螺旋藻藻蓝蛋白对癌激光疗法增敏作用的实验研究

用藻蓝蛋白处理2种癌细胞作体内外激光治癌试验。人大肠癌细胞株HR_(8348)培养后分别用100μg,50μg和25μg的藻蓝蛋白处理,经光波为630nm的铜激光辐照12J/cm^2,用MTT法检测培养癌细胞存活率分别为22.2％,37.6％和89.7％,显示良好的剂量效应。用S_(180)移植瘤小鼠,分别给予藻蓝蛋白注射2mg或口服20mg后,经铜激光辐照瘤体15d后,有效率分别为50％和53％,与对照组比较,具显著差异(P=0.007)。体内外试验证实藻蓝蛋白确具有光敏作用,且其无毒,无副作用,是一种理想的光敏剂。

藻蓝蛋白（phycocyanin）─铜激光对大肠癌细胞株HR─8348的杀伤效应

大肠癌细胞株ＨＲ－８３４８用含有１００ｕｇ／ｍｌ，５０ｕｇ／ｍｌ和２５ｕｇ／ｍｌ（藻蓝蛋白１６４０培养液处理后，用波长为６３０ｎｍ的脉冲铜激光照射细胞１２Ｊ／ｃｍ２，继续培养２４小时后用ＭＴＴ法测得细胞存活率为２２．１％，３７．６％和８９．７％，显示出一定的剂量效应，与市售光敏剂蚕砂叶啉对比观察，证明其杀伤肿瘤细胞的效力优于蚕砂叶啉。实验表明藻蓝蛋白有明显的光敏效果。藻蓝蛋白无毒、无副作用，其粗制品已用于强化营养食品，提纯后应用于肿瘤的激光治疗，可望成为一种有发展前途的光敏剂。

MTT显色法在肿瘤细胞生物学研究中的应用

用MTT显色方法对体外传代K562,SW1116,Bcap-37和HR8348细胞分别进行了抗癌药物敏感性、抗癌药物调变,激素和激光光动力学作用的研究,均得到较稳定的结果。各项研究带有共性的结果是K562等细胞在一定范围内与理化作用的强度及作用时间长度呈正相关。因而,在实际应用中,可根据不同的实验对象和目的,对MTT法的实验条件作各种特定性设计。本文提出成功的MTT试验对照孔OD值宜超过0.5。并就理论最高血药浓度C_(max)、1/10 C_(max)及由Cmax降至30％抑瘤时药物浓度的倍减次数的价值进行了讨论。

裸鼠人大肠癌模型的建立及其特征

本文报告用NC裸小鼠建立的人大肠癌移植瘤模型、定名为HCANZ-901。来源于病人的原代大肠癌块,接种成功率100％(6/6),现已传至19代,传代成功率为97％。移植瘤生长无潜伏期,倍增期6～7d,对移植瘤的光镜、电镜、CEA组化等检查表明该肿瘤模型保持了人大肠癌的恶性特征。

MTT显色法抗癌药物敏感性试验的适用性研究

本文对在96孔细胞培养板中短期培养下的人红白血病K_(562)细胞株、小鼠肠癌CT_(26)实体瘤细胞、小鼠S_(180)实体瘤细胞、人大肠癌手术切除标本肿瘤细胞及人急性白血病细胞的存活适应状况,用计数及MTT显色法进行了研究.结果表明,MTT法对K_(562)细胞及人急性白血病细胞的体外抗癌药物抑瘤试验结果稳定,柔红霉素、高三尖杉酯碱等药物对K_(562)细胞及部分人急性白血病细胞显示较高的敏感性.因而,该法对人急性白血病有效治疗药物的临床选择有一定价值.但MTT法尚难适用于实体肿瘤的抗癌药物敏感性试验.

咖啡因在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的实验研究

目的探讨咖啡因在骨肉瘤细胞株(OS-732)顺铂化疗中的增效作用。方法骨肉瘤细胞株分别经咖啡因、顺铂、咖啡因+顺铂作用72h,采用MTT法体外细胞毒性试验观察三者的细胞毒性;应用流式细胞仪分析咖啡因、顺铂及两者配伍对骨肉瘤细胞株细胞周期的影响。结果骨肉瘤细胞株与浓度分别为0.2、2.0、5.0、10.0、20.0mmol?L的咖啡因作用时,细胞毒性指数(CI)分别为12.50%、27.88%、30.77%、56.73%、84.62%;与浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μg?ml的顺铂作用时,CI分别为24.04%、54.80%、65.38%、88.46%;而与低浓度咖啡因与顺铂联合作用,其CI明显增加,随着各自浓度的升高,CI明显增加。流式细胞仪分析显示咖啡因对细胞周期也有明显的影响,使G0与G1期细胞比例明显增加,G2与M期细胞比例明显减少,S期细胞比例无明显改变。结论咖啡因在骨肉瘤细胞株顺铂化疗中有显著的增效作用,并能改变骨肉瘤细胞的细胞周期。

藻蓝蛋白—铜蒸气泵浦染料脉冲激光对大肠癌细胞株HR8348的杀伤效应

为探讨藻蓝蛋白对瘤细胞的杀伤作用，用含有１００μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ藻蓝蛋白的１６４０营养液处理大肠癌细胞株ＨＲ８３４８。６小时后，采用波长６３０ｎｍ的铜蒸气泵浦染料脉冲激光照射１２Ｊ／ｃｍ２，继续培养２４小时，ＭＴＴ法测得细胞成活率分别为２２．１％、３７％和８９．７％，显示出线性剂量效应。与光敏剂蚕砂卟啉ＣＰＤ４比较，证明藻蓝蛋白杀伤肿瘤细胞优于ＣＰＤ４，有明显的光敏效果，且无毒，粗制品已用于营养食品的强化剂，可能成为一种肿瘤激光治疗的光敏剂。

PSD－007单体光敏剂对三株人癌细胞的光动力效应

ＰＳＤ－００７单体是已确定结构式的血卟啉类激光光敏剂。我们用人大肠癌细胞株ＳＷ１１１６，宫颈癌细胞株ＨｅＬａ和红白血病细胞株Ｋ５６２，以北京产的同类光敏剂ＨＰＤ作为药物对照，在波长６３０ｎｍ的铜蒸汽激光照射４Ｊ／ｃｍ２能量密度后，用ＭＴＴ法测定两种光敏剂对３个人癌细胞的９个浓度组，计算５０％细胞抑制率（ＩＣ５０）和细胞生存率的均数，比较两个光敏剂对三株人癌细胞的光动力杀伤效应。实验结果显示：用Ｋ５６２细胞ＨＰＤ的ＩＣ５０为４ｍｇ／Ｌ，ＰＳＤ－００７为４ｍｇ／Ｌ；ＨｅＬａ细胞ＩＣ５０为４．５ｍｇ／Ｌ和４ｍｇ／Ｌ；ＳＷ１１１６细胞的ＩＣ５０为４．５ｍｇ／Ｌ和１ｍｇ／Ｌ。在对两种药物７个不同浓度研究组中，抑瘤结果表明，各组间有显著性差异（Ｐ＜０．０５），说明随着药物浓度的增高光动力杀伤效应增大。

国际气候谈判的博弈论分析

全球变暖已经成为威胁人类生存的重大问题,应对这一问题需要国际社会的共同努力。经过艰苦的谈判形成了以《联合国气候变化框架公约》和《京都议定书》为核心的国际气候机制。国际气候谈判的过程是国家间的利益博弈过程,本文尝试用博弈论来分析国际气候谈判进程。

两种光敏剂对三株人癌细胞的光敏作用

用人大肠癌细胞株ＳＷ１１１６，宫颈癌细胞株ＨｅＬａ和红白血病细胞株Ｋ５６２，分别用ＰＳＤ－００７和ＨＰＤ两种光敏剂，置入９６孔细胞培养板中进行光动学治疗，在照射铜激光４Ｊ／ｃｍ２能量密度后，用ＭＴＴ法测定细胞生存率，结果ＨＰＤ对上述３株细胞的半数光灭活浓度ＩＣ５０，分别为４．５μｇ／ｍｌ，４．５μｇ／ｍｌ和４μｇ／ｍｌ；ＰＳＤ－００７的ＩＣ５０为１μｇ／ｍｌ，４μｇ／ｍｌ和４μｇ／ｍｌ。

成人急性白血病MTT药敏试验初探

用MTT抗癌药物敏感试验法对52例成人急性白血病标本进行测试,对其中37例进行了临床相关性研究。结果显示,将方法的DNR敏感界限定为5％,其它药物定为70％时,在这一标准下,各药实验室与临床的总相符率为56％,本法对复发病例同样具有预测价值。本文就建立合理的MTT试验技术顺序进行了讨论。

HR-8348直肠癌细胞系自分泌现象的初步观察

肿瘤细胞的自主性生长一般被认为与其自分泌现象有关。本研究利用HR-8348细胞系的培养上清经离心、透析、浓缩等步骤,制成肠癌细胞条件培养基(CM),并对CM与不同浓度小牛血清(NCS)的生长支持作用作比较。结果发现,CM对HR-8348细胞有一定的生长支持和促进作用,可明显促进其DNA合成,但其促贴壁效应较NCS为差。作者认为,HR-8348直肠癌细胞系具有一定的自分泌能力,其自分泌的生长因子为一种透析不能除去的大分子物质,但其性质及生物学效应尚需进一步研究。

MTT 试验筛检49种单体激光光敏剂

用 MTT 试验方法比较49种单体结构激光光敏剂的光动力学效应,结果显示50%肿瘤细胞抑瘤率位于前10位的单体光敏剂结构以血卟啉类为主,目前临床上试用的光敏剂血卟啉类单甲醚 PSD-007处第17位。MTT 方法用于筛检多种光敏剂具有简便。快速和数据可靠的优点。

pcDNA3.1(+)-Hsp70^(144-517)As重组质粒构建及其转染Bcap-37细胞后细胞凋亡的研究

目的构建人反义Hsp70重组质粒[pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As]并观察其对乳腺癌Bcap-37细胞凋亡特性的影响。方法依照人hsp70mRNA全长序列,通过计算机分析,设计一对引物,在上游引物中带有1个BamHⅠ位点,经RT-PCR扩增、电泳、回收和纯化hsp70144-517片段,通过T-A克隆到pGEM-TEasy原核表达质粒中,经DNA测序和EcoRⅠ酶切图谱鉴定;EcoRⅠ酶切产物回收后亚克隆到pcDNA3.1(+)质粒中EcoRⅠ位点之间,利用BamHⅠ酶切图谱筛选反向插入重组质粒,经DNA测序得到pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As重组质粒。以脂质体介导法将pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As转染到乳腺癌Bcap-37细胞中并克隆培养建株得到AsHsp-Bcap细胞。以DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞周期分析观察转染细胞的凋亡特性。结果本研究成功构建人反义hsp70重组质粒[pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As];转染到乳腺癌Bcap-37细胞后在DNA琼脂糖凝胶电泳上观察到细胞凋亡特征性DNALadder及流式细胞周期分析发现G1峰前有1个特征性Ap峰(亚二倍体峰)。结论构建人反义重组质粒pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As对乳腺癌Bcap-37细胞有促进细胞凋亡的作用。

电击穿对K562、NS-1和小鼠脾脏细胞存活率的影响

用一系列电融合参数(脉幅2—6kV/cm,脉宽10—90μs)处理K562,NS-1及小鼠脾脏细胞。结果说明,在以上电脉冲范围内,K562细胞的存活率不发生显著变化,其存活率均在80％左右波动。线性回归分析表明,其存活率与脉幅或脉宽变化均无显著相关性。NS-1细胞经脉幅为4kV/cm,脉宽为70μs的电脉冲处理,细胞存活率显著下降,仅为对照细胞的31％,并且细胞存活率与脉幅呈显著性负相关。小鼠脾细胞则在脉宽为50μs,脉幅为2kV/cm的电脉冲处理后,LPS诱导的B淋巴细胞~3H-Tdr掺入明显受到抑制,并且~3H-Tdr掺入与脉幅呈显著性负相关。3种细胞对电击穿的耐受性依次是K562细胞>NS-1细胞>小鼠脾脏B淋巴细胞。根据Zimmer-mann的理论推导,细胞膜电击穿主要与细胞直径有关,细胞直径越大,细胞膜击穿电压所需外加电场越小,反之亦然。然而本实验结果并不符合此规律。本文探讨了影响细胞膜电击穿的其他因素。

Screening the active constituents of Chinese medicinal herbs as potent inhibitors of Cdc25 tyrosine phosphatase, an activator of the mitosis-inducing p34^(cdc2) kinase

Objective: To screen and evaluate the active constituents of Chinese medicinal herbs as potent inhibitors of Cdc25phosphatase. Methods: The affinity chromatography purified glutashione-S-transferase/Cdc25A phosphatase fusion protein and Cdc2/cyclin B from the extracts of starfish M phase oocytes are used as the cell cycle-specific targets for screening the antimitotic constituents. We tested 9 extracts isolated from the Chinese medicinal herbs and vegetables including the agents currently used in cancer treatment by measuring the inhibition of Cdc25A phosphatase and Cdc2 kinase activity. The antitumor activity of the extracts was also evaluated by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay and flow cytometry.Results: Cdc25A inhibitory activity and antitumor activity are detected in the extracts isolated from three Chinese medicinal herbs Agrimonapilosa; Herba solani lyrati; Galla chinesis. Conclusion: We found three extracts isolated from Chinese medicinal herbs have potential inhibitory activity of Cdc25 phosphatase using a highly specific mechanism-based screen assay for antimitotic drug discovery.

THE ANTITUMOR ACTIVITY OF ELEMENE IS ASSOCIATED WITH APOPTOSIS

Elemene, isolated from the Chinese medicinal herbRhizoma Zedoariae was shown to exhibit antitumoractivity in vitro and in vivo to human and murine tumorcells. This novel antineoplastic agent has beendemonstrated to have substantial clinical activity againstvarious tumors. In this paper, the mechanisms ofantitumor activity of elemene are reported. The in vitroeffect of elemene on the growth of leukemia cells wasevaluated by MTT assay. The IC50 values of elemene forpromyelocytic leukemia HL-60 cells and erythroleukemiaK562 cells were found to be 27.5 μg/ml and 81μg/ml,respectively, while IC50 for peripheral blood leukocytes(PBL) was 254.3 μg/ml. The inhibitory effect of elemeneon proliferation of HL-60 cells was associated with cellcycle arrest from S to G2M phase transition and withinduction of apoptosis. The apoptosis of tumor cells wasconfirmed by DNA ladder formation on gelelectrophoresis and characteristic ultrastructuralalternations. These results indicate that induction ofapoptosis contributes to the mechanisms of antitumoractivity of elemene.

榄香烯抗癌作用与诱发肿瘤细胞凋亡

榄香烯是从中药莪术中提取的抗癌有效成分，实验药理学和临床试验都证实该制剂对肿瘤有确切疗效。作者应用ＭＴＴ方法，分析了榄香烯对白血病细胞生长的影响。结果显示：榄香烯明显抑制白血病ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的生长，对ＨＬ－６０细胞的半数生长的抑制剂量（ＩＣ５０）为２７．５μｇ／ｍｌ，对Ｋ５６２细胞的ＩＣ５０为８１μｇ／ｍｌ，而对正常人外周血白细胞（ＰＢＬ）的ＩＣ５０为２５４．３μｇ／ｍｌ。流式细胞术证实，榄香烯能阻滞肿瘤细胞从Ｓ期进入Ｇ２Ｍ期，并诱发其细胞凋亡。ＤＮＡ凝胶电泳及透射电镜超微结构观察都发现了榄香烯诱发肿瘤细胞凋亡所导致的生化与形态变化。结果表明，榄香烯诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制的重要方面之一。

人工神经网络肿瘤标志物模型的建立及应用研究

目的 建立8种血清肿瘤标志物(TM)人工神经网络(ANN)诊断模型,以验证其在鉴别恶性肿瘤和提示原发灶不明肿瘤的原发部位中的应用价值。方法 用酶联免疫吸附法及时间分辨荧光分析法分别测定73例肺癌、60例肝癌、76例肠癌、78例胃癌和51例乳腺癌患者, 4例原发灶不明恶性肿瘤患者血清标本中,癌胚抗原(CEA)、α- 甲胎蛋白(AFP)、糖抗原19 9 (CA199)、糖抗原242(CA242)、癌抗原72 4(CA724)、细胞角蛋白19片段(CA211)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和组织多肽抗原(TPA)的含量,结合ANN进行数据建模分析,并用盲法验证模型,对原发灶不明肿瘤的鉴别准确率进行评价。结果 肺癌和肝癌ANN模型,对肺癌和肝癌的鉴别准确率达90 .9%;肠癌和肝癌ANN模型,对肠癌和肝癌的鉴别准确率为88 .9%;肝癌和胃癌ANN模型,对肝癌和胃癌的鉴别准确率为93. 5%;乳腺癌和肺癌ANN模型,对乳腺癌和肺癌的鉴别准确率为80. 5%;用肠癌和肝癌ANN模型鉴别2例原发灶不明肿瘤(术后病理诊断为肠癌)为肠癌;用肝癌和胃癌ANN模型鉴别2例原发灶不明肿瘤(术后病理诊断为肠癌)为胃癌。结论 ANN结合8种TM建立的诊断模型分析法可有效鉴别肺癌等5种肿瘤,并且可能提示原发灶不明的恶性肿瘤的原发部位。