柳杉CAPS遗传标记反应体系的优化

建立柳杉Cryptomeria fortuneiCAPS反应优化体系是进行柳杉遗传多样性研究的前提。通过对影响柳杉CAPS遗传标记反应体系结果主要因子的研究,确定了最佳的柳杉CAPS扩增反应体系:含有2.0μL 10×Buffer,0.08 mmol.L-1dNTPs,200 mg.L-1铸型DNA,1.5 mmol.L-1MgCl2,0.1μmol.L-1引物和41.675 nkatTaqDNA聚合酶的20μL反应液。扩增程序是94℃预变性5 min,然后94℃变性40 s,58℃退火40 s,72℃延伸80 s,共35个循环,然后在72℃延伸5 min。PCR产物10.0μL,加入2.0μL 10×Buffer,83.350 nkat内切酶,7.5μL双蒸水构成20μL酶切反应体系。