几个重组蛇毒金属蛋白酶的表达、重折叠及其生物学活性

皖南尖吻蝮蛇毒出血金属蛋白酶acutolysin A除了具有引起动物皮下出血的活性外,还具有降解纤维蛋白原和纤黏连蛋白的活性.将acutolysin A以及非出血金属蛋白酶BR的cDNA分别克隆到原核表达载体pET-22b中,并在大肠杆菌中以包涵体的形式表达了这两个重组蛇毒金属蛋白酶,即A-22b和BR-22b.经变性和复性处理后,A-22b具有明显的出血活性,但没有对纤维蛋白原和纤黏连蛋白的水解活性;而BR-22b没有出血活性,却具有降解纤维蛋白原的活性.此外,通过PCR方法构建了两个嵌合体基因C1和C2.C1是由BR基因的5′端330 bp和acutolysin A的 3′端285 bp构成的嵌合体基因;C2是由acutolysin A基因的5′端324 bp和BR的3′端336 bp构成的嵌合体基因.将它们克隆进表达载体pET-22b中得到两个表达质粒,即pC-22b和pC2-22b.并以包涵体的形式表达了相应的两个重组蛋白,即C1-22b和C2-22b.经同样的变性和复性处理后,C1-22b与BR-22b类似,具有较强的纤维蛋白原水解活性,但没有出血活性.与A-22b相似,C2-22b具有出血活性但没有对这些蛋白的水解活性.这些结果暗示,蛇毒金属蛋白酶的N端主亚结构域在出血活性上很可能起关键作用并极大地影响酶对底物的选择性.