烟草环斑病毒RT-PCR检测体系的优化

烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的代表种,是我国公布的二类进境检疫有害生物。建立特异性强、灵敏性高的检测体系是有效控制TRSV传播的技术保障。本研究在分析引物的特异性、优化退火温度及dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶浓度的基础上,建立了完善的TRSV RT-PCR检测体系。筛选出的TRSV特异性引物对为1-1F/1-1R,在退火温度为53℃、dNTPs终浓度为0.075 mmol/L、引物终浓度为0.30μmol/L、Taq DNA聚合酶终浓度为0.035 U/μL条件下检测效率最高,可从发病植物总RNA量为0.090 ng中检测到目的片段。研究结果对准确灵敏地检测TRSV具有重要意义。

马铃薯Y病毒在种薯中检出率及其株系鉴定

马铃薯是我国重要粮食和经济作物。马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)是危害马铃薯生产的重要病害。种植脱毒种薯是防治PVY最有效的途径。马铃薯种薯携带PVY问题严重,但种薯中PVY株系还不清楚。本研究利用PVY特异性抗体检测了7个马铃薯品种362个种薯,发现不同品种种薯带毒率差异较大,最高达12%。通过RT-PCR方法扩增获得了7个PVY分离物编码区全序列。重组分析发现7个分离物基因组均为重组型,根据重组位点的差异可以分为PVYNTN-NW(SYR-II型)、Rec-1、Rec-2和Rec-3等4种重组类型,后3种为新重组类型。系统进化分析发现,分离物HQH18G3-10与PVYNTN-NW(SYR-II型)处于同一个大的分支,但与中国PVY大田分离物聚集在一起形成一个相对独立的组,命名为PVYNTN-NW(CN型);其余6个分离物与数据库中的中国分离物聚集在PVYN-Wi组。这暗示PVY中国分离物具有相对独立的进化过程,PVY马铃薯大田分离物和种薯分离物进化上相近。所有分离物均能在珊西烟上引起典型叶脉坏死症状,HQH18G3-10引起的坏死症状最为严重。本研究首次报道了我国种薯内PVY发生情况,对分析病毒发生发展规律和防控具有借鉴作用。