纳米氯化银/壳聚糖抗菌敷料的制备及功能评价

以壳聚糖纤维为基底材料,经表面处理,采用硝酸银多步浸渍和快速氯化反应的方法,制备均匀嵌合纳米氯化银颗粒的壳聚糖纤维复合抗菌敷料。银负载量小于60mg/10＊10cm2时,壳聚糖纤维表面可观察到均匀的氯化银纳米粒子,粒径分布20～80nm。氯化银纳米粒子结构和抑菌性具良好的稳定性,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的抑菌率均可达到99.99%。氯化银纳米粒子在经预处理的壳聚糖纤维表面具有良好的固着性。纳米氯化银/壳聚糖纤维供试样品对深二度烧伤伤口愈合没有不良作用,相对于生理盐水/纱布和磺胺吡啶银/纱布对照组,供试样品组的愈合率更高。本研究成果为新型氯化银抗菌敷料研发提供了重要依据。

影响壳聚糖-胶原蛋白冻干海绵敷料结构、性能的因素

壳聚糖-胶原复合敷料具有良好的生物相容性、抗菌性和促进表皮细胞生长等特性,可作为深二度烧伤敷料。通过冷冻干燥法制得的海绵敷料的外观、内部结构、吸水率、舒适性等性能取决于制备条件,其中预冻步骤最为关键。本工作探讨了-70℃、-40℃、-20℃的三种预冻条件对冻干产品外观和内部结构的影响,同时考察不同物料浓度（2.0~3.5%）和不同壳聚糖/胶原蛋白比例（2/1、1/1、1/2）时海绵敷料性能,实验表明,-40℃预冻30min,物料浓度2.5%,壳聚糖/胶原蛋白比例2/1,所制得的海绵敷料外观工整,内部孔结构均匀,且具有良好的结构稳定性、吸水性和舒适性。红外光谱分析表明,壳聚糖-胶原蛋白冻干海绵由于氢键交联作用,使冻干产品不同于原材料壳聚糖或胶原蛋白,冻干产品具有更牢固的组织结构。

高速逆流色谱法分离纯化红曲色素组分

采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化红曲发酵产品中6种Azaphilone类色素组分。筛选弱极性分离溶剂系统正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水,研究6种色素组分在不同溶剂体系中的分配系数,建立两步逆流萃取分离的技术路线。经过HPCCC分离纯化和丙酮结晶操作,得到6种高纯度的Azaphilone类色素组分,纯度均大于98.5%,得率达到81.40%～84.78%,所得的6种色素组分的摩尔吸光系数分别为13313、13877、9380、9360、25621、25849L/(mol·cm)。本研究可提供一种新型的制备高纯度红曲Azaphilone类色素组分的技术路线。

鱿鱼加工副产物高值化综合利用综述

近年来,国内鱿鱼加工产业快速发展,其副产物占据着很大的比重,对这些副产物的加工和利用越来越引起关注。鱿鱼加工副产物包括鱿鱼皮、内脏、鱼眼、墨汁、精巢、软骨等,对鱿鱼加工过程中副产物进行回收利用,不仅提高鱿鱼的经济价值,还可以减少副产物引起的环境污染。本文分别介绍了鱿鱼皮、墨汁、精巢和软骨的组成特性、提取以及利用情况,总结了近年来国内外利用鱿鱼副产物为原料开发胶原蛋白、鱼精蛋白、软骨素等一系列生化制品的研发状况,并提出了以复合蛋白酶酶解鱿鱼皮制备小分子胶原寡肽和以酶水解-膜分离组合工艺生产软骨素、骨胶原蛋白的综合利用新工艺的技术特点,最后展望了鱿鱼加工副产物的高值化综合利用前景和发展趋势。

抗OmpW单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:制备抗副溶血弧菌OmpW的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法:利用生物信息学方法分析多种病原弧菌的OmpW氨基酸序列,原核表达并纯化制备r-OmpW。以r-OmpW作为免疫抗原制备鼠mAb,以五种病原弧菌为筛选抗原。采用Western blot、流式细胞术(FCM)、间接ELISA法鉴定mAb的特性。结果:生物信息学分析表明OmpW是弧菌内高度保守的外膜蛋白。成功筛选到3株杂交瘤细胞株,其中,杂交瘤细胞株S5C10分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG3,腹水mAb效价达4.6×104。该mAb同时识别副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌和创伤弧菌,而与荧光假单胞菌、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌及大肠杆菌无明显的交叉反应。结论:制备的mAb可特异性识别上述5种病原弧菌,为进一步建立广谱弧菌的免疫学检测方法提供了工具。

高特异性抗桔霉素单克隆抗体的制备及鉴定

以1,4-丁二醇二缩水甘油醚(双环氧试剂)为偶联剂,合成桔霉素-蛋白偶联抗原CIT-BSA,将偶联抗原免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,应用有限稀释法进行筛选,经过克隆化后筛选到一株稳定分泌抗桔霉素抗体的杂交瘤细胞株H2-F8.该单克隆抗体经过初步鉴定,抗体类型为IgM类,抗体的相对亲和力为4.17×108L/mol,单抗与黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮等毒素的交叉反应率均低于0.1%,与红曲色素中的橙色素和红色素的交叉反应率均低于0.01%.在此基础上建立了间接竞争ELISA检测方法,线性范围为0.05～1.0μg/L,IC50值为0.3μg/L.结果为快速检测桔霉素的酶联免疫检测方法的建立和检测试剂盒的研制提供技术依据.

红曲霉菌液相培养高产色素低产桔霉素的代谢调控研究

从8株固态发酵高产红曲色素菌株中筛选出一株适合于液相培养工艺的高产红曲色素菌株FL1,并对其液相培养过程特性及高产色素低产桔霉素的代谢调控策略进行了研究。发酵过程动力学研究结果表明,红曲色素与桔霉素作为次级代谢产物,其合成与红曲霉菌生长的关系属于非生长偶联型。本文首次采用连续补料的Fed-Batch培养技术,用于红曲霉菌的液相培养。在初期菌体生长阶段,红曲霉菌的最大比生长速率μ_m达到0.21h^(-1);中后期通过连续补加糖液,可将还原糖浓度控制在5～10g/L,从而将μ控制在合适范围(0.02h^(-1))。补料培养工艺有效的延长了红曲霉菌合成色素的时间,大大提高了色素产量。红曲霉菌的Fed-Batch培养过程可控性强,重复性良好,平均色素得率和时空得率高达5400U/g淀粉和5625U/(h·L),显著高于目前国内外已报道的红曲霉菌液相发酵水平。

工程教育专业认证背景下制药工程专业实验课程改革

制药工程专业实验是制药工程专业人才培养过程中的重要实践环节。过去制药工程专业实验不足以支撑学生毕业能力的达成,近3年来基于工程教育专业认证的理念和要求,对制药工程专业实验课程内容和教学平台进行重新设计和建设并付诸实践。改革后的制药工程专业实验课程符合工程教育专业认证的要求,能促进学生多项毕业能力的达成,能培养学生解决复杂工程问题的能力,可为国内高校同专业实验教学提供有益借鉴。

基于成果导向的制药工程专业实验教学改革实践

现有的制药工程专业实验"照方抓药"和"按部就班"教学模式及单一的评价模式,影响了学生毕业要求的达成。针对此问题,该文以芦丁水解制槲皮素实验为例,提出在制药工程专业实验中实行成果导向教学。首先从支撑毕业要求达成出发确定学习目标和学习内容,再以学生为中心进行研究性学习,并以过程评价与实验报告相结合的方式进行综合评价。实践结果表明,改革后的实验教学对促进学生达成毕业要求作用显著。

制药工程专业生物化学实验课程的建设与探索

生物化学实验是制药工程专业重要的专业课程之一,但在传统教学中,实验课程仅简单作为理论课程教学的补充,存在实验内容陈旧、教学方法单一、师资力量不足等问题。为了培养适应21世纪社会发展的复合型人才,近年来尝试从更新教学内容体系、在教学中引入科研课题、改进评估方法、拓展课外开放性实验、加强师资队伍建设等方面进行改革探索并取得一定成效,学生在参与科研综合训练项目、学科竞赛及大学生创新创业比赛等方面获得明显进步。

基于成果导向教育的制药工艺学教学改革探索

制药工艺学是制药工程专业一门重要的专业核心课程。针对传统的制药工艺学教学和考核方式难以促进学生毕业能力的达成,按照工程教育专业认证的成果导向教学理念,提出在制药工艺学教学中引入撰写化学类新药合成工艺进展性论文的研究性学习。通过对该研究性学习的学习内容、教师与学生的互动以及考核方式的精心组织与实施,取得了良好的实践效果。该研究性学习可对工程认证标准中的多项毕业要求进行支撑并促进学生毕业能力的提升。

基于毕业能力培养的制药分离工程教学改革探索

制药分离工程是制药工程专业一门重要的专业核心课程。针对传统的制药分离工程教学和考核方式难以促进学生毕业能力的达成,按照工程教育专业认证的成果导向教学理念,提出在制药分离工程的教学中引入"家乡特色资源有效成分的提取与分离纯化"的研究性学习模式。该研究性学习可对工程认证标准中的多项毕业能力进行支撑。通过对该研究性学习的精心组织与实施,取得了预期的实践效果。

红曲橙色素对人胃腺癌细胞AGS诱导凋亡的作用

经分离纯化获得红曲霉发酵产品中的一种橙色素,通过HPLC-MS和NMR检测,确认为Monascorubrin,分子组成为C23H26O5.体外实验表明,该色素组分能有效抑制人胃癌细胞AGS的增殖,IC50值为7.98±0.71μmol·L-1.5μmol·L-1药物处理24h,93.70%AGS细胞进入凋亡前期.细胞凋亡程度与药物浓度呈正相关关系.该色素组分对AGS细胞生长抑制效果显著优于紫杉醇(P<0.01),且对人正常胃上皮细胞(GES-1)的毒性作用较紫杉醇小(P<0.05).

鱼蛋白胨的制备与质量分析

目的制备鱼蛋白胨,并进行质量分析。方法将鱼糜加工下脚料原料经绞碎、石油醚脱脂,得到鱼糜浆,用0.1%木瓜蛋白酶酶解,离心收集上清(即鱼水解蛋白胨溶液),经300 Da纳滤膜脱盐和浓缩,喷雾干燥后,获得淡黄色粉末,即鱼蛋白胨样品FZU01。对鱼蛋白胨FZU01和鱼粉蛋白的主要理化指标(澄明度、亚硝酸盐和碱性沉淀、酸碱度、含氮量、氨基氮、干燥失重、炽灼残渣)进行检测;在固定酵母提取物、Na Cl浓度、初始p H和接种量的基础上,分别用两种蛋白胨配制LB培养基,接种大肠埃希菌,检测A600值;采用分子筛高效液相色谱法(size-exclusion highperformance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测两种蛋白胨的相对分子质量。分别将50、150、300、600、900、1 200和1 500 mg/L组胺以及0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0和50.0 mg/L重金属离子(Hg2+、Cd2+、As3+、Cr6+和Pb2+)加至大肠埃希菌中,37℃培养12 h,检测A600值。结果两种蛋白胨理化指标检测结果均符合《中国生物制品主要原辅材料质控标准》规定,酸碱度、含氮量、氨基氮、干燥失重和炽灼残渣之间差异无统计学意义(P>0.05),鱼蛋白胨FZU01相对分子质量主要分布在1 000以内,占92.5%,鱼粉蛋白胨相对分子质量主要分布在10 000,小于1 000占56.1%;与鱼粉蛋白胨组相比,鱼蛋白胨FZU01组生长速率明显增加(P<0.05)。随着组胺浓度的增加,大肠埃希菌的生长抑制率逐渐增加,与组胺浓度呈正相关,IC50为257.3 mg/L,当组胺浓度大于600 mg/L时,完全抑制大肠埃希菌的生长;大肠埃希菌的生长抑制率与重金属离子浓度呈正相关,Hg^(2+)、Cd^(2+)、As^(3+)、Cr^(6+)和Pb^(2+)对大肠埃希菌的IC50分别为1.35、4.67、7.37、11.04和20.19 mg/L。结论应增加蛋白质相对分子质量、组胺和重金属作为蛋白胨产品重要质量参数,控制一定的浓度限量范围,才能保证蛋白胨产品的稳定性和安全性。

弧菌广谱性外膜蛋白抗原筛选及其单抗的交叉免疫原性研究

采用生物信息学方法分析几种病原性弧菌OmpK、OmpU和OmpW蛋白种间和种内的同源性,筛选高保守性蛋白OmpW.成功构建具备稳定分泌抗体IgG3的细胞株S5C10,鉴定其对5种弧菌具有特异性交叉免疫反应,而对9种非弧菌无免疫反应.研究结果显示OmpW可作为广谱性疫苗成分,其单抗可特异性检测多元弧菌.

氨基酸改性熊果酸衍生物的合成及对胃癌细胞的抑制作用

目的合成具有伯氨基的氨基酸改性熊果酸衍生物并研究其对胃癌细胞的体外抑制活性及作用机制。方法以乙二胺为连接臂,采用多种氨基酸对熊果酸C28位进行接合修饰,合成一系列氨基酸改性熊果酸衍生物。MTT法考察对胃癌细胞株BGC-823、AGS的体外抑制活性,同时采用Annexin V/PI双标记染色及细胞周期检测探讨其抗癌机制。结果大部分衍生物对BGC-823、AGS的抑制活性强于熊果酸;Annexin V/PI双染色结果表明化合物3和4可诱导BGC-823发生凋亡;细胞周期检测表明衍生物3～6可诱导AGS发生凋亡,凋亡率达44.69%～92.64%。结论带有伯氨基的氨基酸改性熊果酸衍生物具有良好的抗癌活性,其作用机制为诱导细胞凋亡;开发具有伯氨基的衍生物是提高熊果酸抗癌活性的可行途径之一。

基于单克隆抗体的多元弧菌流式细胞术检测技术的研究

【目的】建立一种基于单克隆抗体的多元弧菌流式细胞仪检测技术。【方法】以副溶血弧菌表面蛋白r-OmpW的单克隆抗体(mAb)为基础,以细胞染色率为指标优化流式细胞仪检测副溶血弧菌时所需mAb的反应浓度和反应时间。通过菌落数对比评价在优化条件下流式细胞术方法的准确度、检出限和精密度。根据所建立的流式细胞术平台分析鉴定单抗对其它5种多元弧菌的特异性。【结果】流式细胞仪检测副溶血弧菌时所需r-OmpW单克隆抗体的优化反应浓度为20 mg/L,反应时间为60 min。当菌浓在104 107cells/mL范围时,检测值可信度较高,可特异性识别5种病原弧菌。对含不同菌体浓度的样品进行重复检测,变异系数均在7%以内。【结论】所建立的这种基于单克隆抗体的多元弧菌流式细胞仪检测技术可快速准确地检测多种病原弧菌。

应用流式微球检测黄曲霉毒素B_1方法的建立

采用活性酯法,将AFB1-BSA人工抗原交联于含有羧基表面的荧光微球,通过与游离AFB1竞争抗AFB1单克隆抗体后,再与异硫氰酸荧光素标记二抗的反应,建立基于微球的间接竞争免疫检测方法.检测结果表明,流式细胞仪检测AFB1的检测限为0.03 ng·mL-1,检测范围为0.05～1.0 ng·mL-1.与黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2的交叉反应率均低于1.0%.在玉米样品中的加标回收率为87%～103%,变异系数为6.1%～8.4%.

Monascin对人恶性黑色素瘤细胞A375的诱导分化作用

研究红曲代谢产物Monascin对人恶性黑色素瘤细胞A375的诱导分化作用。用MTT法评价Monascin对A375增殖的抑制作用;PI流式单染检测细胞周期分布;透射电镜观察细胞超微结构变化;以黑色素含量、酪氨酸酶活力和体外迁移能力为指标检验Monascin对A375诱导分化作用。Monascin对A375具有一定的增殖抑制作用,并能将其阻滞在G0/G1期;透射电镜观察到A375核质比变小且细胞器增多;黑色素含量增多,相对酪氨酸酶活力提高,体外迁移能力下降。试验结果表明,Monascin对A375具有较显著的诱导分化作用。

沙蚕活性物质的分离提取及对HeLa细胞的毒性分析

将采集于中国福建海岸的海洋环节动物沙蚕(Nereis virens)冷冻干燥后用不同极性的有机溶剂进行提取,提取物A2经硅胶柱梯度洗脱分离,发现石油醚/乙酸乙酯(体积分数1∶1)的洗脱组分B3有抗肿瘤活性.采用葡聚糖柱Sephadex LH-20对B3进一步等度洗脱分离,发现洗脱的组分C2有较高抗肿瘤活性.采用噻唑蓝(MTT)法测定组分C2对HeLa细胞的毒性,结果显示:该组分具显著的体外抗HeLa细胞活性,其IC50(48 h)达47.30μg·mL-1;AO/EB染色法观察细胞凋亡,结果显示药物处理48 h后细胞明显出现凋亡现象;流式细胞术探讨其抗癌机制,结果提示组分C2可能是通过诱导HeLa细胞发生G0/G1期和(或)S期阻滞而诱导细胞凋亡的.