双抗体夹心酶联免疫法检测不同样品中的蓖麻毒素

目的应用酶联免疫吸附分析方法(ELISA)检测待测样品中的蓖麻毒素。方法用蛋白G亲和层析柱纯化蓖麻毒素单克隆抗体(4C13,3D74,5E4和5H6),以3D74及辣根过氧化物酶(HRP)标记的4C13建立的双抗体夹心ELISA对含有蓖麻毒素的多种样品进行检测。结果抗蓖麻毒素的单克隆抗体经亲和层析纯化后具有较高的蛋白纯度,应用HRP标记的4C13与3D74建立双抗体夹心ELISA,对于溶解于磷酸缓冲液中的蓖麻毒素标准品的检测灵敏度可达2.5μg·L-1;对于土壤、面粉、牛奶、咸菜汁、雪碧、可乐和腐乳汁中的蓖麻毒素样品检测的灵敏度为2.5～5.0μg·L-1;与磷酸缓冲液样品相比较,含有相同浓度蓖麻毒素的小鼠和人血清样品ELISA的阳性结果明显减弱。结论双抗体夹心酶联免疫法能够有效用于含有蓖麻毒素样品的检测分析。

Western印迹法分析蓖麻毒素在正常小鼠血清和肝组织匀浆中的稳定性

以重组蓖麻毒素A链（rRTA）免疫家兔,制备的抗rRTA兔血清效价高,能达到1∶51200.以兔多抗血清为检测抗体,建立蓖麻毒素的Western印迹检测法,对蓖麻毒素检测灵敏度可达1 ng.含有蓖麻毒素的小鼠血清和肝组织匀浆（蓖麻毒素终浓度为0.67μg/mL）在37℃孵育0~4 h后,应用此法体外观察蓖麻毒素在正常小鼠组织样品中的稳定性,结果显示Western印迹可用于组织中蓖麻毒素的测定,蓖麻毒素可在小鼠血清和肝组织匀浆中稳定存在.

缺氧诱导因子-1抑制剂的发现与抗肿瘤作用机制研究

肿瘤组织内微环境缺氧是实体瘤发生发展中一个持续存在的重要病理特征之一，与肿瘤侵袭转移、预后不良、

蓖麻毒素检测方法研究进展

蓖麻毒素是一种从蓖麻子中分离的核糖体失活蛋白,其含量高,易于纯化。作为蛋白合成抑制剂,它可以通过吸入、食入及静脉注射等方式致人中毒,已被列入《禁止化学和生物武器公约》控制清单1之中。对于这一潜在的生化战剂,快速、灵敏的检测方法是预防中毒发生和中毒后医学救治的重要手段。理想的蓖麻毒素检测方法应具有高灵敏性、高特异性,并可对多种样品进行快速分析。本文综述了近年来蓖麻毒素检测方法的研究进展。

缺氧诱导因子-1抑制剂细胞筛选模型的建立及抑制剂研究

目的:建立并应用2种缺氧诱导因子-1(HIF-1)抑制剂细胞筛选模型对雷公藤甲素和三白脂素-8活性进行评价,为HIF-1靶点抑制剂的研发提供基础。方法:建立基于报告基因的HIF-1抑制剂细胞筛选模型,U251-HRE和T47D-HRE细胞模型,分别对雷公藤甲素与三白脂素-8活性进行检测,观察其对下游关键调控基因VEGF表达的影响,并用MTT法比较2类抑制剂对多种实体瘤细胞的增殖抑制活性。结果:2种细胞模型在1%O2缺氧20 h,由HIF-1诱导的荧光素酶高表达,可用于抑制剂的活性评价。雷公藤甲素对U251-HRE细胞模型敏感,其HIF-1抑制活性IC50(3.4±0.5)×10-8mol.L-1,而三白脂素-8对T47D-HRE细胞模型敏感,其IC50(2.4±0.6)×10-8mol.L-1;雷公藤甲素和三白脂素-8在1×10-7mol.L-1都可对T47D细胞因缺氧所致的VEGF表达升高产生明显抑制作用,其抑制率分别为85.2%,62.6%;雷公藤甲素对所测肿瘤细胞株都有明显的增殖抑制活性,而三白脂素-8对乳腺癌、胰腺癌细胞株较为敏感。结论:针对不同类别的HIF-1抑制剂建立相应敏感的特异性细胞筛选模型至关重要。

生物样品中蓖麻毒素的双夹心酶联免疫定量检测方法及应用

目的建立定量检测生物样品中蓖麻毒素的双夹心ELISA方法并研究毒素在大鼠体内的分布。方法利用抗蓖麻毒素的单克隆抗体(MAb)3D74和辣根过氧化物酶(HRP)标记的小鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体4C13,建立了定量检测血清和组织样品中蓖麻毒素的双夹心ELISA方法,并对方法学进行了必要的验证。结果建立的双抗夹心ELISA方法检测组织中蓖麻毒素的浓度范围为1.25～320 ng/ml,最低定量限为2.5 ng/ml,日内和日间精密度分别小于3.5%和9%。将该方法应用于蓖麻毒素组织分布的定量测定,结果显示,大鼠静脉染毒后毒素可以在心、肝、脾、肺、肾、肠和脂肪等组织分布,以脾脏的分布为最高,其次为肝脏,染毒后0.5和2 h脾与血清的比值分别为3.9和7.2。在脑和肌肉中未检出毒素。结论建立的双夹心ELISA方法简便、灵敏,可以用于定量检测血清和组织等生物样品中的毒素含量,为蓖麻毒素的毒物代谢动力学研究及毒素中毒的快速检测提供了技术支撑。

新型HIF-1抑制剂三白脂素-8衍生物LXY6099的抗肿瘤作用

为了发现新的以HIF-1为靶点的小分子抑制剂,并研究其抗肿瘤作用,本研究首先对三白脂素-8的结构进行修饰,然后通过基于报告基因的HIF-1抑制活性筛选得到有效化合物,最后通过体外MTT实验和体内裸鼠异体移植瘤等方法验证化合物的抗肿瘤作用。结果表明,筛选得到的新型衍生物LXY6099对HIF-1具有明显的抑制作用,IC50为2.46×10-10 mol?L-1(比母体化合物低100倍左右);对多种人源肿瘤细胞的生长均具有良好的抗增殖作用,能有效抑制人源乳腺癌MX-1的生长(抑制率达到44.58%)。结果提示,LXY6099作为一个结构新颖的HIF-1抑制剂,在体内外均具有一定的抗肿瘤作用。