抗人CD44单链抗体基因的构建、表达及活性测定

目的:构建表达抗CD44单链抗体(ScFv),并进行体外活性的测定。方法:采用RT-PCR方法从分泌鼠抗人CD44mAb的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL可变区基因,再通过重叠延伸拼接PCR方法在VH和VL。可变区基因之间引入连接肽(G4S)3,体外构建抗人CD44单链抗体基因。将其克隆至表达载体PET22b并在大肠杆菌中表达。SDS-PAGE和Flag-FITC分析结果表明,抗CD44-ScFv在BL21菌中获得表达,表达产物以可溶性蛋白形式存在,用镍柱亲和层析纯化和体外复性过程,获得了高纯度的单链抗体片段。结果:证实抗CD44-ScFv可与人类白细胞表面的分化抗原CD44结合,保留了鼠源性单抗与CD44结合活性。结论:抗人CD44-ScFv的构建与表达,为下一步针对髓系白血病的靶向治疗奠定了基础。