虾夷马粪海胆LRCH2-Like基因的克隆与表达特征分析

本实验采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得了一条虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus inter-medius)LRCH2-like基因的全长cDNA序列。SiLRCH2-like基因全长为2446 bp,其中编码区为1644 bp,3’-UTR为609 bp,5’-UTR为193 bp,编码548个氨基酸,预测的蛋白分子量为59.9 KDa,理论等电点为4.07,为酸性蛋白,有1个Na-Ca-ex-superfamily结构域和7个LRR结构域。我们采用实时定量PCR技术分析了SiLRCH2-like基因在各组织中的表达情况。他在所有检测的组织中均有表达,在雌性性腺中表达量最高,其次是肠道、管足,体腔细胞和围口膜中表达量较少,在雄性性腺中几乎检测不到表达。我们也检测了该基因在强壮弧菌(Vibrio fortis)、脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)、葡聚糖(WGP)、聚肌胞苷酸(polyI:C)五种病原刺激后的体腔细胞中的表达情况。SiLRCH2-like基因在PGN处理后在12 h出现了表达高峰,在WGP处理后出现了表达下调,而其他病原处理后表达上调不明显。研究结果表明,SiLRCH2-like基因参与了虾夷马粪海胆的NLR信号通路,它在海胆的天然免疫系统中发挥了重要的作用。