA水平亦下调(0.75±0.21 vs.1.15±0.25,P<0.05);荧光素酶实验显示,与阴性对照相比,转染miR-29a mimic后,HEK293细胞萤火虫荧光素酶活性明显下降(0.56±0.13 vs.0.93±0.06,P<0.05);而在VEGF-A 3'UTR与miR-29a的结合位点被突变之后,HEK293细胞萤火虫荧光素酶活性得以恢复。结论 miR-29a通过结合于VEGF-A 3'UTR相应位点,直接抑制VEGF-A在mRNA及蛋白水平的表达。miR-29a可能成为胃癌基因治疗的有效靶标。

美蓝-靛胭脂双重染色对早期胃癌及不典型增生的诊断价值

目的研究内镜下美蓝-靛胭脂双重染色对早期胃癌及不典型增生的诊断价值。方法内镜下将104例胃黏膜异常表现患者分为两组,每组各52例。染色组内镜下先喷洒0.2%靛胭脂染色,发现可疑病灶后,再喷洒0.5%美蓝染色,然后在染色异常部位给予活检并送病理组织学检查;对照组不作染色,按肉眼判断,常规活检。结果染色组中检出有19例存在轻度到中度不典型增生,1例存在重度不典型增生,1例为重度不典型增生癌变,黏膜内癌2例,2例经手术及术后病理证实病灶仅限于黏膜层且无淋巴结转移,1例患者去向不明;对照组中分别检出6例轻度至中度不典型增生,早期胃癌0例,6例不典型增生复查时有1例因肉眼高度怀疑癌变而染色,着深蓝色后再次活检,病理报告少量腺体重度不典型增生伴癌变。两组检出率差异有统计学意义(P<0.01)。结论内镜下美蓝-靛胭脂双重染色可显著提高胃不典型增生和早期胃癌的检出率。

谷氨酰胺治疗急性胰腺炎肠屏障功能障碍临床观察

目的探讨谷氨酰胺在急性胰腺炎肠屏障功能障碍患者中的治疗作用。方法所有病例来自2011年3月-2012年9月在本院住院的患者62例，其诊断符合急性胰腺炎肠屏障功能障碍标准。随机分为对照组32例和治疗组30例，对照组采用常规治疗方法，治疗组在常规治疗方法的基础上，加用丙氨酰谷氨酰胺静脉注射治疗。分别记录两组腹部胀痛消失时间，检测治疗前后血液内毒素（LPS）浓度及尿乳果糖／甘露醇比值（L／M）。结果对照组腹部胀痛消失时间为（8．12±0．97）d，治疗组为（6．40±1．03）d，治疗组腹部胀痛消失时间明显短于对照组；治疗后治疗组LPS水平及IMM值较对照组低。结论在常规治疗急性胰腺炎肠屏障功能障碍患者时，加用丙氨酰谷氨酰胺可取得更好的疗效。

miR-29a靶基因VEGF-A的生物信息学预测及鉴定

目的预测并鉴定miR-29a的靶基因血管内皮生长因子VEGF-A。方法采用生物信息学技术,预测miR-29a与VEGF-A mRNA 3'UTR结合位点;分别采用RT-q PCR、Western blot技术检测过表达miR-29a后,BGC-823细胞内VEGF-A表达水平的变化;采用双荧光素酶实验,验证miR-29a与VEGF-A mRNA 3'UTR的结合位点。结果生物信息学技术预测显示miR-29a可稳定结合于VEGF-A mRNA 3'UTR;miR-29a过表达后可明显抑制BGC-823细胞VEGF-A mRNA 及蛋白表达水平;双荧光素酶实验证实,与阴性对照相比,miR-29a拟似物(mimics)可通过稳定结合于VEGF-A mRNA 3'UTR抑制荧火虫荧光素酶活性(0.48±0.08 vs 1.00±0.22,P<0.05)。结论 miR-29a通过直接结合于靶基因VEGF-A mRNA 3'UTR抑制VEGF-A蛋白表达。

RNAi抑制ALK1对人胃腺癌SGC-7901细胞增殖的影响

背景与目的:人活化素受体样激酶-1(activin receptor-like kinase-1,ALK1)可促进内皮细胞增殖,与肿瘤内血管生成密切相关。本研究采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制ALK1表达,观察抑制效果以及抑制ALK1表达后对人胃癌细胞增殖的影响。方法:设计3条靶向ALK1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),克隆到真核表达质粒pGenesil-1,转染人胃癌细胞株SGC-7901。分别采用Real-time PCR和Western blot技术检测胃癌细胞ALK1 mRNA及其蛋白表达的变化,并检测细胞周期及生长曲线。结果:与阴性对照相比,第3条ALK1干扰RNA在mRNA及蛋白水平均可明显下调ALK1基因表达,并抑制SGC-7901细胞增殖。结论:RNAi技术导致的ALK1表达下调并抑制胃癌细胞增殖,ALK1可作为胃癌抗肿瘤治疗的理想靶点。