KCa3．1表达改变对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨钙激活性中电导钾离子通道(intermediate-conductance Ca2+-activated K+channels,KCa3.1)表达水平和活性改变对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:将携有KCa3.1RNA干扰(RNA interference,RNAi)片段的质粒转染子宫内膜癌HEC-1-A和Ishikawa细胞,应用实时荧光定量PCR(real time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)及Western印迹法检测KCa3.1的表达变化;应用MTT法、BrdU掺入法、FCM及Western印迹法检测KCa3.1特异性阻断剂TRAM-34和KCa3.1RNAi表达质粒干扰后,子宫内膜癌细胞株增殖、细胞周期、凋亡及cyclin D1、cyclin E及survivin蛋白表达的改变。结果:KCa3.1RNAi表达质粒可以明显抑制KCa3.1mRNA及蛋白的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);TRAM-34及KCa3.1RNAi可以明显抑制HEC-1-A和Ishikawa细胞的增殖,2株细胞的G0/G1期细胞百分比上升,S期细胞百分比下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),但细胞凋亡率与对照组相比无明显差异(P>0.05);cyclin D1、cyclin E及survivin的蛋白表达水平降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制KCa3.1的表达及活性可以抑制子宫内膜癌细胞增殖,阻碍细胞周期进展,但对细胞凋亡无明显影响。

GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入治疗人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的研究

目的 :研究GE7导入系统体内导入效率及介导抑癌基因NOEY2体内导入后对人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的治疗作用。方法 :将人上皮性卵巢癌细胞株Hey细胞种植于裸鼠皮下成瘤后半包埋缝于裸鼠脾区网膜建立网膜移植瘤模型。将GE7- β -gal四元复合体经腹腔注入荷瘤鼠体内用X -gal染色法检测基因导入效率 ,同法导入生理盐水、GE7-pcDNA3四元复合体及GE7-pcDNA3-NOEY2四元复合体 ,研究其抑制肿瘤生长的作用。结果 :人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的成瘤率达 10 0 % ,3周后瘤体达 3 68± 0 82g。GE7- β -gal四元复合体经腹腔注入荷瘤鼠体内 12h后 β -gal即有表达 ,4 8h后以瘤体、肝、脾表达率最高。GE7-pcDNA3-NOEY2四元复合体腹腔注射 3周后瘤体生长抑制率为 4 0 81% (P <0 0 5)。结论 :人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤模型具有实用性。GE7导入系统体内导入基因效率高 ,具有相对肿瘤靶向性。GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入后能有效抑制上皮性卵巢癌的生长。

GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入治疗人上皮性卵巢癌裸鼠腹水瘤

目的 研究GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入后对人上皮性卵巢癌裸鼠腹水瘤的治疗作用。方法 将人上皮性卵巢癌细胞株skov3ipl细胞种植于裸鼠腹腔内建立腹水瘤模型。将生理盐水、GE7 pcD NA3四元复合体及GE7 pcDNA3 NOEY2四元复合体导入荷瘤裸鼠体内研究其抑制肿瘤生长作用。结果 人上皮性卵巢癌裸鼠腹水瘤的成瘤率达 90 % ,GE7 pcDNA3 NOEY2四元复合体腹腔注射后第 2周裸鼠的体重较对照组明显减轻 (P <0 .0 5) ,但第 3周起 3组体重无明显差异。 3组裸鼠的生存期无明显差异。结论 GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入后能延缓但不能抑制上皮性卵巢癌腹水的生长 ,且对腹水瘤裸鼠的生存期无明显延长作用。人上皮性卵巢癌裸鼠腹水瘤模型具有实用性。

粘附分子与卵巢癌SKOV3ipl多细胞团簇形成和耐药的关系

目的 :以卵巢癌SKOV3ipl细胞形成的多细胞团簇为模型 ,检测CD4 4、CD5 4、CD2 9、E 钙粘蛋白 (E cadherin ,E cad)mRNA水平及蛋白表达 ,探讨粘附分子与多细胞团簇形成及耐药的关系。方法 :用液体重叠系统获得SKOV3ipl多细胞团簇 ,以单层细胞为对照 ,用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测上述四种粘附分子mRNA水平 ,用流式细胞检测法 (FCM)测定其在团簇细胞中的表达。结果 :RT PCR结果表明 ,团簇细胞的CD4 4mRNA和CD2 9mRNA条带光密度值分别是单层细胞的 0 6 2 6和 0 792倍 ,CD5 4mRNA和E cadmRNA条带光密度值分别是单层细胞的 1 815和 1 344倍 ,提示单层SK OV 3ipl细胞形成团簇后CD4 4和CD2 9基因表达活性下调 ,而CD5 4和E cad基因表达活性增强。FCM结果表明 ,SKOV3ipl单层细胞及团簇细胞CD4 4表达率分别为 (75 995± 3 0 4 6 % )、(5 0 70 0± 9 35 1% ) ,团簇细胞CD4 4表达比单层细胞明显降低 (P =0 0 0 1)。和对照细胞相比 ,单层SKOV3ipl细胞不表达CD5 4 (P =0 5 6 3) ,形成团簇后表达明显升高 (P <0 0 1)。单层细胞和团簇细胞CD2 9都有高表达 ,阳性率分别为 (96 2 90± 1 2 0 1% )、(92 4 94± 2 0 5 5 % ) ,团簇细胞CD2 9表达明显低于单层细胞 (P =0 0 14 )。和对照细胞相比 。

上皮性卵巢癌放射免疫药盒的制备和临床应用

卵巢癌是女性生殖系统肿瘤发病率居第三位,死亡率第一位的疾病。为提高治愈率,准确的诊断和监测是非常重要的.从免疫学角度,国外已制备了数种放射免疫药盒,但效果满意的仅有美国的CA_(125)药盒。国内目前尚无相应药盒.我室从1989年开始自行制备CA_(125)药盒,用于诊断和监测上皮性卵巢癌效果与美国的CA_(125)药盒相同。

乙二醛酶I在子宫内膜癌组织和细胞中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的 了解乙二醛酶Ⅰ（GLO-Ⅰ）在子宫内膜癌组织和细胞中的表达情况,探讨GLO-Ⅰ对子宫内膜癌细胞增殖与凋亡的影响. 方法应用免疫组化抗生物素蛋白-生物素复合物（ABC）法检测子宫内膜癌（29份）、正常子宫内膜（19份）组织中GLO-Ⅰ蛋白的表达,紫外分光光度计检测子宫内膜癌及其癌旁组织、正常子宫内膜组织中GLO-Ⅰ的活性.GLO-Ⅰ小分子RNA（siRNA）转染子宫内膜癌细胞株lshikawa细胞后,采用蛋白印迹法及逆转录（RT）-PCR技术分别检测其GLO-Ⅰ蛋白及mRNA的表达水平,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、流式细胞仪分别检测其细胞增殖及凋亡情况.结果 （1）子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ蛋白的阳性表达率为76%（22/29）,正常子宫内膜组织为0/19,两者比较,差异有统计学意义（P〈0.01）.正常子宫内膜、子宫内膜癌癌旁组织中GLO-Ⅰ活性（分别为1.1、0.8 IU/mg）较弱,子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ活性（92.3 IU/mg）明显升高,差异有统计学意义（P〈0.01）.（2）Ishikawa细胞转染GLO-Ⅰ silRNA后,其GLO-Ⅰ mRNA的表达水平为0.25±0.06,低于阴性对照（转染与目的基因无关的siRNA）的0.93±0.10,差异有统计学意义（P〈0.01）;其GLO-Ⅰ蛋白的表达水平为0.38±±0.06,低于阴性对照的0.94±0.13,差异也有统计学意义（P〈0.01）.（3）Ishikawa细胞转染GLO-Ⅰ siRNA后,其细胞增殖能力与空白对照（仅加转染试剂）比较明显降低（P=0.028）;其细胞凋亡率为（6.7±0.8）%,高于阴性对照的（1.2±0.4）%和空白对照的（1.4±0.4）%,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 GLO-Ⅰ在子宫内膜癌组织和细胞中均呈过度表达,子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ活性异常升高.抑制GLO-Ⅰ基因表达可促进子宫内膜癌细胞凋亡,并抑制其增殖.