过表达SLC7A5基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨过表达溶质载体家族7成员5(SLC7A5)基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响,并阐明其相关机制。方法:4只3周龄SPF级SD雌性大鼠,提取原代大鼠卵巢颗粒细胞,分为阴性对照组(NC组)和促卵泡激素受体(FSHR)染色组(FSHR组)。免疫荧光染色法观察大鼠卵巢颗粒细胞中FSHR蛋白表达情况,鉴定原代大鼠卵巢颗粒细胞是否成功分离。将大鼠卵巢颗粒细胞分为对照组(转染空载体质粒)和OE-SLC7A5组(转染SLC7A5过表达质粒),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法验证细胞转染效率。流式细胞术检测2组卵巢颗粒细胞凋亡率,流式细胞术检测2组不同细胞周期卵巢颗粒细胞百分率,RT-qPCR法检测2组卵巢颗粒细胞中SLC7A5、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组卵巢颗粒细胞中SLC7A5、Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-8、cleaved Caspase-8和TNF-α蛋白表达水平。结果:荧光显微镜下卵巢颗粒细胞呈长梭形或者不规则形,特异性表达FSHR,NC组未见FSHR绿色荧光表达,FSHR组可见FSHR绿色荧光表达,提示大鼠原代卵巢颗粒细胞成功分离。与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中SLC7A5 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),提示SLC7A5过表达质粒成功转染卵巢颗粒细胞。流式细胞术检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,OE-SLC7A5组S期卵巢颗粒细胞百分率明显降低(P<0.05)。RT-qPCR法检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中TNF-α、Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中TNF-α、Caspase-8、cleaved Caspase-8、Caspase-3、cleaved Caspase-3和SLC7A5蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:SLC7A5蛋白表达增加能够通过上调TNF-α、Caspase-8和Caspase-3凋亡通路表达,促进颗粒细胞凋亡。

Clusterin在急性肾损伤诊断中的意义

急性肾损伤在临床非常常见,其发病率和死亡率都很高,所以选择合适的生物标志物对早期肾损伤进行检测有着非常重要的意义。目前急性肾损伤中最常用的生物标志物仍为血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）,近年来一些新的生物标志物陆续被应用,如中性粒细胞相关载脂蛋白（NGAL）、胱抑素C（cystatin C）、肾脏损伤分子1（KIM-1）、白细胞介素18（IL-18）等,各有优缺点。本文介绍了一种新的肾损伤检测标志物丛集素（Clusterin）,主要介绍丛集素在检测急性肾损伤中所表现出来的敏感、快速与准确的特性。

更年甘露饮加小剂量雌激素对去势大鼠心血管系统的影响

目的通过观察更年甘露饮加小剂量雌激素对去势大鼠心血管系统的影响,探讨一种防治女性绝经后心血管疾病的新方法。方法雌性大鼠去势后预防用药3个月,检测各组大鼠血清激素水平、血脂水平,胸主动脉雌激系受体α、β的表达。结果小剂量雌激素无明显改善作用,更年甘露饮加小剂量雌激素、常量雌激素及单纯更年甘露饮均能改善血清激素及血脂水平,提高胸主动脉雌激系受体α、β的表达,其中更年甘露饮效果最弱,而常量雌激素使子宫内膜明显增生。结论更年甘露饮加小剂量雌激素改善去势大鼠血清激素及血脂水平,提高胸主动脉雌激素受体α、β的表达与常量雌激素相似,对子宫内膜无明显增生作用,可作为一种防治女性绝经期后心血管系统疾病的新方法。

整合素αvβ_3在体外受精-胚胎移植中的诊断学意义

整合素（integrins）是一类细胞表面的跨膜糖蛋白,属于粘附分子家族,在生物体细胞中广泛存在,具备粘附和信号转导两大基本功能,在胚胎发育、免疫应答、创伤修复、恶性肿瘤转移等生理病理过程中发挥重要作用[1,2]。子宫内膜容受性是胚胎着床的一个重要因素,是保证受精卵着床、

银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏组织型转谷氨酰胺酶表达的影响

目的观察银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏组织型转谷氨酰胺酶(tTG)表达的影响。方法链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病动物模型,将糖尿病动物随机分为,糖尿病组(DM),银杏叶提取物组(GBE);另设正常对照组(Con-trol)。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肾皮质tTG mRNA的表达、Western blot检测肾皮质tTG蛋白表达,PAS染色评估ECM含量。结果与正常对照组比较,糖尿病大鼠肾脏细胞外基质(ECM)积聚,tTG mRNA及蛋白表达均明显增高(P<0.01);给予银杏叶提取物可明显减轻ECM积聚,同时tTG表达量也明显降低(P<0.01)。结论银杏叶提取物可以明显减轻糖尿病大鼠肾脏ECM积聚,提示银杏叶提取物可能通过降低tTG的表达,改善糖尿病肾脏ECM积聚。

更年甘露饮加小剂量雌激素对成骨细胞增殖及BMP-2表达的影响

目的通过观察复方中药更年甘露饮加小剂量雌激素对成骨细胞增殖及骨形成蛋白(BMP)-2的影响,探讨一种治疗绝经期骨质疏松的新方法。方法分别用模型血清、更年甘露饮血清、更年甘露饮血清加1/8、1/4、1/2最佳量雌激素及模型血清加最佳量雌激素用于第3代成骨细胞,用MTT法检测成骨细胞增殖,用ELISA及免疫组化法检测成骨细胞BMP-2的表达。结果更年甘露饮加入1/8、1/2、1/4最佳量雌激素时均可提高对成骨细胞的作用,加入1/4与1/2最佳量雌激素时作用更明显,增殖较最佳量雌激素组明显,BMP-2表达与最佳量雌激素组相近。结论更年甘露饮加小剂量雌激素可明显提高成骨细胞增殖及BMP-2蛋白表达,此方法可能作为一种治疗绝经后骨质疏松的治疗方法。

PPAR-γ在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨卵巢上皮性肿瘤组织中过氧物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)蛋白质的表达及其意义。方法应用PPAR-γ多克隆抗体以免疫组化SABC法检测30例恶性卵巢上皮性肿瘤及10例良性卵巢上皮性肿瘤组织石腊切片PPAR-γ蛋白质的表达,并结合病理学分型、组织学分级和临床分期探讨其意义。结果恶性卵巢上皮性肿瘤中PPAR-γ的表达明显高于良性卵巢上皮性肿瘤;在病理学分型中低分化腺癌PPAR-γ的表达低于其它分型,其它各型间无明显差别;在组织学分型中低分化恶性卵巢上皮性肿瘤PPAR-γ的表达明显低于高中分化卵巢恶性上皮性肿瘤;在临床分期晚的病例中PPAR-γ的表达较临床分期早的病例低。结论提示PPAR-γ可能与卵巢恶性上皮性肿瘤的发生、分化及肿瘤的进展有关,可能做为治疗恶性卵巢上皮性肿瘤的治疗靶点。

更年甘露饮加小剂量雌激素对去势大鼠股骨的影响

目的通过观察更年甘露饮加小剂量雌激素对去势大鼠股骨的影响,探索一种防治女性绝经期骨质疏松的新方法。方法雌性大鼠切除双侧卵巢预防用药3个月,检测各组大鼠血清激素水平、股骨骨密度(BMD)、光镜观察股骨结构,透射电镜观察子宫内膜腺上皮细胞超微结构。结果小剂量雌激素无改善作用,更年甘露饮加小剂量雌激素、常规剂量雌激素及更年甘露饮均能改善血清激素水平、股骨BMD及结构,其中更年甘露饮效果最弱,常规剂量雌激素对子宫内膜腺上皮细胞有明显刺激作用。结论更年甘露饮加小剂量雌激素改善去势大鼠血清激素水平、股骨BMD及结构的作用与单纯使用雌激素相似,对子宫内膜腺上皮细胞无明显刺激作用,可作为一种防治绝经期后女性骨质疏松的新方法。

血栓抽吸术在急性ST段抬高心肌梗死介入治疗中的疗效

目的探讨急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)患者12 h内经皮冠状动脉介入(PCI)治疗过程中应用血栓抽吸导管进行血栓抽吸,对心肌组织微循环灌注的影响。方法诊断为STEMI并行急诊PCI治疗的84例患者,根据冠状动脉造影结果,对"罪犯"血管反复持续负压抽吸直至病变处血栓影变淡或消失,冠脉远端血流得到明显改善。根据是否抽吸出血栓分为抽吸出血栓组与未抽吸出血栓组。PCI术后行冠脉造影比较两组心肌梗死溶栓实验(TIMI)血流分级、心肌血流灌注(TMP)分级、心电图抬高ST段回落幅度、血清血肌酸激酶(CK)和血肌酸激酶同工酶(CK-MB)峰值和PCI术后1 w左心室射血分数、左心室舒张末期内径及PCI后4 w内主要心脏事件。结果与未抽吸出血栓组比较,抽吸出血栓组TIMI血流分级和TMP分级均明显改善;心电图抬高ST段回落幅度大〔分别为(67.5±28.9)%vs(38.1±30.7)%〕;CK分别为(1 278.5±69.8)U/L vs(1753.8±72.6)U/L,CK-MB分别为(108.9±25.6)U/L vs(228.6±23.9)U/L,抽吸出血栓组CK及CK-MB峰值显著降低;1 w心彩检查左心室射血分数增大(56.9%±3.4%vs 52.2%±3.7%);左心室舒张末期内径减小(50.6±4.9 vs 55.4±4.7)。以上各项指标比较,两组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论支持冠脉病变部位血栓碎裂脱落导致冠脉远端微小血管栓塞是引起"无复流"或"慢血流"发生的主要原因之一,血栓抽吸导管在冠脉内行血栓抽吸操作安全可靠,不增加心脏事件的发生率。

PPAR-γ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响

目的观察过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激活对糖基化终末产物(AGEs)引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGFmR-NA表达的影响。方法体外培养正常大鼠肾系膜细胞,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测不同浓度AGEs(0～400μg/ml-1)及不同浓度PPAP-γ)激活剂(罗格列酮)和PPAR-γ阻断剂(GW9662)对AGEs(100μg/ml-1)引起的TGF-β及CTGFmRNA表达的影响。结果给予PPAR-γ激活剂可明显减轻AGEs引起的大鼠系膜细胞TGF-β、CTGFmRNA的表达。结论PPAR-γ激活剂可以明显减轻AGEs对系膜细胞TGF-β、CTGFmRNA的表达影响,从而改善肾小球细胞外基质积聚,在糖尿病时起到肾脏保护作用。

应用导流杂交基因芯片技术对HPV感染基因分型检测的研究

目的探讨核酸分子快速导流杂交基因芯片技术(flow-through hybridization and gene chip,Hybri Max)对人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染分型检测中的应用。方法对558例临床患者进行液基细胞学检测(LPT),异常者做组织病理学诊断,同时采用Hybri Max技术,对558例患者的宫颈细胞进行HPV DNA检测和分型。结果558例患者中,细胞学异常的370例,并对异常者做病理学诊断,结果为:慢性炎症80例,CINI70例,CINII76例、CINIII82例、宫颈癌62例。②全部患者均进行HPVDNA的检测与分型,其HPVDNA阳性的是:细胞学正常的188例中有40例(21.3%),慢性炎症有48例(60.0%),CINI有52例(74.3%),CINII有68例(89.5%),CINIII有76例(92.7%),宫颈癌有62例(100%)。结论对HPV感染的检查以及通过Hybri Max技术对HPVDNA基因分型检测的研究,对宫颈癌早期发现,判断预后及指导治疗有重要价值。

大鼠心肌缺血性纤维化后NF-κB的表达及其意义

目的:探讨大鼠发生心肌缺血性纤维化后转录因子(NF-κB)的表达及作用,阐明其与心肌缺血性纤维化发生发展的关系。方法:20只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、盐酸异丙肾上腺素注射液(Iso)12h组、Iso72h组和Iso1周组,每组5只。除正常对照组外,其他各组大鼠皮下均注射Iso(2mg·kg-1体质量)。按对应时间点取心脏组织,采用常规染色,免疫组织化学染色方法分析NF-κB蛋白表达。结果:HE染色结果显示正常对照组心肌排列整齐,横纹清晰,胞核明显,无细胞肿胀。注射Iso12h后,心肌出现较多点状坏死。注射Iso1周后,出现界限清晰、多发散在坏死灶。Masson三色染色结果显示正常对照组胶原仅有少量表达,而注射Iso12h后,胶原量明显增加(P<0.01),直至1周达到高峰。NF-κB免疫组织化学染色结果显示正常对照组中可见呈浅黄色或综黄色阳性物质。注射Iso12h后,NF-κB阳性物质表达明显增加。注射1周后,NF-κB阳性表达达到最大值(P<0.05)。结论:NF-κB表达随Iso注射时间的延长而明显增加,提示NF-κB参与了大鼠心肌坏死后纤维化的发生及发展过程。

青春期前双酚A暴露对雌性大鼠卵巢组织中mRNA分子表达谱的影响

目的:研究双酚A(BPA)对青春期前雌性大鼠卵巢组织中mRNA分子表达谱的影响,探讨BPA对卵巢结构和功能的潜在影响。方法:32只雌性SD大鼠随机分为对照组和低、中及高剂量BPA组,每组8只。低、中和高剂量BPA组大鼠分别给予50、100和200 mg·kg^(-1)BPA,对照组大鼠给予等体积乙醇-玉米油(1∶100)。10 d后HE染色观察各组大鼠卵巢组织形态表现,RNA测序(RNA-seq)和生物信息学分析预测高剂量BPA组和对照组大鼠的差异表达基因及其生物学功能,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠卵巢组织中Hapln3、Nr4a1、Arc、Ccl2、Ccn5、Egr2和Rab33a mRNA表达水平。结果:HE染色,与对照组比较,低和中剂量BPA组大鼠卵巢组织未见明显异常,高剂量BPA组大鼠卵巢组织中原始卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡数减少,闭锁卵泡数增加,出现囊状卵泡等改变。RNA-seq检测,对照组和高剂量BPA组大鼠卵巢组织中有14个差异表达基因。生物信息学分析预测该14个mRNA分子参与了生殖、代谢和细胞凋亡等多种生物学过程及p53、MAPK和PI3K-Akt等信号通路。RT-qPCR法,与对照组比较,高剂量BPA组大鼠卵巢组织中Hapln3、Nr4a1、Arc、Ccl2、Ccn5和Egr2 mRNA表达水平降低(P<0.05),Rab33a mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论:BPA可引起青春期前雌性大鼠卵巢结构和卵巢组织中mRNA分子表达谱的变化,这可能会影响卵巢组织的结构和功能。

微小RNA-92与恶性肿瘤关系的研究进展

微小RNA（miRNAs）是一类内源性的高度保守的非编码蛋白质的单链小分子RNA。它们通过与靶基因结合,在转录后水平导致靶mRNA的翻译抑制或降解,调节靶基因的表达^（[1]）。微小RNA-92（miR-92）是近年来发现的一种新型miRNA,含有22个核苷酸，定位于人染色体13q31．3。

微小RNA-92在上皮性卵巢癌患者血清中的筛查

目的检测微小RNA-92(microRNA-92,miR-92)在上皮性卵巢癌患者及健康人血清中的表达,分析miR-92与上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)病人的分期及预后的关系,为寻找一种新型的、无创的用于EOC患者早期筛查及判断预后的标志物提供理论依据。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)的方法检测50例EOC患者和50例健康人群血清中miR-92表达,应用ROC曲线评价其临床诊断价值,并对miR-92的表达与临床病理特征之间的相关性进行分析,评价其判断预后的临床价值。结果 miR-92作为EOC筛查的标志物具有可行性,受试者工作特征曲线下面积达0.803;miR-92在EOC患者血清中的表达量显著高于正常对照组(P<0.05);其表达水平随EOC患者临床分期的进展呈上升趋势,有淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P<0.05)。其表达水平与EOC患者年龄等因素无关。结论 miR-92在EOC患者血清中的表达高于健康人群,提示其可能在EOC的发生发展过程中发挥致癌基因的作用,miR-92有望成为EOC早期筛查和评估预后的特异性生物标志物。

组蛋白去乙酰化酶1在人上皮性卵巢癌组织中的表达

目的探讨上皮性卵巢癌组织中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法,测定40例上皮性卵巢癌组织2、0例交界性卵巢肿瘤,20例卵巢良性肿瘤以及10例正常卵巢组织中HDAC1的表达。结果 HDAC1在在卵巢组织中的阳性表达H-score评分均随组织异型程度的增加而逐渐增高,即正常卵巢组织(1.300±0.948 68)和卵巢良性肿瘤(1.750±0.786 40)<交界性卵巢肿瘤(4.250±0.716 35)<上皮性卵巢癌组织(5.425±0.500 64),差异有显著性意义,P<0.01。结论 HDAC1在上皮性卵巢癌组织中呈过表达,HDAC1表达增强可能是卵巢癌发生的早期事件,为上皮性卵巢癌的早期诊疗提供新的靶点。

阴道镜检查在宫颈上皮内瘤变诊断中的应用

宫颈上皮内瘤变（CIN）是与宫颈浸润癌密切相关的一组癌前病变,它反映了宫颈癌发生、发展中的连续过程[1]。由于宫颈癌存在一段较长的、可逆性的癌前病变时期,大约要10年时间,因此,早起诊断和治疗CIN是防治宫颈癌的关键环节。为了评价阴道镜检查在CIN诊断中的应用价值,

卵巢特异启动子调控白介素24基因真核表达载体的构建

目的构建卵巢特异启动子-1(ovarian-specific promoter,OSP-1)调控白介素-24基因(Interleukin-24,IL-24)表达的真核表达载体。方法通过RT-PCR方法从人外周血基因组中扩增IL-24基因片段,应用基因重组技术将0SP-1启动子片段插入到pcDNA3.0真核表达载体,替换pcDNA3.0载体的CMV启动子与增强子序列,然后将克隆的IL-24基因片段插入到pcDNA3.0-OSP-1载体的OSP-1启动子的下游,从而构建成由OSP-1启动子调控IL-24基因表达的载体pcD-NA3.0-OSP-1-IL-24。结果载体构建过程的酶切结果以及测序结果表明载体pcDNA3.0-OSP-1-IL-24构建正确。结论通过基因重组技术成功构建了卵巢特异启动子调控IL-24基因表达的真核表达载体,为体外研究IL-24靶向特异性杀伤卵巢癌细胞提供了前期实验基础。

抑瘤素M对人脐带间充质干细胞增殖和成骨分化的影响

目的:探讨抑瘤素M(OSM)对体外培养的人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)增殖及成骨分化的影响,阐明OSM是一种有效的成骨诱导活性因子。方法:体外培养hUCMSCs,流式细胞术检测第3代hUCMSCs表面标志物;CCK-8法测定不同剂量(0.1、1.0和10.0μg·L^-1)重组人抑瘤素M(rhOSM)处理后hUCMSCs的增殖活性。将hUCMSCs分为对照组、经典成骨诱导剂组和不同剂量(0.1、1.0和10.0μg·L^-1)rhOSM组,于成骨诱导第4、7和14天,采用BCIP/NBT法进行碱性磷酸酶(ALP)染色并定量检测细胞中ALP活性,茜素红染色法检测钙结节的生成情况并半定量分析细胞矿化活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测hUCMSCs中Runt相关转录因子2(Runx2)和OCN mRNA表达水平。结果:hUCMSCs符合间充质干细胞(MSCs)鉴定标准。rhOSM处理hUCMSCs 72 h,与对照组比较,10.0μg·L^-1 rhOSM组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);处理96 h,与对照组比较,各剂量rhOSM组细胞增殖活性均明显降低(P<0.05),且各剂量rhOSM组组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。成骨诱导第4、7和14天,与经典成骨诱导剂组比较,各剂量rhOSM组细胞中ALP活性和Runx2 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与0.1μg·L^-1 rhOSM组比较,1.0和10.0μg·L^-1 rhOSM组ALP活性和Runx2 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与成骨诱导第7天比较,诱导第14天各剂量rhOSM组细胞中ALP活性和Runx2 mRNA表达水平略降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。成骨诱导第7、14和21天,与经典成骨诱导剂组比较,各剂量rhOSM组细胞矿化活性均明显升高(P<0.01);与0.1μg·L^-1 rhOSM组比较,1.0和10.0μg·L^-1 rhOSM组细胞矿化活性明显升高(P<0.05)。与经典成骨诱导组比较,各剂量rhOSM组OCN mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);成骨诱导第7、14和21天,与0.1μg·L^-1 rhOSM组比较,1.0和10.0μg·L^-1 rhOSM组细胞中OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05),具有时间-剂量依赖性。结论:rhOSM通过上调Runx2和OCN的表达及增加成骨细胞ALP的活性和钙盐沉积促进hUCMSCs体外成骨分化,是一种有效的成骨诱导活性因子。