过表达/干扰表达miR-122对HBV稳转优势单克隆株HepGA14表达功能的影响

目的:采用miR-122过表达/干扰表达慢病毒质粒干预HBV稳转优势单克隆株HepGA14,观察其乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝病毒DNA(HBV DNA)表达功能的变化。方法:构建miR-122过表达和干扰表达慢病毒质粒,以最佳感染复数MOI值侵染HBV全基因组1.3倍体HBV稳转优势单克隆株HepGA14(对照组),分别命名为HepGA14-VL1044(miR122过表达组)和HepGA14-VL1043(miR122干扰组)。qPCR检测HepG2和HepGA14中的中miR-122的表达情况。ELISA分别检测3组细胞中上清HBsAg和HBeAg表达量,qPCR检测3组细胞的HBV DNA和miR-122表达水平。结果:最佳MOI值为30。与对照组比较,过表达miR-122慢病毒质粒侵染HepGA14后可上调优势细胞株内miR-122表达量,下调HBV DNA复制活性及HBsAg、HBeAg的表达量;干扰miR-122表达后,可上调HepGA14的HBV DNA复制活性及HBsAg、HBeAg的表达量,差异均有统计学意义(均P<0.0001)。结论:成功构建miR-122慢病毒过表达/干扰载体,并建立稳定过表达/干扰miR-122的HepGA14细胞系;miR-122可调控HBsAg、HBeAg、HBV-DNA的表达水平。

水飞蓟素治疗药物性肝损伤的“药效—靶标”作用网络分析

目的:通过网络系统药理学筛选并探讨水飞蓟素治疗药物性肝损伤的药效靶点,以期为临床的精准治疗提供参考。方法:通过TCMSP与CTD数据库获取水飞蓟素靶点对应的基因;从GEO、GeneCards以及OMIM数据库获得药物性肝损伤的疾病基因,与水飞蓟素的靶点基因取交集,筛出药效靶点,运用Cytoscape软件和String数据库制成“成分—靶点”网络及PPI网络图。运用R语言中的clusterProfiler包对药效靶点进行GO及KEGG富集分析;运行Autodock vina软件对药效靶点进行分子对接。结果:筛选得到交集基因112个,STAT3、TNF、RELA等为主要作用靶点。GO/KEGG富集分析共获得涉及免疫炎症反应、肝脏代谢、氧化应激等的生物过程和相关通路。分子对接显示药效靶点与水飞蓟素能良好结合。结论:水飞蓟素可能通过STAT3、TNF、RELA等多个炎症靶标调控参与多条肝脏代谢通路,从而发挥其抗药物性肝损伤的作用。