α-胞衬蛋白抗原多肽的筛选及其在干燥综合征临床诊断中的意义

目的:筛选鉴定干燥综合征特异性α-胞衬蛋白抗原多肽,进一步研究该抗原多肽在干燥综合征(SS)疾病临床诊断中的意义。方法:采用固相法合成α-胞衬蛋白第1～59位氨基酸区域的5条多肽,利用酶联免疫吸附法(ELISA)比较合成多肽与干燥综合征患者血清IgG的反应强弱,确定最佳α-胞衬蛋白抗原多肽;以筛选出的最佳α-胞衬蛋白抗原多肽作为包被抗原,检测原发性SS患者135例,继发性SS患者25例,系统性红斑狼疮(SLE)患者48例,类风湿关节炎(RA)患者88例和正常人83例血清中的抗α-胞衬蛋白抗原多肽IgG抗体。结果:合成的5条多肽中有一条(F5)与SS血清IgG反应最强,抗F5多肽抗体(α-F5-PA)在原发性SS患者中的阳性率(78.5%)明显高于SLE(10.4%)、RA(21.6%)患者及正常人(6%)(P<0.01)。抗F5多肽抗体在原发性SS诊断中的敏感性为78.5%,特异性为86.8%,而且该抗体的检测对于SSA抗体、SSB抗体或ANA阴性的原发性SS患者的诊断具有补充作用。结论:F5多肽作为最佳α-胞衬蛋白抗原多肽。

人内质网分子伴侣BiP抗原表位筛选及其在RA血清学诊断中的作用研究

目的:筛选鉴定人内质网分子伴侣BiP抗原表位多肽,探讨其在类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)血清学诊断中的价值。方法:运用计算机软件分析BiP蛋白的结构特点及抗原决定簇分布,根据结果设计合成系列多肽。比较合成多肽与RA患者血清(BiP抗体阳性)IgG的反应强弱,鉴定抗原抗体反应最强的抗原表位多肽。进一步以获得的BiP抗原表位多肽作为包被抗原,检测79例RA患者、34例系统性红斑狼疮(SLE)患者、66例干燥综合征(SS)患者和173例正常人血清中抗BiP抗原表位多肽IgG抗体水平。结果:筛选到一条与RA患者血清反应最强的多肽(N403),抗N403多肽IgG抗体在RA患者中的阳性率(67%),明显高于SS患者(29%)、SLE患者(0%)、和正常人(0%)(P<0.01)。抗N403多肽IgG抗体在RA血清学诊断中的敏感性为67%,特异性为93%。而且该抗体的检测对于RF、CCP、HRF、RA33、AKA、APF等抗体阴性的RA患者的诊断具有重要意义。结论:筛选获得的BiP抗原表位多肽N403,其检测抗体在RA临床血清诊断中具有很好的应用价值。

毒蕈碱受体3抗原表位多肽诱导干燥综合征动物模型的研究

利用毒蕈碱受体3(M3R)抗原表位多肽N49免疫BALB/c小鼠,以生理盐水注射小鼠作为对照组,检测各组小鼠血清抗N49多肽抗体和颌下腺淋巴细胞浸润情况。结果显示,多肽免疫组小鼠血清抗N49多肽抗体阳性率达100%(13/13),抗体滴度普遍从免疫后第21天开始显著上升,其中有5只(5/13)小鼠出现颌下腺淋巴细胞浸润;对照组小鼠血清抗N49多肽抗体均为阴性,仅有1只(1/14)出现轻度颌下腺淋巴细胞浸润。进一步以M3R分子不同抗原表位多肽N251和N412为包被抗原,检测以上实验小鼠血清中的抗体情况,显示N49多肽免疫组小鼠血清中抗N251和N412多肽抗体阳性率分别为100%(13/13)和85%(11/13),且两者抗体滴度变化趋势与抗N49多肽抗体一致,而对照组小鼠血清中抗N251和N412多肽抗体均为阴性。表明N49多肽较成功地建立了BALB/c小鼠的干燥综合征(SS)模型,诱导出了典型的自身抗体、颌下腺淋巴细胞浸润和自身抗原M3R分子内表位扩展等特征,为进一步研究M3R等自身抗原在SS发生中的作用机制奠定了基础。

毒蕈碱受体3抗原表位筛选及其在原发性干燥综合征诊断中的作用

运用计算机软件分析毒蕈碱受体3(M3R)蛋白的结构特点及抗原决定簇分布,根据结果设计合成3条多肽。比较合成多肽与抗M3受体抗体阳性干燥综合征(SS)患者血清IgG的反应强弱,获得一条抗原抗体反应最强的抗原表位多肽(N49)。进一步以多肽N49作为包被抗原,检测原发性SS(pSS)患者41例,继发SS(sSS)患者25例,系统性红斑狼疮(SLE)患者34例,类风湿关节炎(RA)患者80例和正常人174例血清中抗M3多肽IgG抗体,结果显示该多肽抗体在原发性SS患者血清中的阳性率为53.7%,明显高于sSS患者28%、SLE患者8.8%、RA患者25%和正常人12.1%(P<0.05)。抗N49多肽抗体在pSS诊断中的敏感性为53.7%,特异性为83.7%,而且该抗体的检测对于抗SSA抗体、抗SSB抗体或抗α-胞衬蛋白(-αfodrin)抗体阴性的pSS患者的诊断具有补充作用。表明,筛选获得的M3抗原表位多肽N49,其检测抗体在pSS临床血清诊断中具有很好的应用价值。