不同配方饲料对DEN诱导小鼠肝癌模型建立的影响

目的建立二乙基亚硝胺(DEN)诱导的小鼠肝癌模型并使用两种不同配方饲料:SPF级小鼠大鼠全价配合饲料和AIN93-G配方合成饲料分别喂养,探讨不同饲料喂养对构建DEN诱导小鼠肝癌模型的影响。方法14日龄雄性C57BL/6小鼠腹腔一次性注射DEN溶液,给药量25 mg/kg体重,建立小鼠肝癌模型。小鼠离乳后分为两组,一组以常规SPF级大小鼠全价配合饲料喂养,另一组以AIN-93G配方合成饲料喂养。模型小鼠生长至9月龄时处死,取肝脏组织称重,观察并记录肝癌生长情况。结果全价饲料组小鼠肝脏全部产生肿瘤,AIN-93G组小鼠体重和肝脏重量明显低于全价饲料组小鼠,肝癌发生率、肿瘤结节数量和大小也明显低于全价饲料组小鼠。结论全价饲料喂养的小鼠DEN诱导肝癌模型造模成功,而AIN-93G饲料喂养的小鼠诱导肝癌的发生发展受到抑制,同时小鼠体重明显下降,提示了饮食因素在动物疾病模型建立中起到的关键作用。

冬凌草甲素对LPS诱导Raw264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用

目的研究冬凌草甲素对脂多糖(LPS)诱导的Raw264.7巨噬细胞炎症反应的影响。方法选用小鼠巨噬细胞Raw264.7,CCK-8法确定冬凌草甲素作用的最适浓度;设立正常对照组、模型对照组(LPS组)、实验组(冬凌草甲素预处理+LPS组)和阳性药组(地塞米松预处理+LPS组),实时定量PCR法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和TLR4 mRNA表达水平的改变;Western blot法检测NF-κB p65、磷酸化p65(p-p65)蛋白表达水平的改变。结果冬凌草甲素作用于Raw264.7细胞的最佳浓度为10μmol/L;与LPS组比较,冬凌草甲素预处理实验组Raw264.7细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平明显下降,IL-10 mRNA表达水平明显升高,TLR4基因表达降低,NF-κB活化入核减少。结论冬凌草甲素能下调LPS诱导的Raw264.7细胞促炎因子表达,其抗炎免疫作用机制与抑制TLR4-NF-κB信号通路的活化有关。

雷公藤甲素对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的探究雷公藤甲素对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7增殖的抑制作用。方法取培养的乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7,用雷公藤甲素按不同浓度处理24 h后提取细胞蛋白和RNA,用Western blot和RT-PCR来检测磷脂酶D1(PLD1)和c-Myc的表达。结果雷公藤甲素能够抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的增殖,并且在MDA-MB-231细胞中下调PLD1和c-Myc的表达。结论雷公藤甲素能够抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7的增殖。

靶向抑制巨噬细胞Act1表达对溃疡性结肠炎的作用

目的探讨巨噬细胞NF-κB活化因子1(nuclear factor kappa B activator 1,Act1)在炎症性肠病中的作用。方法以巨噬细胞Act1表达被靶向抑制的小鼠(anti-Act1)为研究对象,利用葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导溃疡性结肠炎模型,通过检测小鼠体重变化、便血情况、粪便黏稠度等进行疾病活动指数评分,对结直肠组织进行HE染色评价炎症严重程度,免疫组化方法分析白细胞和巨噬细胞等的浸润情况并用RT-q PCR法检测相关细胞因子的表达变化。结果在DSS诱导7 d后与C57小鼠相比,anti-Act1小鼠结直肠炎症指标评分较低,巨噬细胞等浸润数量较少,TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达较低。结论靶向抑制巨噬细胞Act1表达能够减轻DSS诱导的溃疡性结肠炎。

命运分子cNumb在原肠期胚胎的表达及其生物信息学分析

目的探讨命运分子c Numb在原肠期胚胎中的表达情况及其基因和编码蛋白的基本生物学特征。方法利用原位杂交技术检测c Numb基因在原肠期鸡胚中的表达情况,同时应用生物学软件和在线平台对c Numb基因及其编码蛋白进行生物信息学分析。结果 c Numb mRNA在鸡胚4期开始表达于原条顶端,随发育过程逐渐扩展至亨氏节、头突和神经管,但表达区域仍相对集中。Numb基因在不同物种中具有较高保守性,c Numb编码的蛋白属于胞内蛋白,包含磷酸酪氨酸相互作用结构域和多个潜在磷酸化位点,可参与调节多种细胞生物学过程。结论通过生物信息学分析获得了c Numb基因及其蛋白的生物学特征,为进一步研究Numb在胚胎神经发育中的调控机制奠定了基础。

共分子伴侣SGTα的二级结构及其B细胞抗原表位预测

目的预测共分子伴侣SGTα蛋白的二级结构及其潜在的B细胞抗原表位特性。方法以NCBI的蛋白质数据库中得到的人SGTα蛋白氨基酸序列为基础,利用PSIPRED、Prot Scale、IEDB及Bepipred等生物信息学在线资源分析其二级结构特征及亲水性、表面可及性、柔韧性和抗原指数等,并与其同源物SGTβ进行比对,预测人SGTα蛋白可能的B细胞线性抗原表位。结果 SGTα蛋白的二级结构组成元件主要为α-螺旋和无规卷曲。潜在的B细胞线性抗原表位存在于69~87、207~211、263~269区段;经与SGTβ蛋白序列比对,SGTα蛋白的N端69~87区段,即KEMPQDLRSPARTPPSEED肽段可能为人SGTα的B细胞抗原优势表位。结论通过对人SGTα蛋白进行生物信息学分析获得了SGTα蛋白的二级结构和潜在的B细胞抗原表位,为进一步利用合成肽制备抗SGTα的抗体提供了依据。

SGT基因杂合缺失小鼠血液生理生化指标分析

目的分析SGT基因杂合缺失对不同年龄小鼠血液指标和代谢的影响。方法分别采集10周龄、26周龄SGT基因杂合缺失(SGT^(+/-))小鼠和野生型小鼠眼眶血液,用全自动血细胞分析仪和生化分析仪检测常用血液生理指标和生化指标,进行不同年龄和基因型间统计比较。结果与同基因型低龄小鼠对比,高龄小鼠多项血液生理生化指标均发生增龄性改变。与同龄野生型对照相比,10周龄SGT^(+/-)小鼠大血小板比率降低,未结合型胆红素浓度降低(P<0.05),其余指标均未见统计学差异;26周龄SGT^(+/-)小鼠血小板计数、血小板比容和中性粒细胞计数降低,碱性磷酸酶、未结合型胆红素、胆固醇及甘油三酯等指标改变有统计学意义(P<0.05)。结论SGT基因杂合缺失能够诱发高龄小鼠部分血液、血清生化指标的改变。

自噬相关因子在DSS诱导的溃疡性结肠炎中的作用

目的研究肠道上皮组织自噬在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎中的作用.方法以C57小鼠为研究对象,利用DSS诱导溃疡性结肠炎(UC)动物模型,观察小鼠体质量、粪便粘稠度、便血以及结直肠长度情况,对结直肠组织进行HE染色,观察结肠组织病理形态,并运用免疫组化检测结肠组织中炎症因子TNF-α、IL-1β的表达,用免疫荧光、免疫组化以及RT-q PCR方法检测结肠组织中自噬相关基因ATG7、LC3-b、P62的表达.结果与对照组比较,DSS组小鼠体质量明显下降、粪便粘稠度和便血情况加重,结直肠长度缩短.炎症因子TNF-α、IL-1β的表达上调,自噬相关基因LC3-b、P62以及ATG7均表达下降.结论自噬在溃疡性结肠炎中作用减弱.

基于基质辅助激光解吸电离质谱成像技术对高血脂模型大鼠脑部脂质变化的研究

目的基于基质辅助激光解吸电离质谱(MADLI-MSI)成像技术分析高血脂模型大鼠脑部脂质变化。方法高脂高胆固醇饲料喂养大鼠10周建立高血脂模型,实验分为正常组和模型组。运用生物化学方法检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)的含量;利用MADLI-MSI质谱成像技术对高血脂模型大鼠脑片扫描;采用主成分分析及工作测试曲线分析,寻找可能潜在的生物标记物。结果模型组与正常组相比,脑片脂质分布没有变化,脑切片主成份分析(PCA)分析也没有差异。结论高脂高胆固醇诱导10周大鼠与正常大鼠脑组织没有差别。

磷脂酶D1在乳腺癌细胞中的表达及雷公藤甲素的干预作用

目的:探讨磷脂酶D1(PLD1)在不同乳腺癌细胞中的表达情况以及雷公藤甲素(TP)对人乳腺癌细胞PLD1表达的影响.方法:体外培养人乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231和小鼠乳腺癌细胞4T1,以人乳腺上皮细胞MCF10A为对照,采用半定量RT-PCR测定PLD1 mRNA表达水平,Western blot法测定PLD1蛋白表达水平,并分别测定不同浓度TP对PLD1及细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA和蛋白的表达水平的影响.结果:半定量RT-PCR和Western blot分析均显示,PLD1 mRNA和蛋白在乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231和4T1中的表达显著高于乳腺上皮细胞MCF10A,其中MDA-MB-231细胞PLD1蛋白表达水平约为MCF10A细胞的20倍.TP抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的同时下调PLD1和cyclin D1表达水平,并且呈一定浓度依赖性.结论:相比乳腺正常上皮细胞,PLD1 mRNA和蛋白在乳腺癌细胞中表达增高,TP抑制乳腺癌细胞增殖的作用机制与其抑制PLD1的表达有关.

SGTA基因及其蛋白的生物信息学分析

[目的]对SGTA基因及其蛋白的结构和特征进行生物信息学分析,为研究SGTA与肿瘤形成和发展的相关性提供理论基础。[方法]运用生物信息学数据库和软件对SGTA基因的结构、单核苷酸多态性位点(SNP)、SGTA基因与其他基因的相互作用网络、SGTA蛋白的理化性质、二级结构、蛋白结构域、蛋白翻译后修饰、蛋白质之间相互作用网络进行分析。[结果]人SGTA基因有5种可变剪接产物,编码区存在78个SNP位点,其中错义突变31个,无义突变1个。人SGTA蛋白由313个氨基酸组成,是稳定性不高的亲水蛋白,α-螺旋是其主要二级结构元件,属于TRP超家族,预测有3个磷酸化激酶修饰位点和数个潜在泛素化修饰位点。与SGTA存在相互作用的基因和蛋白多数与维持体内蛋白质稳定的分子伴侣功能相关。[结论]SGTA基因及其蛋白的生物信息学分析为进一步实验研究其在肿瘤形成和发展中的地位及调控机制奠定了基础。

冬凌草甲素对小鼠溃疡性结肠炎内质网应激的作用研究

目的探讨冬凌草甲素对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的结肠上皮组织内质网应激(ERS)的影响。方法利用葡聚糖硫酸钠(DSS)建立小鼠UC模型组,设置冬凌草甲素及柳氮磺胺吡啶干预组;测定疾病活动指数(DAI),对结肠组织进行病理形态学评分(HPS),RT-qPCR检测结肠上皮组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子EBP同源蛋白(CHOP)、激活性转录因子6(ATF6)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及肌醇酶1α(IRE1α)mRNA表达变化。结果与健康小鼠相比,模型组结肠上皮组织中TNF-α、IL-6、COX-2、GRP78、ATF6、CHOP、PERK及IRE1αmRNA表达均明显上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,冬凌草甲素干预组DAI与HPS均明显下降(P<0.05,P<0.01),疗效与柳氮磺胺吡啶干预组相当(P>0.05,P<0.01),除IER1αmRNA外,TNF-α、IL-6、COX-2、GRP78、CHOP、ATF6及PERK mRNA表达水平均明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论冬凌草甲素能减轻DSS诱导小鼠结肠炎症,其机制可能与其调节结肠上皮组织ERS有关。