咳喘停袋泡颗粒抑制IL-33/ILC2s和致病性T细胞干预过敏性气道炎症的作用机制

目的研究咳喘停袋泡颗粒(Kechuanting,KCT)抑制IL-33/ILC2s和致病性T细胞干预过敏性气道炎症的作用机制。方法网络药理学分析KCT干预哮喘的潜在靶点和机制。以OVA诱导过敏性哮喘模型小鼠。组织病理染色观察肺损伤变化;ELISA和荧光定量PCR分别检测Th2型哮喘中关键炎症因子及其mRNA表达水平;Western blot检测MAPK通路中相关蛋白磷酸化水平;流式细胞术检测ILC2s、Th1、Th17、Th2和Treg细胞的比例。结果网络药理学鉴定出KCT治疗哮喘的227个主要活性成分和143个共同靶点,主要富集到MAPK和IL-17等信号通路。进一步验证实验显示,KCT干预明显减轻了哮喘小鼠肺部炎症损伤程度,减少B细胞数量及IL-4、TNF-α、TGF-β的产生,下调肺组织中JNK磷酸化水平以及Il-33、Bcl11b、Rorα、Tcf-7、Jun、MAPK3、MAPK14 mRNA表达。KCT干预减少了哮喘小鼠肺和脾中ILC2s和Th17数量,抑制肺中Th2细胞浸润。结论KCT对过敏性哮喘气道炎症有较好的治疗作用,其机制与抑制IL-33/ILC2s通路、致病性T细胞亚群和JNK-MAPK信号通路相关。

新型查尔酮衍生物MW-9抑制MAPK信号通路治疗小鼠溃疡性结肠炎

目的揭示新型查耳酮衍生物MW-9抑制MAPK通路治疗溃疡性结肠炎的效应机制,为查尔酮衍生物MW-9治疗溃疡性结肠炎提供科学依据。方法建立细菌脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型,MTT法检测MW-9对细胞活度的影响;Griess法检测细胞NO含量;ELISA法检测细胞培养上清及血清中炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平。构建葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型,记录体质量;HE染色检测结肠病理损伤程度;Western blot测定结肠组织MAPK通路关键蛋白p38、ERK1/2、JNK的磷酸化水平。结果MW-9明显抑制RAW264.7细胞NO的产生,其IC50为20.47 mg·L^(-1),抑制炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的高表达(P<0.05)。MW9在低于6 mg·L^(-1)的浓度下无明显细胞毒性。MW-9治疗后,小鼠体质量下降减缓,可降低血清中促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平;与模型组比较,MW-9明显降低MAPK通路中磷酸化p38和ERK1/2蛋白的表达水平。结论新型查耳酮衍生物MW-9在体内外具有明显的抗炎活性,其治疗溃疡性结肠炎作用机制可能与抑制MAPK信号通路有关。

黄芪甲苷调控CD45 PTPase介导抗脓毒症免疫机制的研究

目的研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASI IV)抗脓毒症效应及免疫学机制,为黄芪临床应用脓毒症治疗提供科学依据。方法采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症小鼠模型,随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷组、Anti-CD45单抗组、Anti-CD45单抗+黄芪甲苷组。H&E染色检测肺组织病理损伤;流式细胞术检测脾脏Th1细胞表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Th1细胞相关基因(IL-2、Tbet、STAT1和STAT4)mRNA的表达。结果与模型组比较,黄芪甲苷干预显著提高脓毒症模型小鼠生存率,减轻模型小鼠肺组织病理损伤。CD45抗体干预后,阻断了黄芪甲苷提高生存率和减轻肺组织病理损伤的作用。机制研究结果表明,黄芪皂苷显著增加模型小鼠Th1细胞(CD4+IFN-γ+)比例,上调Th1细胞相关基因(IL-2、T-bet、STAT1、STAT4)mRNA表达,CD45抗体干预后,减少了黄芪甲苷促脾淋巴细胞Th1细胞比例,阻断黄芪皂苷促Th1细胞相关基因。结论黄芪甲苷通过调控CD45分子,提高Th1细胞介导的免疫反应,介导抗脓毒症效应。

基于网络药理学探讨青蒿治疗狼疮性肾炎的作用靶点分析

目的基于网络药理学探究青蒿治疗狼疮性肾炎的作用靶点及潜在作用机制。方法通过TCMSP数据库检索出青蒿中所含有的化学有效成分及作用靶点,并经Uniprot数据库进行名称标准化处理。再利用OMIM和GeneCards数据库检索LN相关基因,利用R软件绘制韦恩图并筛选出青蒿治疗LN的共同作用靶点,利用String数据库构建蛋白互作PPI网络,利用Cytoscape 3.8.0软件构建药物-疾病-靶点网络可视图并筛选出核心基因,对共同作用靶基因进行GO功能富集和KEGG通路富集分析。结果从青蒿中筛选得到22个有效成分,去除重复靶点得青蒿靶点42个,LN中相关靶点有842个,利用韦恩图筛选出药物-疾病共同靶点10个。GO功能富集分析显示青蒿治疗LN生物学过程和功能主要集中在细菌反应、膜微区、细胞因子受体结合、信号受体调节活性等。KEGG通路富集分析显示,青蒿治疗LN主要与AGE-RAGE信号通路、流体剪切应力、TNF信号通路、血脂和动脉粥样硬化、PI3K/AKT信号通路和IL-17信号通路等相关。结论通过分析药物主要活性成分,构建PPI网络和青蒿-活性成分-靶点-疾病网络图并进行GO功能富集和KEGG通路富集分析,揭示青蒿治疗LN具有多成分、多靶点和多通路的作用特点,为青蒿临床应用治疗LN的机制提供了思路和方法。

基于TMT蛋白质组学研究黄芪甲苷干预脓毒症肺损伤作用靶点的研究

目的采用TMT蛋白质组学研究黄芪甲苷对脓毒症小鼠肺组织蛋白组学的影响,为其临床应用治疗脓毒症提供科学依据。方法采用盲肠结扎穿刺术(Cecal Ligation-Peferation,CLP)复制脓毒症小鼠模型,随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷组。H&E染色检测肺组织病理损伤;流式细胞术检测B细胞表达;提取肺组织蛋白,运用TMT蛋白质组学技术比较组间差异蛋白的表达,并进行生物信息学分析。结果与假手术组比较,模型组肺组织炎症细胞浸润严重,结构塌陷;黄芪甲苷干预显著减轻脓毒症模型小鼠肺组织病理损伤。与模型组比较,黄芪甲苷药物干预组小鼠脾淋巴细胞B细胞(B220+)表达无明显影响(P>0.05)。TMT蛋白质组学结果分析肺组织蛋白差异成分,结果共鉴定出33个显著性差异蛋白,黄芪甲苷干预上调17个蛋白,下调16个蛋白。GO富集分析显示,黄芪甲苷主要干预生物功能过程,其中与脓毒症肺损伤密切相关差异主要蛋白是介导黏膜免疫的IgA产生通路。结论黄芪甲苷对脓毒症诱导的肺损伤具有显著作用,其效应机制主要与干预B细胞分泌的IgA介导的黏膜免疫有关,该研究为黄芪临床治疗脓毒症奠定了基础。

基于网络药理学研究瓜子金抗脑缺血损伤的效应机制

目的基于网络药理学探讨瓜子金对脑缺血疾病治疗的作用机制。方法通过TCMSP数据库挖掘出瓜子金中所含有的化学有效成分及作用靶点并经Uniprot数据库标准化,运用Cytoscape3.8.0软件构建活性成分-关键靶点网络可视图。再利用OMIM、TTD、TCMSP、ETCM、DisGeNET和GeneCards数据库检索脑缺血相关基因,利用韦恩图筛选出瓜子金中活性成分治疗脑缺血的作用靶点,利用Cytoscape3.8.0软件构建药物-疾病-靶点网络可视图。利用R语言cluster Profiler包进行蛋白互作用PPI网络分析,以及GO功能和KEGG通路富集分析,并验证网络分析结果。结果从瓜子金所含59个皂苷成分和41个黄酮类成分中筛选得到4个活性化合物及147个潜在靶点,4个活性成分分别是常春藤皂苷元、槲皮素、山奈酚、1,3,7-三羟基-9H-氧杂蒽-9-酮。脑缺血中相关靶点有1671个,利用VENN图筛选出药物-疾病共同靶点105个。GO功能富集分析,包括生物学过程119条;KEGG通路富集分析显示163条通路,主要涉及血脂和动脉粥样硬化、糖尿病并发症的AGE-RAGE信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、IL-17信号通路等。结论瓜子金对治疗脑缺血具有多成分、多靶点和多通路的作用特点,为瓜子金临床应用治疗脑缺血提供了思路和方法。

蠲痹颗粒醇提物抑制Th17细胞表达治疗类风湿关节炎作用机制研究

目的:研究蠲痹颗粒醇提物抑制致病性Th17细胞表达治疗类风湿关节炎(RA)的作用机理,阐述扶阳学派及吴生元教授运用扶阳理论治疗RA的分子机制。方法:构建牛Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎(CIA)模型,模型小鼠按随机数字表法分为CIA模型组(Model组)和蠲痹颗粒醇提物干预组(JBKL组)各10只。苏木精-伊红(HE)染色检测CIA小鼠关节炎病理损伤程度;流式细胞术检测Th17、Treg细胞表达水平;荧光定量PCR法检测Th17细胞相关基因的表达。结果:与Model组比较,JBKL组小鼠关节组织学评分降低(P<0.05)。与Model组比较,JBKL组Foxp3^(+)CD4^(+)T(调节性T细胞)表达水平上调(P<0.05)。与Model组比较,JBKL组小鼠脾淋巴细胞IL-17^(+)CD4^(+)比例降低(P<0.05),Treg/Th17比值增加(P<0.05)。JBKL组小鼠脾淋巴细胞IL-17A、IL-23p19、IL-21、IFN-γ的mRNA表达水平低于Model组,Th17特异转录因子RORγt的转录水平低于Model组(P<0.05)。结论:蠲痹颗粒醇提物可能抑制Th17细胞相关基因表达来抑制Th17细胞分化,上调具有负调控作用的Treg细胞表达,从而介导对RA的治疗作用。该研究为温阳散寒除湿法治疗寒湿痹阻型RA提供科学基础,丰富和发展了中医治疗痹证理论的科学内涵。

蠲痹颗粒醇提物调控MAPK信号转导抑制T细胞活化效应机制的研究

目的探讨蠲痹颗粒醇提物(JBKL)在丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导通路中抑制T细胞活化的效应机制,揭示扶阳学派应用扶阳理论治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的现代免疫学机制。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测JBKL对伴刀豆球蛋白(Con A)、脂多糖(LPS)诱导T、B脾淋巴细胞增殖活性及细胞毒性的影响;建立体外抗CD3单克隆抗体(Anti-CD3 mAb)诱导的T细胞活化模型,MTT检测JBKL对T细胞体外活化增殖的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)测定干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-17A(IL-17A)、IL-10和IL-6在细胞上清中的含量;蛋白质印迹法(Western blot)检测体外纯化CD4~+T细胞中ERK和p38蛋白的磷酸化水平。结果JBKL在浓度30μg/mL时显著抑制Con A、Anti-CD3 mAb和LPS诱导的T细胞和B细胞增殖功能;JBKL在浓度(3~30)μg/mL时对正常脾淋巴细胞无明显的细胞毒性作用,明显下调IFN-γ、IL-17A和促炎因子IL-6的含量,而促进IL-10的分泌;JBKL在浓度100μg/mL时抑制MAPK信号通路,可降低纯化CD4~+T细胞磷酸化ERK和p38蛋白的表达。结论JBKL阻碍T细胞介导的免疫反应,减少MAPK信号通路磷酸化ERK和p38蛋白表达,可能是其治疗RA的重要分子机制之一。

滋阴清热活血方联合激素对系统性红斑狼疮肾纤维化干预机制的研究

目的研究滋阴清热活血方联合激素对MRL/lpr狼疮小鼠肾纤维化的影响,揭示该方抗狼疮肾纤维化效应机制。方法将MRL/lpr自发性狼疮小鼠按尿蛋白水平平均分为5组:模型组、醋酸泼尼松组、滋阴清热活血方组、滋阴清热活血方加激素全量组、滋阴清热活血方加激素半量组。药物干预4周后,H&E染色和Masson染色分别检测狼疮小鼠肾组织病理学改变和肾纤维变化情况;免疫荧光法检测肾脏IgG免疫复合物沉积;Western blot法测定模型肾脏Smad4和Smad7蛋白表达水平。结果与模型组比较,各治疗组小鼠肾脏病理损伤显著减少;Masson染色结果显示,与模型组比较,滋阴清热活血方组和醋酸泼尼松组胶原沉积减少;与滋阴清热活血方组比较,滋阴清热活血方加激素全量组和滋阴清热活血方加激素半剂量组胶原沉积面积均减少。免疫荧光染色检测结果显示,与模型组比较,滋阴清热活血方组和醋酸泼尼松组肾脏免疫复合物沉积减弱;与滋阴清热活血方组比较,滋阴清热活血方加激素全量和半量组肾脏IgG免疫复合物荧光显著减少。与模型组比较,滋阴清热活血方组、滋阴清热活血方加激素全量组和激素半剂量组肾组织Smad4蛋白显著下降;滋阴清热活血方组、滋阴清热活血方加激素全量组和激素半剂量组肾组织Smad7显著增加,其中,中药联合激素的2组尤为显著。结论滋阴清热活血方联合激素对MRL/lpr小鼠肾组织肾纤维化具有较好的改善作用,其作用机制可能与抑制Smad4表达、上调Smad7蛋白表达有关,该研究为临床滋阴清热活血方联合激素治疗系统红斑狼疮肾纤维化提供了生物学依据。

六味二至四妙丸调控NF-κB信号通路介导治疗狼疮性肾炎作用机制的研究

目的:探讨六味二至四妙丸(LWEZSMW)调控NF-κB信号通路改善狼疮性肾炎的效应机制。方法:50只MRL/lpr自发性狼疮小鼠随机分为5组:模型组、阳性药物组(泼尼松龙2 mg·kg^(-1))、六味二至四妙丸低剂量组(9.45 g·kg^(-1))、中剂量组(18.90 g·kg^(-1))和高剂量组(37.80 g·kg^(-1))。每组10只,连续给药干预35 d后,考马斯亮蓝法检测各组小鼠蛋白尿水平。H&E染色检测小鼠肾脏病理损伤程度;免疫荧光检测各组小鼠肾脏免疫复合物沉积水平。流式细胞术检测各组小鼠脾脏和淋巴结CD11b+单核细胞比例。Western blot检测肾组织中p-IκB、p-NF-κB蛋白表达水平。结果:六味二至四妙丸药物干预后可显著减轻狼疮肾组织病理损伤,减少肾脏免疫复合物沉积,降低蛋白尿水平(P<0.05);与模型组比较,六味二至四妙丸高剂量组淋巴细胞中CD11b+炎症细胞比例显著降低(P<0.01),肾组织中p-IκB、p-NF-κB蛋白表达水平显著低于模型组(P<0.05)。结论:六味二至四妙丸对狼疮性肾炎具有明显保护效应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路介导炎症反应有关,为六味二至四妙丸临床治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)提供科学依据和生物学基础。