普洱茶多酚的提取及抗氧化作用研究

利用微波辅助法提取普洱茶多酚,并对提取参数进行优化,同时测定其抗氧化性能。对微波功率、液固比和提取时间3个因素进行Box-Behnken设计,以多酚含量为响应值,利用响应面分析法对提取参数进行优化,测定提取物对羟自由基和2,2-二苯代苦味酰基(DPPH.)自由基的清除作用。在微波功率539W(中高火)、液固比为50∶1(V∶W)条件下提取2.4min,多酚含量为5.32%。普洱茶提取物对羟基自由基的半抑制浓度为31.13μg/mL,低于绿茶提取物49.36μg/mL;当多酚浓度达到30μg/mL,普洱茶提取物对DPPH.自由基的清除效果与绿茶提取物相当。响应面法优化普洱茶多酚的提取是可行的,普洱茶多酚具有较强的羟自由基和DPPH.自由基清除能力。

PCR检测牛乳中大肠杆菌基因组DNA的提取方法

为获得一种适于牛乳样品大肠杆菌PCR检测的基因组DNA提取方法,对饱和酚法、CTAB法、试剂盒法及溶剂裂解法等4种提取方法加以比较,通过考察DNA的纯度、定量分析以及PCR分析,确定一套有效、快速、适合牛乳中提取大肠杆菌的基因组DNA方法——溶剂热裂解法。结果显示该方法提取的DNA模板,适于PCR扩增大肠杆菌DNA,可以用于牛乳中的大肠杆菌检测。

3种特异性IgY与IgG相对亲和力特性的比较研究

采用硫氰酸铵和尿素洗脱ELISA法两种方法,分别对牛β-酪蛋白、κ-酪蛋白和大肠杆菌O157:H7与对应抗原的卵黄抗体(IgY)与免疫球蛋白(IgG)抗体相对亲和力特性进行比较研究。结果表明:3种特异性IgY与抗原的相对亲和力比IgG要高,对蛋白抗原,两种抗体的相对亲和力相差不大,而对大肠杆菌O157:H7,两种抗体的差别明显加大,IgY的相对亲和力较IgG强。两类乳源蛋白抗体亲和力比较,发现κ-酪蛋白抗体与抗原的亲和力高于β-酪蛋白抗体,前者用于乳品免疫检测中,可提高方法灵敏度。

纳米胶体金的制备及其抗体标记研究

研究通过光谱扫描,确定了柠檬酸钠还原法制备纳米胶体金的最佳条件:100mL0.01%四氯金酸溶液中添加1%柠檬酸钠2mL,反应10min,制备的胶体金粒径为15～20nm,并将其与抗牛β-酪蛋白IgG连接制得了胶体金标记抗体,通过考马斯亮蓝法测得蛋白标记率为74.5%,采用间接ELISA方法测得金标抗体的效价在1∶4000以上,抗体金标后活性良好,可以满足免疫检测的需要。

两种胶体金制备方法的比较研究

通过控制还原剂的加入量(20 mL 0.01%四氯金酸溶液中1%柠檬酸钠和抗坏血酸添加量分别为300μL与400μL),利用柠檬酸钠和抗坏血酸还原两种方法制备得到了平均粒径为20 nm的胶体金颗粒,并对其进行了抗体标记比较研究.结果显示:抗坏血酸还原法制备得到的胶体金标记的蛋白量为15.18μg/mL(蛋白质量/胶体金体积,下同),高于柠檬酸钠还原法的5.07μg/mL,间接ELISA法测得其效价(1∶800)也比柠檬酸钠还原法制备的颗粒标记物高(1∶400),这表明抗坏血酸还原法更适合于标记用胶体金颗粒的制备.