葡萄球菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制研究

目的 了解临床分离凝固酶阳性和阴性葡萄球菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法 应用 PCR-RFL P、PCR- SSCP技术及利血平逆转实验 ,检测 gyr A基因的突变及 nor A基因的表达。结果 40株凝固酶阳性(70 .2 %)和 2 8株凝固酶阴性葡萄球菌 (77.8%)检出 gyr A基因 84位点突变 ;4株未检测出 84位点突变的菌株SSCP带型与标准菌株 SA42和 SA 42 R均不同 ;利血平逆转实验发现 88%的凝固酶阳性和 72 %凝固酶阴性葡萄球菌存在 nor A耐药表型 ;36株凝固酶阳性和 2 0株凝固酶阴性葡萄球菌涉及两种耐药机制。结论 gyr A基因 84位点突变可能是喹诺酮类药物靶位耐药的重要途径之一 ,其他位点突变也可能存在 ;多数临床耐药分离株靶位改变和膜耐药双重耐药机制共存。

临床分离耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶基因bla_(IMP-1)、bla_(VIM)的PCR检测

目的:研究与产生金属酶相关的绿脓杆菌耐亚胺培南的耐药机制。方法:建立检测绿脓杆菌编码金属酶的基因blaIMP-l和blaVIM的PCR方法,探讨临床分离的旧株耐亚胺培南的绿脓杆菌中产生金属酶与耐药的关系结果:1株菌blaIMP-l扩增阳性,6株菌blaVIM扩增阳性,11株菌blaIMP-l和blaVIM扩增均阴性。结论:产生金属酶是绿脓杆菌对亚胺培南耐药的重要机制之一。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床株的耐药谱分析

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)分布广泛,生存条件简单,是目前医院内感染的主要病原菌.具有对多种化学结构完全各异的抗菌药物固有耐药,及对原本敏感的药物容易出现耐药的特点,仅有限的抗生素可供选用.重症感染患者病死率相对较高,已成为临床治疗的一大难题.亚胺培南是治疗假单胞菌感染活性最强的药物之一,但随着临床的广泛应用,耐亚胺培南菌株开始出现并日益增多,严重限制了亚胺培南的应用.本研究采用药敏纸片法筛选天津地区近期临床分离的铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株,测定18株耐药菌对其它7种常用抗假单胞菌抗生素的耐药状况,为临床医生选用敏感有效抗生素提供参考.

应用聚合酶链反应检测临床分离的产TSST-1金黄色葡萄球菌

中毒休克综合征(TSS)是由产毒素金黄色葡萄球菌引起的累及多器官系统的严重临床综合征。中毒休克综合征毒素1(TSST-1)在TSS发病中起重要作用。本研究应用聚合酶链反应技术,对产毒素金黄色葡萄球菌染色体编码TSST-1的tst基因进行体外扩增,建立了快速、特异、灵敏的检测产TSST-1金葡菌的方法。本研究还对天津市1986～1995年10年间临床分离的金葡菌进行了tst基因检测,在112株受检菌中,tst基因阳性株占20.5％(23/112)。结果提示,为避免TSS发生,对金葡菌感染应给予彻底治疗,特别是对免疫功能低下者。

产ESBLs大肠埃希氏菌临床株EC98A7表型和基因型研究

目的 研究大肠埃希氏菌多重耐药临床菌株EC98A7对超广谱β 内酰胺类抗生素的耐药机制。方法 采用K B法、双纸片协同试验、接合传递试验、质粒谱分析、PCR、PCR RFLP和DNA序列分析等方法分析EC98A7的表型及基因型。结果 EC98A7对头孢他啶等第三代头孢菌素和庆大霉素等抗生素高度耐药 ,并能将全部耐药表型通过一个大小约 80kb的质粒传递给受体株。双纸片协同试验证明EC98A7产ESBLs。PCR等证实EC98A7含有TEM型和CTX M型ESBLs。PCR RFLP显示TEM型ESBL含有E10 4K突变 ,无R16 4H突变。同源性分析表明 5 0 3bp的blaCTX M DNA片段与CTX M亚组 1同一性最高 ,与blaCTX M 3 相比仅有 1个核苷酸改变即A787G ,对应氨基酸改变为D2 39G。结论 大肠埃希氏菌多重耐药临床株EC98A7同时产TEM型及CTX M型两种ESBLs ,推测这与对超广谱 β 内酰胺类抗生素的高度耐药有关。

逆转录病毒介导的牛生长激素基因转染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞

目的:以牛生长激素(bGH)为模型,建立逆转录病毒载体转移系统,体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS,以获得bGH表达。方法:将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLG-MDR相应酶切位点,获得的重组逆转录病毒质粒。应用脂质体方法转染重组质粒进入包装细胞PA317,筛选长春新碱抗性克隆株,收集上清液感染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞2BS,筛选携带bGH基因的成纤维细胞的克隆株3T3/bGH和2BS/bGH。结果:RT-PCR分析表明基因转染组的3T3/bGH细胞和2BS/bGH细胞在相当于680bp处有一清晰的条带,而空质粒对照组无相应条带出现。RIA分析表明转染基因细胞的培养液及胞浆蛋白有bGH蛋白表达,而作为对照的3T3/mdr细胞和NIH/3T3细胞均无此蛋白表达。结论:应用逆转录病毒IRBS载体系统转染bGH基因进入成纤维细胞,该系统易筛选,转染效率较高。

临床分离耐氟喹诺酮金黄色葡萄球菌的耐药机制研究

为了解临床分离金黄色葡萄球菌（金葡菌）对氟喹诺酮类药物的耐药机制。应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲＲＦＬＰ）分析和ＰＣＲ单链构象多态分析（ＳＳＣＰ）技术及利血平逆转实验，分别检测３１株临床分离耐环丙沙星（ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ）金葡菌株ｇｙｒＡ基因的突变及ｎｏｒＡ基因的表达。结果表明，３１株菌中有２２株检出ｇｙｒＡ基因８４位点突变，有２８株在利血平逆转实验中对环丙沙星和诺氟沙星的ＭＩＣ同时降低，表明存在ｎｏｒＡ耐药表型。同时涉及以上两种耐药机制的至少有２０株。结果提示：临床分离的耐药菌株耐氟喹诺酮机制大多同时涉及药物作用的靶位改变和细菌的膜耐药，即双重耐药机制共存。

革兰阴性杆菌对抗生素敏感性及产β-内酰胺酶的研究

目的了解常见菌对常用抗生素的敏感性及产β－内酰胺酶的情况。方法采用微量肉汤稀释及纸片法测定了１９７株革兰阴性杆菌对１４种抗生素的敏感性，并进行了β－内酰胺酶的研究。结果１９７株革兰阴性杆菌对１４种抗生素的敏感率为：伊米配能－西司他丁９８％，丁胺卡那霉素９０％，头孢他啶８９％，头孢哌酮－舒巴坦８８％，头孢哌酮８６％，妥布霉素８１％，其余均＜８０％。细菌产β－内酰胺酶的检出率，大肠杆菌为５４％；绿脓杆菌为４２％，克雷白菌属为２９％，其余细菌均＜２０％。此外，还发现４株菌产生了能水解第三代头孢菌素的酶。结论伊米配能－西司他丁、丁胺卡那霉素、头孢他啶及头孢哌酮－舒巴坦的抗菌活性最强，覆盖率最广。产酶株主要分布在大肠杆菌和绿脓杆菌。