HBsAg与GM-CSF基因双表达载体的构建及其免疫效果

目的构建乙型肝炎表面抗原基因(HBsAg)与GM-CSF基因的双表达载体,提高乙肝病毒DNA疫苗的免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因克隆到质粒pVAXⅠ多克隆位点,再将HBsAg基因和GM-CSF基因依次克隆到IRES的上、下游多克隆位点处,构建双表达载体pHIG。将pHIG转染到COS-7细胞中,检测瞬时表达情况,并用双表达质粒pHIG免疫BALB/c小鼠,检测免疫后小鼠血清中抗-HBs及其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子的数量。结果在转染pHIG质粒的COS-7细胞上清液中有HBsAg的表达,pHIG双表达质粒组比pVAX/HBs组抗体产生时间提前2周,抗体阳转率提高2倍,小鼠脾脏T细胞表面CD4+分子数量及CD4+/CD8+值均高于pVAX/HBs组。结论HBsAg与GM-CSF基因双表达质粒能引起小鼠特异性免疫应答,并可提高免疫效果。

乙肝病毒DNA疫苗的构建及其诱导小鼠的免疫应答

构建含adr亚型HBV表面抗原基因的核酸疫苗 ,考察人白细胞介素II基因及重组白细胞介素II的免疫佐剂作用。用含有人白细胞介素II基因的真核表达质粒及基因重组白细胞介素II蛋白作为佐剂 ,将编码乙型肝炎病毒表面抗原的重组真核表达质粒 pVAX/HBS免疫BALB/C小鼠 (试验组 ) ,同时设置注射质粒pVAX的阴性对照组 ,并分别于第 2 ,4周后加强免疫各 1次。试验组在第 4周时开始有HBsAb产生 ,阴性对照组未测到HbsAb ,试验组和对照组均未检测到HBsAg。乙肝病毒DNA疫苗能引起小鼠特异性体液免疫应答 ,白细胞介素II的真核表达质粒的佐剂作用不明显 ,基因重组白细胞介素II蛋白具有提高小鼠对乙肝病毒核酸疫苗免疫应答水平的佐剂活性。

卡式瓶多剂量重组人干扰素α2b注射液与冻干制剂的比对研究及优势分析

目的通过剂型比对探讨卡式瓶多剂量重组人干扰素α2b注射液的剂型优势。方法将长春生物制品研究所有限责任公司在研卡式瓶多剂量重组人干扰素α2b注射液与同公司市售注射用重组人干扰素α2b各3批,同时置(25±2)℃避光条件下储存,0、1、2、3和6个月取样,亲和层析前处理浓缩后样品,分别进行非还原型SDSPAGE、SEC-HPLC、质谱肽图、质谱二硫键分析,比对两种剂型中蛋白聚合、降解、修饰产物种类及变化趋势;未经处理样品直接进行生物学活性检测,比对两种剂型有效性指标的变化趋势。结果SDS-PAGE和SEC-HPLC分析结果相符,两种剂型在加速比对研究周期内均可见蛋白二聚体产生,冻干制剂可见多种蛋白多聚体产生,液体制剂仅见单一种类的蛋白多聚体产生,冻干制剂的电泳纯度和色谱纯度下降趋势较液体制剂明显;质谱分析结果显示,两种剂型均产生了乙酰化修饰产物、氧化修饰产物和二硫键错配产物,两种剂型内各种修饰产物的变化趋势趋于一致;两种剂型生物学活性无明显下降趋势,稳定程度相似。结论长春生物制品研究所有限责任公司卡式瓶多剂量重组人干扰素α2b注射液(25±2)℃存放6个月内聚合产物少,蛋白纯度下降速度慢,生物学活性稳定无降低趋势,极具剂型优势。

重组人生长激素Fc融合蛋白工程细胞染色体核型分析

目的分析重组人生长激素Fc融合蛋白工程细胞(rhGH-CHO细胞)染色体核型。方法采用0. 1μg/m L秋水仙碱处理分裂中期的细胞,经固定、染色,制片观察,选取染色体形态及分散度较好的视野拍照。应用Image-ProPlus 6. 0(IPP)软件打开图片,利用手动测量工具(manual measurements)随机测量50个2n=22的CHO-k1和rhGH-CHO细胞中染色体长臂和短臂长度,计算各染色体的相对长度(各染色体与最长染色体长度的比值)及短臂/长臂的比值,并绘制染色体核型的B-Spline特征曲线。结果 rhGH-CHO和CHO-k1细胞的染色体数目均为22条,且染色体核型特征曲线一致。结论 rhGH-CHO细胞来源于CHO-k1细胞,且未受其他细胞污染。