基于分子动力学模拟探究鞣花酸靶向轮状病毒非结构蛋白的作用机制

从分子水平探究鞣花酸(Ellagic acid,EA)与轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白(Non-structural protein,NSP)作用模式,评价EA作为抗RV药物的潜在价值。以轮状病毒非结构蛋白的晶体结构为基础,借助分子对接(柔性对接的XP模式)的手段分别构建了NSP1-EA、NSP2-EA、NSP3-EA、NSP4-EA、NSP5-EA和NSP6-EA的复合物结构模型,并进行分子力学-广义Born表面积(Molecular mechanics-Generalized born surface area,MMGBSA)分析,最后开展分子动力学模拟的研究。综合分析XP对接得分与MM-GBSA分析结果,EA与NSP6和NSP5的对接表现最好,XP对接得分分别为-7.005和-6.387,MM-GBSA结果分别为-51.62和-43.66 kcal/mol,表明EA与NSP6和NSP5结合稳定。其次EA与NSP4的MM-GBSA结果为-30.44 kcal/mol,表明EA与NSP4结合较稳定。而EA与NSP1、NSP2和NSP3蛋白的对接得分和结合自由能均较高,表明EA与这三个蛋白的结合均不稳定。分子动力学模拟结果显示,EA与NSP4蛋白的结合起到重要作用的氨基酸主要有GLU96、ARG137和ALA138,其相互作用主要为氢键、疏水作用和水桥。EA与NSP5蛋白的结合起到重要作用的氨基酸主要有GLY51、PHE53、ILE85、LEU87和GLU109,其相互作用主要为水桥、氢键和疏水作用。EA与NSP6蛋白的结合起到重要作用的氨基酸主要有THR30、ASN74、ASP106和TYR114,其相互作用主要为水桥、氢键和疏水作用。EA可以通过水桥、氢键和疏水作用与轮状病毒非结构蛋白NSP4、NSP5和NSP6蛋白的特定氨基酸残基结合,是潜在的抗RV的天然化合物。

基于网络药理学和分子对接探讨莪术醇抗脑心肌炎病毒的作用机制

【目的】利用网络药理学和分子对接技术发现莪术醇抗脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)的作用靶点及机制。【方法】利用PharmMapper、GeneCards数据库获得莪术醇抗EMCV的相关靶点;通过Cytoscape 3.7.2软件、STRING和DAVID数据库构建靶蛋白互作(PPI)网络并筛选关键靶点,对靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析,并构建莪术醇抗EMCV靶点-通路网络;通过AutoDock Vina 1.1.2分析莪术醇与靶蛋白的结合能及结合模式。【结果】网络药理学分析结果显示,莪术醇抗EMCV的潜在靶点有9个,其中丝裂原活化激酶14(mitogen-activated protein kinase 14,MAPK14)、信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)、白蛋白(albumin,ALB)、白细胞介素2(interleukin 2,IL2)可能是莪术醇抗EMCV的核心靶点,所得靶点参与C型凝集素受体信号通路、神经营养素信号通路和JAK-STAT信号通路等代谢通路,功能涉及调节炎症反应细胞因子的产生、蛋白激酶活性和药物结合等;分子对接结果显示,4种核心靶蛋白与莪术醇之间存在较强的结合能,均存在疏水形式的结合,其中ALB、STAT1和IL2与莪术醇之间还存在氢键结合。【结论】本研究结果表明,MAPK14、STAT1、ALB和IL2是莪术醇发挥抗EMCV作用的潜在靶点,本研究为莪术醇作为抗EMCV药物的研发提供理论依据和线索。

脑心肌炎病毒(EMCV)感染昆明小鼠模型的建立

目的:建立EMCV感染昆明小鼠模型。方法:6~8周龄昆明小鼠,雌雄各半,分为空白对照组和EMCV高(100TCID50/20 g)、中(10 TCID_(50)/20 g)、低(1 TCID50/20 g)剂量组。分别于EMCV感染5 d、7 d、9 d、11 d、13 d、15 d称重,眼眶采血后,断颈处死。取心、脑、肝和脾组织,计算各器官脏器指数;qRT-PCR检测心、脑、脾、肝和外周血病毒载量;qRT-PCR检测心和脑IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表达量;取心和脑,HE染色后观察组织病理损伤。结果:与空白对照组相比,高剂量的EMCV感染小鼠5 d时,能显著提高心脏指数(P<0.05)和极显著提高脾脏指数(P<0.01);qRT-PCR结果显示EMCV感染9 d时,小鼠心、脑、肝、脾和外周血病毒载量最高,中、低剂量EMCV感染小鼠各脏器中的病毒载量很低;高剂量的EMCV感染小鼠9 d时,心和脑IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.001)和TNF-α(P<0.01)极显著升高;9 d时,高剂量EMCV引起心脏组织炎症细胞浸润和空泡化病变;5~9 d时,高剂量EMCV引起脑组织脑膜增厚、脑膜下血管扩张和出血、脑白质血管扩张形成血管套。结论:EMCV攻毒剂量为0.2 ml 100 TCID_(50)/20 g时,成功建立EMCV感染昆明小鼠模型。

不同品种和能量水平对鸡生产性能影响的比较研究

为了探讨不同品种和能量水平对鸡生产性能的影响。选用1d杂交鸡(罗曼蛋鸡×白羽肉鸡)、白羽商品肉鸡、海兰(w58)和琅琊鸡各162只(,每个品种分高、中、低三个能量处理,每个处理9个重复,每个重复6只。在9周的试验期内,自由采食、饮水,测定采食量和体重,计算日增重和料重比。结果表明:四个品种鸡在0~9周龄以内,体重和采食量分别呈现线性和二次增长趋势(P<0.05)。本研究日粮代谢能水平范围内(0~3周:12.20~13.36MJ/kg;4~6周:12.34~13.18 MJ/kg;7~9周:12.57~13.36MJ/kg),没有改变各个品种的生长速度(P>0.05),但是低能量水平增加了采食量和料重比,四个品种鸡日采食量、日增重和料重比均差异极显著(P<0.0001)。品种和能量水平之间采食量具有明显的交互作用(P<0.05)。

不同日粮能量水平对白羽商品肉鸡生产性能的影响

本试验旨在研究不同日粮能量水平对白羽商品肉鸡生产性能的影响。选用1d白羽商品肉鸡的健康雏鸡162只,随机分成3个处理,每个处理9个重复,每个重复6只。日粮分为3个能量水平,中能量按NRC推荐量供给代谢能;高能量和低能量分别在中能处理基础上增加和减少代谢能150 kcal/kg,其他营养水平均一致。试验分前、中、后期3个阶段(0~3wk;4~6wk;7~9wk),阶段始末测定平均日采食量和日增重。试验鸡笼养,自由采食、饮水。结果表明:日粮能量水平可以改变前期日增重和生长速度,后期采食量和料重比(P<0.05)。高能量为最适能量,各阶段最佳代谢能值为前期13.31MJ/kg,中期13.39MJ/kg,后期13.45MJ/kg。