基于网络药理学探讨表没食子儿茶素没食子酸酯治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的基于网络药理学探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)治疗阿尔茨海默病(AD)的相关作用靶点及主要信号通路,探讨其治疗AD的可能作用机制。方法通过Pubchem数据库筛选EGCG活性成分及作用靶点;通过利用Genecards数据库和人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索AD的基因靶点,将疾病靶点与药物作用靶点融合找出交集靶点。在String平台利用EGCG的靶标基因与AD靶标基因的交集基因构建蛋白相互作用(PPI),运用Cytoscape 3.7.2软件构建“EGCG-成分-靶点”网络,通过Metascape等数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,最后采用AutoDock Vina软件进行分子对接。结果获得EGCG有效成分和作用靶点有171个,其中与AD相关的靶点95个。EGCG改善AD病理变化的核心靶点主要集中在AKT1、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-6等蛋白上。这些靶点涉及信号通路169条,包括磷脂酰肌醇3-羟激酶(PI3K)/Akt信号通路、低氧诱导因子(HIF)-1信号通路、促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路、Ras信号通路等。分子对接结果显示:核心成分与关键靶点具有良好的结合力。结论EGCG治疗AD的潜在生物学作用机制可能是通过调控TNF等信号通路的活性,改善海马神经元细胞的损伤,减轻Aβ沉积,Tau蛋白过度磷酸化从而延缓AD的发生。

基于混合式教学理念的组织学与胚胎学课程思政的实践

利用数字人医学虚拟仿真教学系统和学习通app进行线上线下混合教学,探讨和评价基于混合式教学理念的组织学与胚胎学课程思政的应用效果。对学生进行成绩对比和问卷调查,结果显示在组织学实验课中引入课程思政的混合教学模式明显提升学生成绩,激发学习兴趣,使学生树立正确的人生观、价值观、职业道德观,养成良好的专业素养。

表没食子儿茶素没食子酸酯对APP/PS1双转基因小鼠神经元突触可塑性和神经细胞黏附分子表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠空间学习记忆能力、海马CA1区突触超微结构和神经细胞黏附分子表达的影响。方法选用8周龄雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、EGCG组、盐酸多奈哌齐组,另以同窝阴性小鼠设立正常组,每组12只。连续灌胃给药6个月后进行相关指标检测。采用Morris水迷宫实验观测APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力;透射电子显微镜观察小鼠海马CA1区突触超微结构;分别采用免疫荧光法及免疫印迹法检测APP/PS1转基因小鼠海马CA1区神经细胞黏附分子(NCAM)和唾液酸转移酶(ST8SiaⅡ)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组逃避潜伏期延长;与模型组比较,EGCG组、盐酸多奈哌齐组小鼠逃避潜伏期下降(P<0.05)。电子显微镜结果显示,与模型组比较,EGCG组和盐酸多奈哌齐组突触界面曲率变化不明显;突触间隙宽度变窄,突触后致密物厚度增加(P<0.05)。免疫荧光结果显示,海马CA1区NCAM、ST8SiaⅡ蛋白表达在神经元的胞体内,EGCG组和盐酸多奈哌齐组NCAM、ST8SiaⅡ蛋白表达明显增加(P<0.05),免疫印迹实验发现其含量亦呈高表达水平(P<0.05)。结论EGCG对APP/PS1转基因小鼠的空间学习记忆功能具有改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构,提高小鼠海马神经黏附分子表达有关。

鹿茸多肽在阿尔茨海默病模型小鼠中抗氧化应激的作用机制

目的探讨鹿茸多肽(VAP)在阿尔茨海默病(AD)模型中抗氧化应激的作用机制。方法选用8月龄雄性淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠随机分为模型组、VAP组,另以同窝阴性小鼠设立为对照组,每组12只。连续灌胃给药6个月后进行行为学、形态学和氧化应激相关指标检测。Western blotting检测小鼠海马组织中APP及β-分泌酶1(BACE1)蛋白的表达水平。另外以β-淀粉样蛋(Aβ)_(25~35)(25μmol/L)诱导SH-SY5Y细胞损伤建立AD细胞模型组,VAP组(VAP 500 mg/L+Aβ_(25~35)25μmol/L)和对照组。检测细胞凋亡、膜电位、活性氧簇(ROS)水平和氧化应激相关指标。结果动物实验发现,与模型组比较,VAP组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05)。模型组小鼠海马CA1区神经元减少且排列紊乱,VAP组排列较规则,形态有明显改善。与模型组比较,VAP组老年斑数量减少;与模型组比较,VAP组丙二醛(MDA)含量下降,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组APP和BACE1含量上升,与模型组比较,VAP组APP和BACE1含量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞培养实验发现,VAP组细胞凋亡率下降。与模型组比较,VAP组线粒体膜电位上升,ROS含量明显下降,MDA含量下降,SOD和GSH-Px含量上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论VAP对AD模型动物和细胞的氧化应激损伤具有保护作用,可能是通过降低ROS产生,且提高抗氧化酶系活性,减少Aβ的沉积而实现的。

电针对SAMP8小鼠行为学及APP mRNA和BACE-1 mRNA影响

目的探讨电针对SAMP8小鼠行为学及淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)和APP切割酶1(B site APP cleaving enzyme1,BACE-1)的影响,为临床治疗阿尔茨海默病病提供新的途径。方法将快速老化模型小鼠(SAMP8)60只随机分成模型组、电针组和西药组,每组20只,正常老化小鼠(SAMR1)20只作为正常组。电针组电针刺激"百会"、"肾俞"、"内关"、"大椎"穴;西药物组给予石杉碱甲0.02 mg/kg剂量灌胃;正常组和模型组不给予治疗。治疗20 d后,用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,免疫组化定性检测小鼠海马APP和BACE-1蛋白的表达,进一步实时荧光定量PCR法测定APP mRNA和BACE-1 mRNA的表达。结果与模型组比较,西药组与电针组逃避潜伏期缩短,有效区停留时间和及跨越平台次数均显著增加(P<0.05),电针组APP mRNA和BACE-1 mRNA相对表达量显著减少(P<0.05)。结论电针可能抑制SAMP8小鼠脑内APP mRNA and BACE-1 mRNA表达,减少Aβ生成,改善其学习记忆障碍。

翻转课堂在组织学与胚胎学教学中的实践与反思

随着信息技术发展,翻转课堂已成为教育改革的新方向。本研究对翻转课堂教学模式在组织学与胚胎学教学中进行了尝试与探索,结果显示学生对翻转课堂教学的欢迎度较高,且在提高自主学习能力、分析问题解决问题等多方面的培养给予了肯定,文章也对翻转课堂实践中遇到的一些问题进行了分析和反思,从而为提高组织胚胎学教学质量和实现教学目标提供参。

“三导向”人才培养模式下多种教学法在组织学与胚胎学教学中的应用研究

目的:探讨在"三导向"人才培养模式下多种教学法在组织学与胚胎学教学中的应用效果及可行性分析,为提高教学质量和实现教学目标提供参考。方法:实验组与对照组分别采用多种教学法和传统教学方教学。在课程结束后进行问卷调查,并比较两组学生的期末考试成绩。结果:两组学生期末考试成绩差异有统计学意义(P<0.05),实验组期末考试平均成绩优于对照组。两组学生对课程的满意度均较高,无统计学差异(P>0.05)。实验组对于各项教学效果的满意度均高于对照组,差异存在统计学意义(P<0.05)。结论:以"三导向"为培养目标的多种教学法在组织学与胚胎学教学中的应用能够提高学生的学习兴趣、团队协作能力、发现和解决问题的能力等,对培养应用型医疗人才具有重要意义。

“三导向”人才培养模式下以器官系统为基础整合生殖系统教学的研究与实践

目的探讨在"三导向"为人才培养模式下,以器官系统为基础整合生殖系统教学的应用效果及满意度分析,为提高教学质量及实现适合卓越医师培养的教学目标提供参考。方法实验组与对照组分别采用"以器官系统为导向"课程模式和"以学科为中心"课程模式。在课程结束后进行问卷调查,并比较两组学生的期末考试成绩。结果两组学生期末考试成绩对比,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组期末考试平均成绩优于对照组。两组学生对课程的满意度均较高,差异无统计学意义(P>0.05);在提高学习兴趣、增加各学科知识间的横向联系、构建完整医学知识框架、培养临床思维等方面实验组满意度较高,与对照组对比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 "以器官系统为中心"的课程模式是切实可行的,为高等医学教学改革提供了一个新的思路。

基础医学“内环境稳态Ⅱ”整合课程改革的理论探索与实践

目的:探讨基础医学整合课程教学体系的可行性和效果。方法:通过按系统功能整合教学体系,构建整合课程、编写配套教材、组建教师团队、优化教学资源,进行"内环境稳态II"整合课程中生殖系统的教学改革。结果:整合课程受到学生的认可和好评,特别是在提高学习兴趣、提高分析解决问题能力、增加各学科知识间的联系、构建完整医学知识框架、培养临床思维等方面满意度较高。结论:整合课程教学模式促进整体教学水平的提升,实现教学效果的最优化,对培养医学人才具有重要意义。

胚胎时期小鼠小肠的组织发生

目的观察小鼠胚胎各个时期小肠组织的形态结构及杯状细胞在小肠内的分布规律，为小鼠小肠的组织发生提供形态学依据。方法采用HE染色和PAS染色，对小鼠胚胎第13．5天（E13．5d）至出生后第1天（Pld）胚胎的石蜡切片染色并行光学显微镜观察。结果（1）小鼠肠壁于E13．5d已分化出现黏膜层、黏膜下层、肌层及浆膜。（2）肠绒毛于E15．5d分化形成，杯状细胞于E16．5d逐渐发育分化出现，肠腺于E18．5~Pld发育分化形成，此时小肠基本结构形成。（3）杯状细胞主要分布于小肠绒毛上皮，其中以回肠末端最多，回肠、空肠、十二指肠顺次递减（P〈0．05）。杯状细胞数量随胎龄逐渐增加而逐渐增多，于P1d最多（P〈0．05）。结论小肠上皮分化于E15．5d至E17．5d最为迅速，胚胎时期小肠基本结构形成，其吸收消化功能基本建立完成。

翻转课堂教学法在《组织学与胚胎学》实验教学中的应用

目的探讨翻转课堂教学法在《组织学与胚胎学》实验教学中的应用效果。方法以齐齐哈尔医学院2015级临床医学专业368人为研究对象,共分为4个行政班级。其中临床医学9~13班为实验组,共计171人,采用翻转课堂教学模式,临床医学5~8班为对照组,共计197人,采用传统教学模式.比较授课效果。结果两组学生实验考试成绩在最高分上无差异,但实验组平均分显著优于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。在各分数段人数分布上看,实验组在成绩大于10.5分人数多于对照组,小于6分人数少于对照组,成绩中上等人数较多,成绩优于对照组。结论翻转课堂作为一种新型教学模式受到极大关注,是教学改革的新方向。通过对翻转课堂教学模式在组织学与胚胎学实验教学中进行了尝试与探索,基于探究性学习为学生带来的主动学习,激发学生的学习积极性和主动性,构建了＂以问题为导向,以学生为中心＂的教学模式。研究表明,翻转课堂能够提高学生的自主学习能力、团队协作能力、分析问题解决问题能力及创新思维等,从而提升教学效果,为信息时代的教与学提供新的思路。

DEC1基因真核表达质粒的构建及对乳腺癌细胞增殖的影响

目的:构建DEC1真核表达载体pEGFP-Nl-DEC1,探讨DEC1基因对乳腺癌细胞增殖的影响及可能机制。方法:提取人乳腺癌癌细胞MCF-7总RNA,扩增获得DEC1基因,将DEC1基因插入真核表达质粒pEGFP-Nl,将成功构建的pEGFPNl-DEC1及pEGFP-Nl质粒利用PEI转染MCF-7细胞,并通过G418筛选得到稳定转染细胞系。通过Western blot检测转染前后细胞DEC1、CyclinD1蛋白表达水平;MTT法检测转染前后MCF-7细胞增殖的变化。结果:成功构建DEC1真核表达载体pEGFP-Nl-DEC1;与pEGFP-Nl组和空白对照组相比,pEGFP-Nl-DEC1组DEC1表达明显增高(P<0.05);cyclin D1的表达明显降低(P<0.05);pEGFP-Nl-DEC1组细胞增殖能力明显受到抑制。结论:过表达DEC1可抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,DEC1可能通过下调cyclin D1基因的表达从而阻止细胞周期及TGF-β信号通路而发挥作用。

高糖环境下趋化因子8促进间充质干细胞旁分泌功能提高人脐静脉血管内皮细胞归巢

背景:趋化因子具有促进干细胞旁分泌血管活性因子,加速血管新生的重要作用。目的:观察高糖环境下,趋化因子8(CXCL-8)刺激的人骨髓间充质干细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞归巢的影响,并分析Sonic Hedgehog信号通路在CXCL-8刺激骨髓间充质干细胞的机制。方法:(1)细胞体外实验:在细胞高糖环境模型下,将质量浓度100μg/L趋化因子8刺激的间充质干细胞设为高糖CXCL-8组,预先以5μmol/L的shh抑制剂辛基马来酰亚胺处理45 min,再用质量浓度100μg/L CXCL-8刺激间充质干细胞者为高糖Shh抑制剂组,高糖环境下培养的间充质干细胞为高糖对照组。提取各组细胞上清液为条件培养基培养人脐静脉血管内皮细胞,其分组按条件培养基而定。使用CCK8细胞增殖实验、细胞划痕实验或Transwell细胞小室实验分别观察各条件培养基(CM)对人脐静脉血管内皮细胞增殖、凋亡、趋化等能力的影响;(2)动物体内实验:建立C57BL/6J小鼠糖尿病皮肤溃疡模型,分别以各组间充质干细胞条件培养基进行处理,验证CXCL-8刺激的间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞归巢和溃疡愈合的影响。结果与结论:(1)体外实验结果:与高糖对照条件培养基相比,高糖CXCL-8组条件培养基能够促进人脐静脉血管内皮细胞增殖、降低人脐静脉血管内皮细胞凋亡率,并且细胞划痕面积闭合率、细胞迁移率均明显提高(P<0.01),高糖CXCL-8组条件培养基中血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子水平明显提高(P<0.01);与高糖CXCL-8组相比,高糖Shh抑制剂组上述结果指标呈反向变化(P<0.01);(2)体内实验结果:与Shh抑制剂-CM组和间充质干细胞-CM组相比,CXCL-8-CM组糖尿病皮肤溃疡的愈合效果和绿色荧光蛋白标记的人脐静脉血管内皮细胞数均显著升高(P<0.01);(3)结果提示,在高糖环境下,CXCL-8能够通过Shh通路,刺激间充质干细胞旁分泌血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子,提高了对脐静脉血管内皮细胞招募的能力。

人参皂苷Re对APP/PS转基因痴呆小鼠学习记忆力及海马Caspase-3、P53蛋白的影响

目的探讨人参皂苷Re对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆影响及其对海马神经元保护作用机制。方法将淀粉样前体蛋白/早老素(APP/PS)转基因小鼠分为五组,分别为对照组、AD组、低-Re组、中-Re组、高-Re组,选择人参皂苷Re中药为干扰药物,选择Morris水迷宫实验观察各种小鼠学习记忆能力,选择甲苯胺蓝染色实验观察各组小鼠海马区神经元形态,选择免疫组织化学技术观察各种小鼠半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、P53蛋白变化情况。结果与AD组比较,中低-Re组、中-Re组、高-Re组小鼠认知功能得到改善、海马区受损神经元得到修复、海马区神经元Caspase-3、P53蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论人参皂苷Re对AD的影响机制与降低其受损海马神经元凋亡有关。

电针对阿尔茨海默病大鼠海马胶质细胞源性神经营养因子及受体的影响

目的探讨电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及受体GFR-a1表达的影响。方法通过Morris水迷宫筛选56只健康Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、西药组和电针组,每组14只。正常组常规饮水和饲料,不给予任何处理。其余三组大鼠均采用聚集态Aβ25~35所致AD模型,模型组造模后不给予任何处理。电针组施以电针双肾俞、双太溪、双足三里、百会、大椎等穴位治疗。西药组采用盐酸多奈哌齐灌胃,疗程4 w。治疗后各组大鼠灌注固定后取海马,用免疫组化和RT-PCR检测大鼠海马GDNF及受体的表达。结果与正常组大鼠比较,模型组大鼠海马GDNF及其受体GFR-a1阳性细胞表达降低明显(P<0.05);与模型组比较,电针组和西药组大鼠海马GDNF、GFR-a1阳性细胞及GDNF mRNA表达增加(P<0.05)。结论电针可能通过对AD大鼠海马GDNF及其受体GFR-a1表达增强的影响,对神经元起到保护作用。

基于“三导向”的医学形态学课程整合的探讨与体会

随着医学模式转变,对培养出高层次、能够满足时代发展需要的创新型医疗卫生人才提出了更高的要求。课程建设是保证人才质量的重要环节。医学课程整合是当前医学教育改革与发展、培养新型医学综合人才的客观需要。在以“器官系统”课程整合基础上,结合我院面向学生未来发展“三导向”培养模式,进行人体形态学科的横向、纵向整合,从而构建新的医学形态学课程体系。文章从课程整合的必要性、整合途径、评价体系等方面阐述了形态学课程体系的具体实践,为培养新时代医学专业人才奠定基础。

TBL教学法在组织学与胚胎学实验课的应用体会

目的探讨TBL教学法在组织学与胚胎学实验课教学中的应用效果。方法2017年3月-2017年5月对本校全日制本科2016级护理学专业184名学生在实验课上开展对比性教学,将其随机分为SBL组和TBL组,教学内容和教学进度完全一致,具有可比性。课程结束后,我们采用成绩评分和调查问卷的形式评价TBL教学效果。结果学生认为TBL教学法很好。实验考试结果显示,TBL组的学生平均成绩高于SBL组。结论TBL教学法有利于学生成绩的提高,并在学生中受到欢迎,其在组织学与胚胎学实验教学中是一种培养和提高学生各种能力及综合素质的较好的教学模式。

TBL教学法在组织学与胚胎学实验教学中的效果探讨

目的探讨TBL教学法在组织学与胚胎学实验教学中的应用效果。方法采用TBL教学法与传统教学法进行对比性研究。选取我校2016级口腔医学专业1～4班学生进行对比教学,将其随机分为SBL组和TBL组,教学内容和教学进度完全一致,具有可比性。结果95.0%学生认为TBL教学法很好。实验考试结果显示,TBL组的学生平均成绩高于SBL组。结论 TBL教学法在组织胚胎学实验教学中是一种培养和提高学生各种能力及综合素质的较好的教学模式。因此,应结合实际合理运用TBL教学法。

上调锌指和含BTB域20表达对APPswe/PSE9转基因阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力的影响

目的探讨上调锌指和含BTB域20(A20)表达对APPswe/PSE9转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆影响及其对海马神经元凋亡的抑制作用。方法将APPswe/PSE9转基因小鼠40只分为4组,分别为对照组、AD组、干扰小RNA(siRNA)-AD组和A20-AD组。选择携带高表达A20的腺病毒为干扰药物,采用Morris水迷宫实验观察小鼠空间学习记忆能力,采用Westren blottong技术检测A20的表达,采用免疫组织化学法观察各种小鼠海马CA1区P53表达情况。结果与AD组比较,A20-AD组小鼠学习记忆功能有所改善,海马CA1区神经元凋亡率显著降低,海马CA1区P53表达显著降低。结论上调A20表达能提升APPswe/PSE9转基因小鼠学习记忆能力,可使APPswe/PSE9转基因小鼠海马CA1区P53表达降低。

Wnt/β-Catenin在骨髓基质干细胞治疗阿尔茨海默病大鼠脑中的表达

目的探讨BMSCs移植对AD模型大鼠的治疗作用。方法将大鼠随机分成5组,正常组、模型组、模型对照组、治疗组、治疗对照组,每组10只。双侧海马区注射Aβ23-35建立AD大鼠模型后,治疗组进行BMSCs的移植治疗。治疗对照组用氢溴酸加兰他敏进行灌胃治疗。结果行为学实验检测各组大鼠平均逃避潜伏期及首次跨越原平台时间,模型组与正常组比较(P<0.01),治疗组与治疗对照组与模型组比较(P<0.01),与正常组比较(P<0.05),均有显著性差异;形态学实验HE染色显示模型组颗粒细胞及锥体细胞有破坏现象,治疗组和治疗对照组明显恢复。免疫组化检测显示正常组和模型对照组可见海马区阳性蛋白表达较多而模型组阳性表达明显减少,治疗组和治疗对照组阳性表达较模型组明显增多。结论 BMSCs移植治疗AD的作用机制可能与通过调节Wnt信号转导通路,影响了学习记忆相关酶及蛋白在海马区的表达而发挥作用有关。