目的探讨党参、黄精和三七等中药提取物对超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)基因启动子活性的影响。方法使用乙醇超声萃取和旋转蒸发的方法从党参、黄精和三七等中药中制备醇提物;然后从人胚肾293T(HEK-293T)细胞基因组DNA中扩...目的探讨党参、黄精和三七等中药提取物对超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)基因启动子活性的影响。方法使用乙醇超声萃取和旋转蒸发的方法从党参、黄精和三七等中药中制备醇提物;然后从人胚肾293T(HEK-293T)细胞基因组DNA中扩增SOD基因启动子DNA片段并连接入启动子报告质粒pGL3-Basic中,通过荧光素酶活性检测成功构建pGL3-SOD启动子报告质粒;细胞活力测定(MTS法)确定了中药提取物的使用浓度后,将pGL3-SOD启动子报告质粒转染HEK-293T细胞,然后加入党参、黄精和三七等中药提取物,并通过检测荧光素酶活性来测定这些中药提取物对SOD基因启动子活性的影响。结果PCR扩增出1500 bp SOD基因启动子片段,大小与文献和GenBank数据库报道一致,成功构建pGL3-SOD启动子报告质粒;与转染空载体pGL3-Basic相比,转染pGL3-SOD启动子报告质粒的HEK293T细胞的荧光素酶活性增强了72倍;党参、黄精和三七中药提取物在50~400μg/mL时对HEK-293T细胞的活力影响不明显,400μg/mL的党参、黄精和三七提取物增强SOD基因启动子活性分别为1.79、1.72和1.57倍。结论成功构建pGL3-SOD启动子报告质粒并具有启动荧光素酶活性;党参、黄精和三七增强SOD的活性可能是通过增强其基因的启动子活性水平来实现。展开更多
文摘目的探讨党参、黄精和三七等中药提取物对超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)基因启动子活性的影响。方法使用乙醇超声萃取和旋转蒸发的方法从党参、黄精和三七等中药中制备醇提物;然后从人胚肾293T(HEK-293T)细胞基因组DNA中扩增SOD基因启动子DNA片段并连接入启动子报告质粒pGL3-Basic中,通过荧光素酶活性检测成功构建pGL3-SOD启动子报告质粒;细胞活力测定(MTS法)确定了中药提取物的使用浓度后,将pGL3-SOD启动子报告质粒转染HEK-293T细胞,然后加入党参、黄精和三七等中药提取物,并通过检测荧光素酶活性来测定这些中药提取物对SOD基因启动子活性的影响。结果PCR扩增出1500 bp SOD基因启动子片段,大小与文献和GenBank数据库报道一致,成功构建pGL3-SOD启动子报告质粒;与转染空载体pGL3-Basic相比,转染pGL3-SOD启动子报告质粒的HEK293T细胞的荧光素酶活性增强了72倍;党参、黄精和三七中药提取物在50~400μg/mL时对HEK-293T细胞的活力影响不明显,400μg/mL的党参、黄精和三七提取物增强SOD基因启动子活性分别为1.79、1.72和1.57倍。结论成功构建pGL3-SOD启动子报告质粒并具有启动荧光素酶活性;党参、黄精和三七增强SOD的活性可能是通过增强其基因的启动子活性水平来实现。
