敖汉细毛羊Hoxa7基因表达载体的构建及在成纤维细胞中的表达

为了构建敖汉细毛羊Hoxa7基因表达载体以及研究表达载体转染成纤维细胞后基因表达量的变化,试验从40日龄敖汉细毛羊肩部皮肤提取RNA并反转录成cDNA,参照GenBank中Hoxa7基因的CDS区序列设计1对引物;将PCR扩增获取的Hoxa7基因CDS片段连接到pEASYTM-T1载体上,构建pEASYTM-T1-Hoxa7克隆载体,将克隆载体转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中;从pEASYTM-T1载体上切下Hoxa7基因片段,连接到pcDNA3.1表达载体上,再次转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中;将重组表达载体pcDNA3.1-Hoxa7瞬时转染到传代的成纤维细胞中,利用实时荧光定量PCR技术、Western-blot方法检测成纤维细胞中Hoxa7基因的mRNA和蛋白表达情况。结果表明:重组表达载体pcDNA3.1-Hoxa7构建成功;瞬时转染到成纤维细胞中后, Hoxa7基因的mRNA和蛋白表达量均极显著升高(P<0.01)。说明敖汉细毛羊Hoxa7基因在成纤维细胞中能够高效表达。

鲁莱黑猪MYH3基因外显子突变搜寻及其与肌内脂肪的关联分析

本实验旨在鲁莱黑猪群体中检测已报道的MYH3功能性突变的基因型频率分布,并分析该突变和MYH3基因外显子突变与肌内脂肪含量的关联性,为鲁莱黑猪肉品质的分子选育提供科学依据。利用PCRRFLP技术,对鲁莱黑猪MYH3功能性突变位点(XM_013981330.2:g.-1805_-1810del,chr12:55373707)进行基因分型。同时对MYH3基因外显子进行测序,搜寻外显子突变位点,对外显子突变位点进行有害性预测和保守位点分析。采用SNaPshot分型技术检测上述突变位点在鲁莱黑猪群体中的基因型,进一步分析MYH3功能性突变位点和外显子突变位点与肌内脂肪含量的关联性。结果表明:在鲁莱黑猪中检测到MYH3功能性突变位点存在分离,其基因型频率分别为0.098(qq)、0.143(QQ)、0.759(Qq)。关联分析显示:在鲁莱黑猪群体中MYH3功能性突变与肌内脂肪无显著性关联;外显子突变位点与肌内脂肪也无显著性关联,仅与体重有关联。已报道的MYH3功能性突变可能不是影响该鲁莱黑猪群体肌内脂肪的因果位点,不能作为该群体肉质性状选育的分子标记。同时,MYH3基因外显子突变也与肌内脂肪无关联性,提示可能存在别的突变位点调控鲁莱黑猪肌内脂肪的含量。

猪E2F3基因3′UTR双荧光素酶报告基因质粒构建及其与miR-10a-5p的靶向验证

为了鉴定miR-10a-5p与猪E2F3基因的靶向关系,试验从生物信息miRNA Base数据库查询miR-10a-5p的相关信息,并运用MEGA 6.0软件分析其保守性,通过Target Scan生物信息学网站预测其潜在的靶基因及结合位点,然后PCR扩增E2F3基因3′非编码区(3′UTR)片段,构建E2F3的野生型(E2F3-3′UTR-wt)和突变型(E2F3-3′UTR-mut)双荧光素酶报告基因质粒,并分别与miR-10a-5p mimics、mimics NC共转染至293T细胞中,检测双荧光素酶活性变化。结果表明:miR-10a-5p在7个物种间具有高度保守性,成熟序列均为UACCCUGUAGAUCCGAAUUUGU;Target Scan生物信息学网站预测到miR-10a-5p具有包括E2F3基因在内的共241个潜在的靶基因;E2F3基因片段经PCR扩增获得大小约1 288 bp的清晰条带,测序结果与预期一致;转染miR-10a-5p mimics能显著降低猪E2F3基因野生型质粒双荧光素酶活性(P<0.05)。说明猪E2F3基因3′UTR双荧光素酶报告基因质粒构建成功,且其与miR-10a-5p之间存在靶向关系。

鲁莱黑猪线粒体基因突变鉴别及其与生长和肉质性状的关联分析

本研究旨在搜寻鲁莱黑猪线粒体基因的遗传突变位点,并分析其与背膘厚度、肌内脂肪含量和背最长肌肌肉水分含量的关联程度,从而为鲁莱黑猪的分子标记辅助育种提供新的理论支撑。实验以433头鲁莱黑猪为研究对象,测定统计了该群体的背中线肩部最厚处背膘厚、胸腰椎结合处背膘厚、腰荐椎结合处背膘厚、背最长肌肌肉水分含量和肌内脂肪含量的表型数据。选取4组表型差异较大的个体进行线粒体基因测序,搜寻mtDNA上的突变位点。对上述突变进行有害性预测和保守性分析等生物学信息分析,筛选出最有可能影响生长和肉质性状的突变位点,并在鲁莱黑猪群体中检测基因型,开展与上述测定表型的关联分析。结果表明,在鲁莱黑猪群体中共检测到11个mtDNA突变位点,包含9个基因内突变和2个D-loop区突变。生物信息学分析提示有3个突变位点(mt_9130、mt_9648、mt_13751)可能会影响鲁莱黑猪生长和肉质性状。关联分析结果显示,突变位点mt_9130和mt_9648与肌内脂肪含量极显著关联、与背最长肌肌肉水分含量显著关联;突变位点mt_13751仅与胸腰椎结合处背膘厚极显著关联。本实验结果揭示了在鲁莱黑猪群体中,线粒体基因上的突变与生长和肉质性状存在显著关联,为研究线粒体基因对相关表型的遗传效应提供参考,同时为鲁莱黑猪的育种开发了新的分子标记来源。

企业产品技术研发博弈分析——综合先动优势和后动优势

企业的技术研发决定着企业未来发展的高度,但企业进行技术研发不一定能给企业带来预期的收益,本文从先动优势和后动优势的角度出发构建博弈模型,分析两家生产同质产品的竞争企业之间技术研发的均衡状态,以分析企业的技术研策略及政府措施。