基于迁移芯片木蝴蝶总黄酮类对肝癌细胞迁移的影响研究

目的研究木蝴蝶总黄酮体外抑制肝肿瘤细胞迁移作用及其可能的作用机制。方法应用微流控芯片技术开展木蝴蝶总黄酮对肝癌细胞迁移的影响研究,采用RT-PCR、Western blot法检测木蝴蝶总黄酮对肝癌细胞相关基因和蛋白质表达的影响。结果微流控芯片结果显示,木蝴蝶总黄酮对肝癌细胞24 h相对迁移率为16.59%,48 h相对迁移率为8.06%;RT-PCR和Western blot结果表明,木蝴蝶总黄酮能降低p38 mRNA和蛋白质的表达(P<0.05),能降低p-p38蛋白质的表达(P<0.01)。结论木蝴蝶总黄酮在体外具有显著抑制肿瘤细胞迁移的作用,其作用机制可能与减少p-p38蛋白质的表达,即减少p38蛋白的活化有关。

基于PI3K/PTEN/VEGF的菟丝子总黄酮抗肝癌作用机制研究

目的:基于PI3K/PTEN/VEGF通路探讨菟丝子总黄酮(TF)体外抗肿瘤作用机制,考察合适的给药浓度,为菟丝子药材的临床合理应用提供参考。方法:以人肝癌细胞HepG2为实验对象,CCK-8法检测TF给药后的细胞活性,计算其IC50值;Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡坏死比例;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、人类第十号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA的相对表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子受体2、3(VEGFR-2、VEGFR-3)表达变化趋势。结果:相对阴性对照组,给药组细胞抑制率和凋亡率均具有良好的量-效正相关;qPCR结果显示TF给药可以显著的上调PTEN mRNA,下调PI3K、VEGF mRNA;ELISA结果显示HIF-1α、VEGFR-2、VEGFR-3蛋白的表达在给药后均有下降(P<0.01)。结论:菟丝子总黄酮有较好的体外抗肝癌药效,其作用可能与上调PTEN的表达对PI3K-Akt通路进行负调控诱导细胞发生凋亡、下调HIF-1α以及VEGF相关基因和受体蛋白的表达等作用机制共同发挥抗肿瘤作用。

基于人肝癌细胞系SMMC-7721的三维培养条件研究

目的基于人肝癌细胞系SMMC-7721考察合适的海藻酸钠、氯化钙浓度,形成良好的海藻酸钙凝胶,优选三维条件下肿瘤细胞的培养条件。方法在96孔板中培养SMMC-7721细胞,基于L9(34)正交表设计实验,以MTT法检测并计算氯化钙溶液、柠檬酸钠溶液不同浓度与作用时间下的细胞存活率;结合正交优选结果,考察适宜的海藻酸钠浓度,筛选适合的成胶、溶胶条件,并在三维培养模式下进行细胞活力确证。结果最佳凝胶应用条件为1%氯化钙溶液与1%海藻酸钠溶液作用15 min内用于成胶,10%柠檬酸钠溶液作用凝胶10 min内用于溶胶,MTT法检测细胞存活率为94.97%。该三维培养条件下的肝癌细胞72 h内生长状态良好,存活率可达92.10%,细胞堆积紧密,出现肿瘤细胞球样聚集体。结论本实验筛选出适合肿瘤细胞三维培养的成胶、溶胶条件。在该条件下培养肝癌细胞SMMC-7721,细胞生长状态良好,且细胞生长与聚集形态与传统二维培养存在差异,更接近细胞体内生存环境。基于该方法进行肿瘤细胞三维培养,可为深入研究肿瘤细胞生长状态,为抗肿瘤药物筛选提供更有利的方式。