高成瘤性前列腺癌细胞亚克隆细胞株的制备及其生物学特性的研究

目的:建立人前列腺癌LNCap细胞高成瘤性亚克隆细胞株并探讨其生物学特性。方法:慢病毒载体PGK-luciferase-GFP转染LNCap细胞,稳转株与Matrigel混合注入SCID小鼠皮下,反复消化法原代培养皮下瘤获得亚克隆细胞株,CCK8及Transwell实验检测细胞增殖及迁移力;用亲代LNCap细胞及亚克隆细胞皮下注射SCID小鼠成瘤,观察两组瘤体生长及大小,并用生物活体发光、病理及免疫组织化学检测瘤体情况。结果:与亲代LNCap细胞相比,亚克隆细胞的生长速度增快,迁移力增强,皮下瘤成瘤率增高,荧光信号强度增加,皮下瘤组织切片HE染色镜下可见核分裂相,免疫组织化学AR染色阳性。结论:制备的人前列腺癌亚克隆细胞株其恶性生物行为增加。

适配子修饰靶向PLGA纳米基因载体的构建

化学合成了功能性三嵌段复合物乳酸乙醇酸共聚物-聚乙二醇-适配子(PLGA-PEG-Apt)。使用双乳化挥发法制备包裹DNA片段的PLGA-PEG-Apt新型纳米基因药物载体,表征检测显示:制备的纳米基因载体粒径为(225.2±8.1)nm,Zeta电位约(-35.5±-3.3)mV。扫描电子显微镜下纳米颗粒形态呈圆形,表面光滑,粒径分布较均匀。纳米粒子对TFO的包封率为(25.4±3.1)%(n=3),载药量为(1.34±0.16)μg/mg。体外释放实验研究结果显示持续释放过程达23 d,且PLGA-PEG-Apt纳米粒子呈突释之后的持续缓释过程。细胞水平实验结果显示,A10适配子修饰的纳米基因载体能更多进入靶向的前列腺癌细胞株,进而发挥其抗前列腺癌增殖的作用。该研究成功制备了靶向PLGA纳米基因载体,结果满意。

甲状腺腺瘤合并木样甲状腺炎误诊1例

患者女,58岁,乏力、干咳、咽部不适半年,颈前无痛性肿物逐渐增大1个月。入院查体：甲状腺Ⅲ度不规则肿大,质硬,无压痛,左叶下极扪及结节。实验室检查：促甲状腺激素14.16μI U/ml,抗甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体明显增高。血钙、磷和甲状旁腺素均正常。CT：①甲状腺右叶下极后方类圆形稍低密度影,边界清,向后下生长,

肝脏超声造影、增强CT及增强MRI检查肝脏局灶性病变的安全性及耐受性比较

目的比较超声造影(CEUS)与增强CT(CECT)、增强MRI(CEMRI)检查肝脏局灶性病变(FLLs)的安全性及耐受性。方法收集2015年7月在中山大学附属第三医院同时行肝脏CEUS和CECT或CEMRI的肝病患者42例,其中37例同时接受CEUS和CECT检查,36例同时接受CEUS和CEMRI检查。观察检查结束后30 min内有否造影剂不良反应,并采用视觉模拟评分法(VAS)评估检查过程中的不适。结果CEUS和CEMRI的造影剂不良反应发生率低于CECT(0比11%)。患者做CEUS的VAS评分均低于做CECT或做CEMRI的评分(均为P<0.05)。结论肝脏CEUS安全性高且耐受性好,是检查FLLs的首选方法。

TGF-β诱导肝癌细胞向肿瘤干细胞分化的研究

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)诱导肝癌细胞向肿瘤干细胞分化的机制。方法TGF-β诱导肝癌细胞(Hep G2细胞)上皮间质化(EMT),荧光定量PCR检测肝癌细胞EMT指标变化。流式细胞术、蛋白免疫印迹法及荧光定量PCR检测肝癌细胞受诱导后干细胞标志物EPCAM变化,并检测Wnt通路的β-catenin变化及激光共聚焦检测β-catenin入核情况。蛋白免疫印迹法检测β-catenin沉默后干细胞标志物上皮细胞黏附分子(EPCAM)的变化。结果 TGF-β可诱导肝癌细胞形态的改变、上皮细胞标志物E-cadherin下调和间质细胞标志物Vimentin上调,肝癌干细胞标志物EPCAM上调。TGF-β可能通过激活Wnt通路β-catenin的蛋白水平和mRNA水平,以及促进其核转录诱导肝癌细胞向干细胞分化。沉默β-catenin可以抑制TGF-β诱导肝癌细胞向干细胞分化的过程。结论TGF-β可通过激活Wnt/β-catenin通路诱导肝癌细胞向肿瘤干细胞分化。

错配修复功能缺陷的结直肠癌术后患者预后影响因素的分析

目的探讨错配修复功能缺陷(dMMR)的结直肠癌术后患者错配修复(MMR)蛋白表达情况和预后影响因素,分析辅助化学治疗(化疗)对Ⅱ、Ⅲ期dMMR结直肠癌预后的影响。方法回顾性分析dMMR结直肠癌根治性手术病例106例,分析其MMR蛋白(包括MLH1、MSH2、MSH6、PMS2)缺失的情况。单因素和多因素Cox分析dMMR结直肠癌术后患者的无病生存期(DFS)和总生存期(OS)预后影响因素,Kaplan-Meier法分析Ⅱ、Ⅲ期dMMR结直肠癌化疗组与无化疗组的差异。结果MLH1/PMS2蛋白缺失率为45%,MSH2/MSH6蛋白缺失率为18%,单个MLH1蛋白的缺失率为11%,单个MSH6蛋白的缺失率为9%,单个PMS2蛋白的缺失率为12%。单因素Cox分析显示,术前癌胚抗原(CEA)≥5 ng/ml、直肠、T4、N1、N2、神经侵犯、脉管侵犯和淋巴结获取数量<12枚是dMMR结直肠癌患者DFS的危险因素;术前CEA≥5 ng/ml、术前糖链抗原199(CA199)≥34 U/ml、直肠、T4、N1、N2和淋巴结获取数量<12枚是dMMR结直肠癌患者OS的危险因素。多因素Cox分析显示术前CEA≥5 ng/ml[HR=2.68(1.08~6.63),P=0.034]、N1[HR=2.94(1.12~7.73),P=0.028]、N2[HR=9.31(2.49~34.77),P=0.001]和淋巴结获取数量<12枚[HR=3.97(1.66~9.50),P=0.002]是dMMR结直肠癌患者DFS的独立危险因素;N1[HR=6.64(2.25~19.64),P=0.001]、N2[HR=9.68(1.92~48.96,P=0.006)]和淋巴结获取数量<12枚[HR=6.36(2.28~17.73),P<0.001]是dMMR结直肠癌患者OS的独立危险因素。Ⅱ、Ⅲ期dMMR结直肠癌化疗组与无化疗组的DFS和OS比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论术前CEA≥5 ng/ml是dMMR结直肠癌患者DFS的独立危险因素;N1、N2和淋巴结获取数量<12枚是dMMR结直肠癌患者DFS和OS的独立危险因素。辅助化疗不影响Ⅱ、Ⅲ期dMMR结直肠癌的预后。

结直肠黏液腺癌术后患者的预后影响因素分析

目的探讨结直肠黏液腺癌(MA)术后患者的预后影响因素。方法收集结直肠MA根治性手术病例81例。使用Kaplan-Meier法分析无病生存期(DFS)和总生存期(OS),单因素和多因素Cox分析结直肠MA术后患者的预后影响因素。结果结直肠MA、结肠MA、直肠MA的5年无瘤生存率分别是55%、57%和47%;5年总生存率分别为60%、62%和51%。单因素Cox分析发现T4(HR=2.174)、N2(HR=3.592)、TNMⅢ期(HR=2.435)、糖类抗原199(CA199)≥34 U/ml(HR=3.330)为结直肠MA患者DFS的危险因素;手术时间>200 min(HR=2.594)、T4(HR=2.465)、N2(HR=5.413)、TNMⅢ期(HR=3.275)、CA199≥34 U/ml(HR=4.150)和癌胚抗原(CEA)≥5 ng/ml(HR=2.636)为结直肠MA患者OS的危险因素。多因素Cox分析显示,N2和CA199≥34 U/ml是结直肠MA预后的危险因素,N2的DFS和OS的HR分别为2.763和4.113,CA199≥34 U/ml的DFS和OS的HR值分别为2.560和2.948。分层分析发现,N2(HR=5.628)是结肠MA患者DFS的危险因素,N2(HR=7.547)和CA199≥34 U/ml(HR=2.947)是结肠MA患者OS的危险因素;行辅助化学治疗是直肠MA预后的保护因素,DFS和OS的HR值分别为0.063和0.182(P均<0.05)。结论N2分期、CA199≥34 U/ml是结直肠MA术后预后的独立危险因素,辅助化学治疗是直肠MA术后患者预后的保护因素。

左右半结肠黏液腺癌术后患者生存特征分析:一项基于SEER数据库的研究

目的探讨左右半结肠黏液腺癌(MA)术后患者的生存特征差异和预后因素。方法收集监测、流行病学、最终结果(SEER)数据库中2006-2015年结肠黏液腺癌术后患者总共13594例患者,分为两组:右半结肠黏液腺癌组(n=9824)和左半结肠黏液腺癌组(n=3770),使用Kaplan⁃Meier分析两组总生存期(OS),按分期、分化程度分层对比分析OS;多因素Cox分析左右半结肠黏液腺癌术后患者的预后影响因素。结果左右半结肠黏液腺癌术后患者各肿瘤特征中存在明显差异。左右半结肠黏液腺癌的5年生存率分别是51.6%和55.0%,生存分析两组差异无统计学意义(P=0.234)。分层分析显示在AJCC分期Ⅰ期(P=0.203)、Ⅱ期(P=0.156)、Ⅲ期(P=0.08)、高分化(P=0.091)、中分化(P=0.252)和未分化(P=0.946)的左右半结肠黏液腺癌的OS对比差异无统计学意义。Ⅳ期左半结肠黏液腺癌的OS要优于右半结肠黏液腺癌(P<0.001);而低分化的右半结肠黏液腺癌的OS要优于左半结肠黏液腺癌(P=0.001)。多因素Cox分析显示,男性、年龄≥60岁、单身或未婚、丧偶、T3、T4、N1、N2、M1、低分化、未分化、淋巴结获取数量<12、CEA阳性和无化疗分别是左右半结肠黏液腺癌术后患者预后的危险因素,中分化是左半结肠黏液腺癌术后患者预后的危险因素。结论不同分化程度和分期的左右半结肠黏液腺癌术后患者表现出不完全一致的生存差异。左右半结肠黏液腺癌术后患者预后的危险因素也不完全一致。

高成瘤性前列腺癌细胞亚克隆细胞株在反基因治疗中的应用

【目的】选用高成瘤性前列腺癌细胞亚克隆细胞株LNCap1-luc构建人类前列腺癌裸鼠移植瘤模型,应用于反基因治疗,探讨该细胞株进行抗肿瘤研究的价值。【方法】采用皮下接种法制备24只荷LNCap1-luc前列腺癌移植瘤裸鼠模型,随机分为3组:三螺旋形成寡核苷酸(TFO)治疗组、序列对照寡核苷酸(SCO)非特异性对照组、生理盐水(NS)阴性对照组。瘤内注射给药6周,测量移植瘤质量和体积,计算抑瘤率。实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测肿瘤组织AR mRNA表达;免疫组化法检测AR,PSA,Ki67蛋白的表达;TUNEL法检测细胞凋亡。【结果】TF0治疗组的抑瘤率为63.16%,AR mRNA的表达水平(39.16±3.21)%,Ki67的阳性表达率(25.43±2.01)%,凋亡指数(35.76±2.35)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。TFO组AR、PSA蛋白的表达水平低于对照组。【结论】TFO能有效抑制LNCap1-luc移植瘤的生长;LNCap1-luc细胞株为前列腺癌抗肿瘤药物的研究提供了新的细胞模型,具有良好的应用价值。

肝细胞腺瘤的临床及超声特点分析

目的探讨肝细胞腺瘤(HCA)临床和超声特点,提高HCA的临床诊断能力。方法回顾性分析2008年1月至2021年5月中山大学附属第三医院经病理证实的10例HCA患者(HCA组)、17例经典型肝血管平滑肌脂肪瘤患者(CMAL组)和同时期随机检索的40例甲胎蛋白阴性的肝细胞癌患者[HCC(AFP-)组]的临床、影像及病理资料,采用t检验和χ^(2)检验分别比较HCA组与CMAL组、HCC(AFP-)组临床特点、二维超声和超声造影表现的差异。结果HCA组患者发病年龄为(36.40±16.68)岁,与HCC(AFP-)组患者在性别(男/女:5/5vs36/4)、肝炎病毒感染(是/否:0/10vs40/0)等方面比较,差异均有统计学意义(χ^(2)=8.672,P=0.010;χ^(2)=50.000,P<0.001),而与CAML组差异无统计学意义(P均>0.05)。HCA组病灶回声不具有特异性,HCC(AFP-)组二维超声多表现为低回声,2组间差异具有统计学意义(χ^(2)=8.404,P=0.011),而病灶数目、大小、形态及血供方面比较,2组差异均无统计学意义(P均>0.05);HCA与CAML组间病灶数目、大小、边界、回声、形态及血供差异均无统计学意义(P均>0.05)。HCA病灶超声造影增强模式主要表现为“高-等-等”,HCC(AFP-)组病灶超声造影增强模式表现为“高-低-低”,CAML组病灶超声造影增强模式表现为“高-高-等或高-等-等”。HCA组与CAML组间超声造影表现差异无统计学意义(P>0.05);HCA组与HCC(AFP-)组间门静脉期(高/等/低:1/6/3vs0/4/36)及延迟期(高/等/低:0/6/4vs0/1/39)增强表现比较,差异具有统计学意义(χ^(2)=15.106,P<0.001;χ^(2)=12.500,P=0.002),而动脉期增强表现差异无统计学意义(P均>0.05)。结论HCA具有一定的临床、常规二维超声和超声造影表现特点,对于女性、无乙肝感染、超声造影表现“高-等-等”的肝内占位性病变,应注意HCA的可能。