CHI3L1对软脂酸处理后人脐静脉内皮细胞氧化应激的影响

目的观察壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)对软脂酸处理后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激水平的影响,并初步探讨其分子机制。方法体外培养HUVECs,采用不同浓度CHI3L1处理HUVECs 24 h,MTT法检测细胞增殖情况。按照处理因素分为对照组(未处理),软脂酸组及CHI3L1+软脂酸组,软脂酸组用100μmol/L软脂酸处理24 h,CHI3L1+软脂酸组先用100 ng/ml CHI3L1预孵育2 h,随后加入100μmol/L软脂酸共同处理24 h。Western blotting检测细胞核及细胞质p65、核纤层蛋白(Lamin)B、肌动蛋白(Actin)、血红素氧合酶(HMOX)、还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ依赖醌氧化还原酶(NQO1)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、内质网氧化还原1样蛋白(Ero1-Lα)、钙连蛋白(Calnexin)、蛋白二硫键异构酶(PDI)、伴侣蛋白/葡萄糖调节蛋白(BIP1/GRP)78、内质网核信号转导蛋白(IRE)-1α及磷酸化真核细胞翻译启动因子(p-eIF)2α含量。ELISA法测定白细胞介素(IL)-6及肿瘤坏死因子(TNF)-α的分泌水平,DNA结合实验测定核因子(NF)-κB活性的变化。免疫荧光检测Nrf2的核转位。结果MTT结果显示,与对照组相比,100 ng/ml CHI3L1作用24 h并不能降低HUVECs活性(94.17±6.13 vs.100.00±0.00)。Western blotting检测结果显示,CHI3L1+软脂酸组细胞核中p65水平低于软脂酸组(0.77±0.04 vs.0.92±0.09,P<0.05),细胞质中p65含量高于软脂酸组(0.45±0.04 vs.0.27±0.05,P<0.05);CHI3L1+软脂酸组p65 DNA结合活性低于软脂酸组(0.26±0.04 vs.0.43±0.07,P<0.05)。ELISA法检测结果显示,CHI3L1+软脂酸组TNF-α(85.91±21.16)pg/ml及IL-6(71.43±10.56)pg/ml的含量明显低于软脂酸组[分别为(221.12±18.71)pg/ml及(95.03±11.2)pg/ml,P<0.05]。Western blotting检测结果显示,CHI3L1+软脂酸组中的HMOX及NQO1水平(分别为0.58±0.07、1.08±0.04)明显高于软脂酸组(分别为0.32±0.09、0.62±0.09,P<0.05)。免疫荧光结果显示,与软脂酸组比较,CHI3L1+软脂酸组细胞核中的Nrf2含量增加(10.26%±4.53%vs.78.64%±3.16%)。Western blotting结果显示,CHI3L1+软脂酸组PI3K/Akt的磷酸化水平明显高于软脂酸组(0.51±0.04 vs.0.15±0.09,P<0.05),CHI3L1+软脂酸组Ero1-Lα(0.32±0.02 vs.0.39±0.09)、Calnexin(0.42±0.04 vs.0.54±0.07)、PDI(0.19±0.02 vs.0.24±0.05)、BIP1/GRP78(0.11±0.01 vs.0.17±0.03)、IRE-1α(0.19±0.03 vs.0.33±0.04)及p-eIF2α(0.22±0.07 vs.0.67±0.09)等分子的表达量明显低于软脂酸组(P<0.05)。结论CHI3L1能抑制软脂酸处理后HUVECs中的细胞因子分泌,并减轻内质网应激水平。