自组装多肽凝胶的构建及其在肝实质创伤性出血中的止血应用研究

目的制备FLIVIGSII多肽(FI肽),探究其物理化学性质及其体外凝血和体内止血效应。方法将FI肽与水混合,制备样品,直接观察FI肽水凝胶的状态,通过扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)、透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察其微观纤维结构,并通过动态光散射(dynamic light scattering,DLS)分析其纤维尺寸。将FI肽与3.8%柠檬酸钠抗凝处理后的健康人血液混合,直接观察FI肽的凝血效应,并通过SEM观察其血凝块的微观结构。溶血实验和CCK-8细胞毒性实验用于验证其生物相容性。最后,构建大鼠肝脏实质穿孔出血模型,将15只体质量为150 g的6~8周龄雌性SD大鼠按随机数字表法分为3组:对照组、FI肽组和纤维蛋白胶组,通过各组治疗后观察分析FI肽对肝脏实质创伤性出血的止血效应及其预后,并探讨其止血机理。结果成功制备FI肽。FI肽与血液接触后快速成胶,使血液凝固形成血凝块。SEM结果显示FI肽与水混合后自组装形成纤维网状水凝胶。TEM结果验证FI肽在水中成胶后形成直径为(13.70±2.31)nm的纳米纤维,DLS结果验证其在水中形成多分散多尺寸(148.2~208.0 nm或575.0~807.0 nm)的纳米纤维。FI肽与血液混合后形成的纤维网状水凝胶包裹住红细胞,从而形成物理性止血屏障以在数秒内实现凝血。同时,FI肽水凝胶对正常肝细胞(L-O2)无细胞毒性,且不会造成红细胞溶血。在SD大鼠体内肝脏止血实验中,FI肽与血液接触时,迅速形成纳米纤维水凝胶,从而形成物理性止血屏障以在数秒内实现体内止血(止血时间<5 s)。结论FI肽具有快速、高效的止血效应,在肝脏实质创伤性出血的止血治疗中具有较好的临床应用前景。

两种分析miRNA相对表达量方法的比较研究

目的基于实时反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)基因表达相对定量的分析方法:GenEx软件分析与2(-ΔΔCT)法,建立一种简便、准确的miRNA相对定量方法。方法以HK-2细胞系cDNA为模板,进行PCR扩增,确定最佳退火温度;再倍比稀释该模板,用荧光定量PCR测定的Ct值作miR-122和miR-16的标准曲线,计算出相应miRNA的扩增效率。用荧光定量PCR测定健康者和乙型肝炎患者血清中内参miR-16和靶基因miR-122的表达,分别采用GenEx软件分析与2(-ΔΔCT)法来评价相对表达量。结果系列稀释法制作的标准曲线呈现较好的线性相关性,两种miRNA的标准曲线r2值均为0.999,miR-16的扩增效率为97%,miR-122扩增效率为107%。2(-ΔΔCT)法分析乙型肝炎患者血清中miR-122的表达较健康者增高了44.3倍,而GenEx软件分析为54.1倍。结论GenEx软件分析考虑了更多的影响因素,其结果比2(-ΔΔCT)法更可靠,适用于临床分析。