储存的血小板中血小板微粒的获取及其止凝血功能研究

目的从储存的手工浓缩血小板中获得具有止血功能的血小板微粒(PMP)。方法流式细胞仪检测常规储存1、3、5、7、9、11 d浓缩血小板中PMP的含量;2 500 g离心30 min处理浓缩血小板,下层血小板沉淀用于检测离心剪切力对血小板CD62p及磷脂酰丝氨酸(PS)表达的影响,上层液离心获得PMP,流式细胞术及荧光底物法等分析评价所获取PMP颗粒的理化性质和生理功能,包括颗粒大小、表面蛋白受体和PS、凝血酶生成能力。结果常规储存9 d的浓缩血小板中PMP含量(2.51±0.47)%较储存1 d的(1.79±0.29)%明显增加(P<0.05);离心剪切力对储存>8 d的血小板CD62p及PS的表达无明显影响;离心获得储存9 d浓缩血小板中的PMP直径为(619.81±196.15)nm,表面含有GPⅠb(CD42b)、GPⅡb-Ⅲa(CD41/CD61)、P-选择素(CD62p)及PS;凝血酶生成试验证实PMP促进凝血酶生成的能力:总蛋白含量分别为0.1、0.4、0.8 mg/m L的PMP溶液对应的TTP值(min)分别为68.4±4.6、45.8±2.7、38.8±3.4,均明显低于对照组80.0±2.8(P<0.05)。结论储存9 d的浓缩血小板释放的PMP明显增加;通过离心方法可直接获这一储存时间段的PMP;所获得的PMP表面保留了与止凝血功能相关的糖蛋白和PS,初步表现出止血功能。

血小板微粒的形成、清除及主要功能的研究进展

血液中的微粒（microparticles,MP）是由不同的细胞（包括血小板、红细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和内皮细胞等）脱落而成,几乎所有的真核细胞在受到刺激或凋亡后都会产生微粒。血小板微粒（platelet-derived microparticles,PMP）是血液中微粒的最主要来源,在非疾病的状态下占循环微粒总量的70%-90%。