海南黎药胆木PsbA-trnH-PCR体系的建立与优化

为了建立适合黎药胆木的PsbA-trnH-PCR体系来研究不同地理居群胆木遗传多样性,本研究以植物基因组试剂盒法提取胆木基因组DNA为模板,采用单因素实验和正交试验对PsbA-trnH-PCR过程中的关键影响因素进行优化,并对PsbA-trnH-PCR产物进行测序鉴定。结果表明,最佳PsbA-trnH-PCR反应体系(25μL)为:Taq酶1.0 U,dNTPs 0.4 mmol/L,Mg^(2+)0.75 mmol/L,引物0.15μmol/L,模板20 ng,10×PCR Buffer(不含Mg^(2+))2.5μL;采用该最佳体系对胆木基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物,经单向测序获得了胆木PsbA-trnH部分序列;并建立了稳定的PsbA-trnH-PCR体系,为胆木的药材鉴别及其遗传多样性研究奠定了基础。

囊距翠雀花化学成分研究

目的:对囊距翠雀花进行化学成分研究。方法:采用正相硅胶柱层析、ODS柱、Sephadex LH-20、重结晶等技术等对囊距翠雀花进行化学成分分离、纯化,经现代波谱技术对化合物进行结构鉴定。结果:从囊距翠雀花中分离得到10个化合物,分别鉴定为:Benzoic acid,4-[(3,4-dimethoxybenzoyl)amino]-3-hydroxy-,methyl ester(1)、methyl-N-(3-carboxy-3-methylpropanoyl)Anthranilate(2)、Benzoic acid 2-[(4-methoxy-2-methyl-1,4-dioxobutyl)amino]-methylester(3)、Benzoic acid 2-[(4-methoxy-3-methyl-1,4-dioxobutyl)amino]-methylester(4)、Indole-3-carboxaldehyde(5)、苯甲酸(6)、桂皮酸(7)、对羟基苯甲酸(8)、邻苯二甲酸二丁酯(9)、β-谷甾醇(10)。结论:其中,化合物1为首次从天然产物中分离得到,化合物2~10为首次从该植物中分离得到。

HPLC法测定猴枣中鞣花酸的含量

目的:建立猴枣药材中鞣花酸含量测定方法,并对猴枣不同部位中鞣花酸的含量进行测定。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为0.1%甲酸水-乙腈(83∶17)等度洗脱;流速1.0 mL·min^(-1);检测波长254 nm;柱温:室温。结果:鞣花酸的质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系,其标准曲线及线性范围为Y=76.57X+89.62(0.049 5~989.4μg·m L^(-1),r=0.999 8);平均加样回收率为99.4%,RSD为1.2%。3批猴枣及其不同部位样品鞣花酸含量结果:平均含量为65.0%,其外层的鞣花酸平均含量最高,为91.0%,而中层、种仁鞣花酸平均含量较少,分别为4.3%、0.6%。结论:该方法简单,准确,重复性好,具有良好的稳定性,可用于猴枣药材质量分析和控制。

冬虫夏草治疗肾精亏虚证网络药理学研究

目的:采用网络药理学方法筛选冬虫夏草治疗肾精亏虚证的作用靶点及相关信号通路。方法:利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)、中国知网(CNKI)、PubMed、Drugbank、Stitch和Swiss target prediction等多种系统生物数据库检索冬虫夏草的化学成分和作用靶点;通过GeneCards、OMIM等数据库检索肾精亏虚证相关的潜在靶点,利用Cytoscape 3.7.2构建冬虫夏草活性成分-靶点网络,通过String数据库对关键靶点构建PPI网络,并进行GO富集分析和KEGG通路富集分析。结果:冬虫夏草筛选出13个化合物和19个靶点参与治疗肾精亏虚证,通过蛋白互作(PPI)分析PTGS2、CNR1、PPARA、SLC6A2等关键靶点。GO分析结果显示主要涉及小分子代谢调节、羧酸结合、膜筏等生物功能,KEGG通路富集筛选得到12条信号通路(P<0.05),主要涉及到钙信号通路、精氨酸生物合成信号通路、胆固醇代谢信号通路等。结论:冬虫夏草能通过多成分、多靶点、多通路治疗肾精亏虚证。

猴枣化学成分研究

目的对猴枣(Phyto bezoar)的化学成分进行研究。方法采用柱层析方法对猴枣进行分离、纯化,经现代波谱技术对化合物进行结构鉴定。结果从猴枣中分离得到4个化合物,分别鉴定为猴枣素A(1)、5,8-dimethoxyl-6α,8α-benzocoumarin(2)、鞣花酸磺酸钠(3)、没食子酸(4)。结论化合物1~4均为首次从猴枣中分离得到,其中化合物1为新化合物,命名为猴枣素A(phytobezoarin A)。

基于网络药理学和分子对接技术探讨冬虫夏草治疗肾纤维化的潜在作用机制

为了探究冬虫夏草治疗肾纤维化的分子机制,本研究运用网络药理学方法筛选出冬虫夏草抗肾纤维化的活性成分、潜在作用靶点及相关信号通路,并对关键的化合物和靶点进行分子对接。结果表明,冬虫夏草共有22个化合物和364个潜在靶点参与治疗肾纤维化,蛋白互作(PPI)分析出IL-6、TNF-α、MAPK3、EGFR、SRC、CASP3和MAPK1等关键潜在靶点,KEGG通路富集筛选得到163条信号通路。分子对接结果显示,冬虫夏草治疗肾纤维化过程中,其核心化合物金色酰胺醇酯、啤酒甾醇、酒渣碱、花生四烯酸、11,14-二十碳二烯酸分别与PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD、MAPK1、MAPK3、RELA等具有良好的结合性能。分析结果显示,冬虫夏草具有通过多成分、多靶点、多通路减缓肾纤维化的潜力,为其抗肾纤维化临床使用提供了一定的依据。