茶黄素激活Nrf2/HO-1通路保护血管内皮细胞氧化应激损伤

为探讨茶黄素(Theaflavin,TF)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的保护效应及作用机制,将人脐静脉血管内皮细胞HUVEC分为对照组、损伤组(0.2 mmol·L^(-1) H_2O_2处理)和TF预处理组(2.0、5.0、10.0μmol·L^(-1)TF和0.2 mmol·L^(-1) H_2O_2处理)。损伤组和TF组均以H_2O_2处理24 h,其中TF组先以不同浓度TF预处理2 h,对照组均以定量溶剂处理。以MTT法测定细胞活力,DCFH-DA探针测定活性氧(ROS)水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot测定蛋白表达水平,相应试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)活性。结果显示,与对照组相比,损伤组细胞活力显著降低,LDH释放量增加,NO水平降低,胞内ROS水平升高,MDA增加,抗氧化酶活力降低,细胞凋亡升高;TF预处理能够显著提高细胞活力,降低LDH水平,维持NO水平,降低胞内ROS水平及MDA的产生,提高抗氧化酶活力,并抑制细胞凋亡;进一步研究显示,TF能够激活Nrf2/HO-1通路,且Nrf2抑制剂会显著降低TF的内皮细胞保护效应。可见,TF能够有效抑制H_2O_2诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤,其机制至少部分是通过激活Nrf2/HO-1通路实现的。

茶黄素双没食子酸酯对高脂饮食诱导小鼠肝脏损伤的影响及机制探讨

目的探讨茶黄素-3,3’-双没食子酸酯(theaflavin-3,3’-digallate,TFDG)膳食干预对高脂饮食诱导小鼠肝脏损伤的保护效应及相关机制。方法将C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组(NC)、模型组(MC)、TFDG干预组(TF5和TF10),NC组喂食普通饲料,其余3组喂食高脂饲料,TF5和TF10组分别以5 mg/kg和10 mg/kg TFDG灌胃,NC和MC组以生理盐水灌胃,分组处理12周;检测小鼠肝指数、血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,观察肝组织病理形态学变化,ELISA检测肝组织炎症因子水平,Western blot检测蛋白表达水平,qRT-PCR检测miR-223水平。结果高脂饮食诱导小鼠肝指数显著升高,血清ALT和AST水平明显上升,TFDG膳食干预可有效降低以上肝功指标(P<0.05);病理学观察表明,TFDG干预减少肝组织脂滴形成,脂含量检测结果也表明,TFDG干预显著降低肝组织TG和TC的含量(P<0.05);ELISA结果显示,高脂饮食诱导小鼠肝脏IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著升高,TFDG干预可显著抑制肝脏炎症反应(P<0.05);Western blot检测结果显示,高脂饮食小鼠肝脏NLRP3、caspase-1和IL-1β的表达明显升高,TFDG干预可显著抑制NLRP3炎症通路激活(P<0.05)。TFDG干预可显著上调高脂条件下肝细胞miR-223的表达,以miR-223寡核苷酸抑制物阻断TFDG对miR-223表达的影响后,其对炎症反应的抑制作用显著降低(P<0.05)。结论TFDG可有效减轻高脂饮食诱导的肝脏损伤及炎症反应,其机制可能是通过上调miR-223抑制NLRP3通路实现的。