结核分枝杆菌Rv2629基因产物的亚细胞定位和穿梭质粒转化耻垢分枝杆菌

目的研究结核分枝杆菌利福平耐药相关蛋白Rv2629在细胞内的亚定位及其与药敏的相关性。方法采用差速离心进行细胞组分分离及蛋白质印迹法(Western blot)检测初步判定蛋白亚细胞定位;采用pMV261转化耻垢分枝杆菌,BACTEC MGIT960测定转化菌株的利福平耐受性。结果Rv2629蛋白主要定位于结核分枝杆菌的细胞壁和细胞膜,重组有Rv2629突变位点191C质粒的耻垢分枝杆菌对利福平的最低抑菌浓度(MIC)为160mg/L,相应的携带有野生型基因191A的宿主菌MIC为20mg/L。结论Rv2629基因191A/C突变同利福平耐药相关。

结核分枝杆菌海藻糖磷酸磷酸酶诱导小鼠体液和细胞免疫应答

目的 研究结核分枝杆菌（M．tuberculosis）海藻糖磷酸磷酸酶（TPP）诱导小鼠体液和细胞免疫。方法 差速离心分离结核分枝杆菌H37Rv和卡介苗（BCG）的各细胞组分，通过Western杂交检测抗原TPP在结核分枝杆菌H37Rv和BCG中的亚细胞定位情况。分别用5×10^6 CFU的BCG和50μg的TPP蛋白免疫C57BL／6小鼠，检测小鼠血清中抗TPP的IgG1和IgG2a抗体效价。取免疫小鼠的脾细胞，体外抗原刺激，用酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测γ干扰素（IFN-γ）分泌细胞。结果 TPP亚细胞定位于结核分枝杆菌H37Rv和BCG的胞壁和细胞膜组分。TPP蛋白免疫后小鼠产生的TPP特异性IgG1和IgG2a抗体效价明显高于BCG免疫小鼠，并且IgG2a的抗体效价高于IgG1。体外抗原刺激TPP蛋白和BCG免疫小鼠的脾细胞，都能诱导较高的IFN-γ分泌。结论 结核分枝杆菌细胞壁蛋白TPP能诱导小鼠Ⅰ型辅助性T细胞介导的免疫反应，可作为抗结核疫苗的候选抗原。

二甲基三十六烷基铵-卡介苗多糖核酸在结核亚单位疫苗中的佐剂效应

目的探讨二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）作为结核病融合蛋白疫苗佐剂的免疫效应。方法采用热酚法制备BCG—PSN，与DDA联合作为融合蛋白AMM（Ag85B—MPT64 190-196-Mtb8．4）佐剂免疫小鼠，设卡介苗、生理盐水、弗氏不完全佐剂（IFA）及单独应用DDA或BCG—PSN一种佐剂的各组作为对照。应用ELISA和酶联免疫斑点法检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应。结果分离培养疫苗免疫小鼠的脾脏淋巴细胞，用特异性抗原Ag85B刺激后，AMM＋DDA＋BCG—PSN疫苗组、AMM＋DDA组和卡介苗组小鼠每1×10^6个脾淋巴细胞分泌γ-干扰素的细胞数分别为222±79、259±85和230±64，均明显高于AMM＋PBS组（40±4）、AMM＋IFA组（10±3）、AMM＋BCG．PSN组（132±18）和生理盐水组（8±4），差异有统计学意义（t值为2．923—7．118，均P〈0．05）；与单用DDA组比较，添加DDA和BCG—PSN两种佐剂的疫苗组小鼠血清抗体滴度Ig2／IgG，较高（0．125和0．025），但γ-干扰素分泌水平没有增高。结论AMM＋DDA＋BCG—PSN结核病亚单位疫苗能够引起较强的Th1细胞免疫为主的免疫反应，DDA＋BCG—PSN（尤其是DDA）具有增强结核病亚单位疫苗Th1细胞免疫应答的佐剂效应。

结核疫苗研究进展：异源初始-加强免疫策略

近年来，由于人免疫缺陷病毒（HIV）和结核分枝杆菌双重感染以及耐药结核分枝杆菌的流行，导致结核病疫情严峻。目前全球大约有20亿人感染结核分枝杆菌，感染人数接近全世界人口的1／3，联合国已将结核病列为21世纪重点控制的三大疾病之一。因此，预防结核病的疫苗研究工作受到各国政府和科学家的重视。