微小RNA-483-5p调控TIMP2表达对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-483-5p(miR-483-5p)对膀胱癌(BC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步分析其可能的分子机制。方法通过TCGA数据库分析miR-483-5p在BC组织中的表达及与预后的关系,荧光实时定量PCR检测BC细胞T24中miR-483-5p和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-2的表达水平。将miR-483-5p模拟物(mimic)和阻碍物(inhibitor)转染T24细胞,应用CCK-8和Transwell法评估miR-483-5p对T24细胞增殖和迁移侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验分析miR-483-5p和TIMP-2间的靶向关系,挽救实验验证miR-483-5p的生物学功能是否通过TIMP-2发挥作用。结果与癌旁组织比较,BC组织中高表达miR-483-5p(P<0.05),高表达miR-483-5p者的总生存率低于低表达者(P<0.05)。miR-483-5p mimic可促进T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),miR-483-5p inhibitor则抑制T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。TIMP2为miR-483-5p的下游靶点,干扰TIMP2可逆转miR-483-5p下调对T24细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论miR-483-5p在BC中高表达,与BC患者不良预后相关。miR-483-5p可下调TIMP2的表达来促进BC细胞的增殖、迁移和侵袭。

MiR-let-7g-3p靶向HMGB2调控膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭和和凋亡

目的探讨MiR-let-7g-3p靶向HMGB2对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法通过qRT-PCR检测膀胱癌组织和癌旁组织以及正常尿路上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞(T24、5637和EJ)中let-7g-3p的表达水平;通过转染过表达或敲低T24细胞let-7g-3p表达,检测细胞增殖、迁移和侵袭、和凋亡等变化;对过表达let-7g-3p的细胞进行转录组测序,结合生物信息学分析,通过双荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western-blot分析let-7g-3p靶向负性调控HMGB2基因;qRT-PCR检测正常尿路上细胞和膀胱癌细胞(T24、5637和EJ)中HMGB2的表达水平,并且在敲低HMGB2的细胞株中,敲低let-7g-3p,检测细胞生物学行为改变。结果qRT-qPCR证实let-7g-3p在膀胱癌组织和细胞表达明显下调(P<0.01);过表达let-7g-3p可抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡(P<0.01);相反,敲减let-7g-3p表达可促进细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡(P<0.01)。生物信息学和转录组测序结果显示,HMGB2是let-7g-3p作用于膀胱癌细胞的关键分子;双荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western blot显示,HMGB2受let-7g-3p的负性调控;HMGB2膀胱癌细胞中表达水平均明显上调(P<0.01),敲低HMGB2可部分逆转敲低let-7g-3p对膀胱癌细胞生长的促进作用。结论MiRNA-let-7g-3p通过靶向负性调控HMGB2基因抑制膀胱癌细胞的生物行为。

敲低EPHA2通过mTOR磷酸化调控膀胱癌细胞自噬和生物学行为

目的探究Si-EPHA2通过靶向mTOR自噬通路干扰膀胱癌细胞生物学行为的分子机制。方法通过Western blotting实验和qRT-PCR实验检测EPHA2在膀胱癌组织和癌旁组织以及膀胱癌细胞(T24)和正常尿路上皮细胞(SV-HUC-1)中的表达水平。通过siRNA转染敲低膀胱癌T24细胞中EPHA2的表达,构成一个抑制EPHA2表达的膀胱癌细胞实验模型,将细胞分成si-NC的空白对照组和si-EPHA2实验组。通过CCK-8实验检测膀胱癌细胞增殖的变化,Transwell实验检测膀胱癌细胞迁移和侵袭的变化,流式细胞学实验检测膀胱癌细胞凋亡的变化;通过Western blotting实验检测敲低EPHA2表达后膀胱癌mTOR磷酸化水平及自噬标记物LC3的表达;在敲低EPHA2表达的T24细胞基础上继续敲低TSC1,检测膀胱癌细胞生物学改变。结果EPHA2在膀胱癌组织和细胞中表现出较高的表达水平(P<0.05);敲低EPHA2降低了mTOR磷酸化水平,自噬水平增加(P<0.05);敲低EPHA2显著抑制了膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);在敲低EPHA2表达的基础上,敲低TSC1促进mTOR磷酸化可部分逆转Si-EPHA2对膀胱癌细胞生物学行为的影响(P<0.05)。结论敲低EPHA2可靶向抑制膀胱癌细胞mTOR磷酸化,增强自噬,抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进膀胱癌细胞凋亡。

基于生物信息学筛选膀胱癌预后相关的关键miRNAs并验证

目的筛选并分析与膀胱癌预后相关的关键microRNAs(miRNAs)及其靶基因并进行实验验证。方法从TCGA数据库中下载膀胱癌及正常组织的miRNAs数据及相应的预后信息;利用edgeR包、survival包获取既存在表达差异又有OS临床预后意义的miRNAs分子;将优选的miRNAs进行临床相关性分析,得到关键miRNAs。利用3大常用miRNA预测靶基因的数据库(miRDB、miRWalk、TargetScan)预测关键miRNAs的靶基因,采用DAVID数据库对靶基因进行GO和KEGG富集分析。qRT-PCR检测关键miRNA在膀胱癌细胞中的表达水平;通过转染过表达T24细胞中miR-1307-5p和miR-944,检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的变化。结果从TCGA数据库中共下载418例膀胱癌及19例正常对照的miRNA数据,共筛选出293个差异miRNAs,高表达224个和低表达69个。通过单因素分析优选出与患者预后显著相关的9个miRNAs分子,进一步分析出与患者临床病理信息密切相关的2个miRNA,分别为miR-1307-5p和miR-944。GO和KEGG分析显示,这些miRNAs的靶基因主要与细胞内的细胞质、细胞器以及金属阳离子的结合有关,并且参与了多种与致癌相关的信号通路。qRT-PCR分析显示,miR-944在膀胱癌细胞中的表达下调(P<0.05),miR-1307-5p的表达水平无明显变化(P>0.05);过表达miR-944可抑制膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,但过表达miR-1307-5p后膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡无明显变化。结论基于生物信息学分析获得具有重要临床意义的2个关键miRNAs分子,分别是miR-1307-5p和miR-944,其中miR-944可以抑制膀胱癌细胞的生物行为,可能作为膀胱癌潜在的治疗靶点。