产蛋白酶海洋细菌的筛选、鉴定及发酵培养基的研究

采用酪蛋白培养基,对来源于中国南海的深海海泥进行微生物的富集与筛选,分离出18株产蛋白酶海洋细菌,从中筛选出一株产蛋白酶活力最高的菌株C-7,结合生理生化实验及16S rDNA基因序列鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。该菌株所产蛋白酶的最适反应温度为50℃,最适pH7,属于中温中性蛋白酶,该蛋白酶在15%NaCl条件下仍能保持原有酶活的43%,具有良好的耐盐性。优化后该菌株产蛋白酶培养基为:葡萄糖5.0g,蛋白胨10.0g,KH2PO40.5g,MgSO4·7H2O 0.3g,NaCl 10.0g,CaCl20.5g,吐温-80 1.5g,蒸馏水1L,pH7.2。

产蛋白酶深海细菌的筛选及其蛋白酶酶学性质

从中国南海深海海泥中筛选出了2株产中低温碱性蛋白酶的菌株SWJS33,SWJS22,并对其发酵液中的蛋白酶性质作了初步研究。研究结果显示,SWJS33,SWJS22所产蛋白酶适用于较广的pH及温度范围,且有较好的温度稳定性和耐盐性。采用16S rDNA结合细菌常规鉴定方法,确认分离得到的SWJS33,SWJS22分别为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。

微小杆菌属SWJS2蛋白酶对鱼肉酶解特性的研究

本文以凤尾鱼、草鱼为原料,研究了本实验室新筛选的微小杆菌属SWJS2所产蛋白酶对凤尾鱼和草鱼蛋白的酶解特性。结果表明:微小杆菌属SWJS2蛋白酶对凤尾鱼和草鱼的最适酶解温度分别为40℃和45℃。微小杆菌属SWJS2蛋白酶对凤尾鱼的酶解效果优于木瓜蛋白酶,酶解12 h时蛋白回收率为72.64%,水解度达21.38%,ORAC值与还原力均高于木瓜蛋白酶的酶解产物。微小杆菌属SWJS2蛋白酶酶解草鱼的蛋白回收率及抗氧化性能则不及木瓜蛋白酶,但水解度较高。微小杆菌属SWJS2蛋白酶对两种鱼肉的酶解产物中游离氨基酸组成与6种商业蛋白酶有明显差异,亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸含量显著高于商业酶,而精氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、天冬酰胺等的含量较低。说明其优先酶切位点与6种商业蛋白酶有较明显的差异。

一株深海来源苏云金芽孢杆菌SWJS07所产蛋白酶的分离纯化及性质研究

利用超滤、硫酸铵盐析、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、Sephadex G-75分子筛柱层析对一株南海深海来源菌苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)SWJS07所产蛋白酶进行分离纯化,纯化后经SDS-PAGE鉴定达到电泳纯,相对分子质量为37.0 k Da,酶的比活力提高了6.39倍,回收率为37.14%。研究其酶学性质表明,该蛋白酶最适催化温度为55℃,在30℃~45℃下稳定性较高,保温300 min残留酶活在80%以上;最适p H 6.5,在p H 6.0~9.0蛋白酶稳定,4℃放置24 h残留酶活在80%以上;2 m M Ca2+、Mn2+对蛋白酶有不同程度的激活作用,而Hg2+、Cd2+、Al3+则强烈地抑制蛋白酶活;当在蛋白酶中添加2 m M Ca2+、Mn2+时,其最适催化温度分别为60℃和55℃,蛋白酶活分别提高了32.86%和28.35%,60℃保温30 min相对酶活基本保持不变,与纯酶(相对酶活残留21.02%)相比蛋白酶的热稳定性显著提高;EDTA-Na2可强烈抑制蛋白酶活,推测该蛋白酶属于金属蛋白酶。