小鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定

目的:建立小鼠肺微血管内皮细胞体外分离培养方法及对微血管内皮细胞的鉴定。方法:取小鼠肺组织边缘剪成小块,用含有20%新生牛血清、肝素90μg/mL、L-谷胺酰胺4 mmoL/L、青霉素200 U/ mL和链霉素200μg/mL的RPMI-1640培养基进行培养。纯化细胞进行Ⅷ因子相关抗原间接免疫组化染色和透射电镜观察Weilel-palade小体。结果:获得的内皮细胞具有规律的鹅卵石样形态,Ⅷ因子相关抗原间接免疫组化染色阳性而且在透射电镜观察到Weilel-palade小体。结论:成功建立了小鼠肺微血管内皮细胞体外培养方法,并为体外研究肺微血管内皮细胞提供实验模型。

花生四烯酸体外刺激血小板活化的初步研究

目的：初步研究花生四烯酸（AA）体外刺激血小板活化的作用条件。方法：利用Beckman-Coulter EPICS-XL型流式细胞仪分析10名健康体检者的血小板分别在不同浓度的AA（终浓度为0.25、0.50、1.00、2.50、5.00 g/L）体外活化不同时间（1、2、5、10、20 min）后血小板P-选择素的阳性表达百分数（CD62p%）、平均荧光强度（CD62p-MFI）及其两者的乘积（CD62p%×CD62p-MFI）。结果：1%多聚甲醛（PFA）固定后血小板CD62p%的表达在45 min内无显著性变化（P〉0.05）;不同浓度AA刺激血小板2 min后,0.25、0.50、1.00、2.50 g/L浓度组的CD62p%和CD62p%×CD62p-MFI随AA浓度的升高而逐渐升高,5.00 g/L浓度组CD62p%和CD62p%×CD62p-MFI反而下降（P〈0.01或P〈0.05）;血小板CD62p%和CD62p%×CD62p-MFI在2.50 g/L浓度的AA分别活化1、2、5 min的结果无显著性差异,而10、20 min组其结果随AA作用时间的延长而逐渐降低（P〈0.01或P〈0.05）。结论：AA体外活化血小板后CD62p表达的增高与AA的浓度和活化时间有关,其作用条件以2.50 g/L浓度的AA活化1～5 min为佳,且1%PFA固定血小板CD62p%表达的稳定性至少可达45 min。

复发性流产患者联合检测三种血清自身抗体及临床意义

目的:探讨血清抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACL)、抗β2-糖蛋白I抗体(anti-beta2-glycoproteinI antibody,抗β2-GPI抗体)和狼疮抗凝物(lupus anticoagulant antibody,LAC)联合检测对复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)的预测意义。方法:选取85例RSA患者为实验组,50例正常经产妇作为对照组,检测两组血清ACL、抗β2-GP1抗体和LAC水平。结果:RSA组ACL阳性率为27.06%(23/85),而对照组为8%(4/50),差异有统计学意义(P<0.01);抗β2-GPI抗体阳性率为21.18%(18/85),而对照组2%(1/50),差异有统计学意义(P<0.01);LAC阳性率为21.18%(18/85),而对照组为6%(3/50),差异有统计学意义(P<0.05)。在确诊的40例抗磷脂抗体综合症患者中,ACL或抗β2-GPI抗体阳性率为95.00%(38/40),和ACL或LAC阳性组比较,差异有统计学意义(P<0.01);和抗β2-GPI抗体或LAC阳性组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)ACL、抗β2-GPI抗体和LAC均与RSA有关。(2)ACL和抗β2-GPI抗体联合检测可以提高RSA患者抗磷脂抗体综合症检出率,对于临床诊断和指导治疗有重要意义。

肾性贫血中未成熟网织红细胞的变化及意义

目的:探讨未成熟网织红细胞指数(IRF)在肾性贫血中的变化及意义。方法:采用Beckman-CoulterGen.S自动血细胞分析仪,检测135例慢性肾功能不全患者不同病期(包括肾功能不全代偿期41例、肾功能不全失代偿期45例、肾功能衰竭期49例)和50例正常对照组的IRF、网织红细胞百分比(Ret%)、红细胞(RBC)计数和血红蛋白(Hb)含量,同时检测其血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)含量,并与50例正常对照组进行比较分析。结果:IRF在肾功能不全代偿期组显著低于对照组(P<0.05),而肾功能不全失代偿期组和肾功能衰竭期组均显著高于对照组(分别P<0.05和P<0.01)。Ret%在肾功能不全失代偿期组和肾功能衰竭期组显著高于对照组(分别P<0.05和P<0.01)。RBC、Hb水平均随着Cr和BUN水平的升高而显著减低,互相间有较好的相关性(分别为r=-0.604和-0.627;r=-0.600和-0.628,P<0.01),而IRF、Ret%与Cr、BUN的变化无明显相关性。结论:IRF及其相关参数的检测,有助于了解肾病患者的骨髓增生程度和红系的生长情况。IRF在肾病早期时降低,肾病末期由于EPO等治疗后IRF升高,提示EPO等治疗有效。

不同阿司匹林抵抗类型原发性高血压患者血小板聚集率与血栓素B_2的检测及其意义

目的探讨不同阿司匹林抵抗类型原发性高血压患者服用阿司匹林后血小板聚集率(PAG)及血、尿血栓素B2(TXB2)的变化及临床意义。方法将101例原发性高血压患者根据阿司匹林抵抗的不同分为阿司匹林抵抗(AR)组9例,阿司匹林半抵抗(ASR)组23例,阿司匹林敏感(AS)组69例。分别测定各组患者服用阿司匹林前及服用阿司匹林1周(服用剂量为100mg/d)后PAG及血、尿TXB2浓度,并进行对比分析。结果用药前3组间各检测指标的差异均无统计学意义(均P>0.05),服用阿司匹林1周后,3组患者各检测指标均显著低于用药前(均P<0.01);与AS组用药后比较,ASR组各指标并无明显差异(均P>0.05),而AR组各检测指标均显著高于AS组(均P<0.01);与ASR组用药后比较,AS组各指标并无明显变化(均P>0.05),AR组血TXB2及尿TXB2浓度均显著高于ASR组,但PAGAA及PAGADP并无明显变化(均P>0.05)。此外,血浆TXB2浓度与PAGADP呈现显著的正相关(P<0.01),与PAGAA亦表现出明显的相关性(P<0.05);但尿TXB2浓度与PAGADP及PAGAA均未表现出明显的相关性(均P>0.05)。结论阿司匹林可降低原发性高血压患者的PAG和TXB2,有可能在一定程度上降低原发性高血压患者血栓形成的危险;原发性高血压患者血TXB2浓度与AR有一定相关性,亦可作为类似于PAG的另一种生化检测指标,对指导临床治疗,尤其是指导制定AR患者用药方案提供了较为重要的参考。

狼疮样抗凝物质对原发性肾病综合征患者血栓前状态的影响

目的探讨狼疮样抗凝物质（LA）对原发性肾病综合征（PNS）患者血栓前状态的影响。方法采用血浆蝰蛇毒时间测定32例PNS患者（PNS组）和30名健康对照组的LA比值（LAR）,同时检测血浆D二聚体（D-D）、血管性血友病因子（vWF）、纤维蛋白原（FIB）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）及血小板计数（PLT）。结果PNS组的LAR（1.10±0.09）、D-D[1.28（0.27-20.00）mg/L]、vWF[（212.7±80.6）%]、FIB[（5.14±2.18）g/L]、PLT[（231.7±63.6）×10^9/L]、PT[（12.5±0.8）s]与健康对照组的LAR（1.00±0.05）、D-D[0.41（0.15-0.55）mg/L]、vWF[（103.2±12.8）%]、FIB[（3.06±0.59）g/L]、PLT[（179.7±37.9）×10^9/L]、PT[（13.6±0.6）s]比较,差异有统计学意义（P均〈0.05）;以超过健康对照组x-±s为阳性,PNS患者LAR的阳性率（78.1%）与各参数的阳性率D-D（90.6%）、vWF（93.8%）、FIB（75.0%）、PLT（62.5%）、PT（75.0%）之间差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论PNS患者LA比值的增高与血栓前状态指标的变化相平行,PNS血栓前状态的发生或发展与LA有关;LA比值可作为PNS血栓前状态的监测指标之一。

非小细胞肺癌免疫指标、癌胚抗原及铁蛋白的相关性分析

目的:研究非小细胞肺癌患者免疫指标、癌胚抗原(CEA)与铁蛋白(SF)之间的关系。方法:回顾性分析92例非小细胞肺癌患者的临床资料,分析患者的CD3+T、CD4+T、CD8+T及CD4+/CD8+、NK细胞、B细胞、CEA和SF变化的关系。结果:①CEA(+)组中,CD4+T、CD4+/CD8+及NK细胞明显降低(P<0.01),CD8+T及SF明显增高(P<0.01)。CEA与CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+及NK细胞水平密切相关(P<0.01)。②SF(+)组中,CD4+T、CD4+/CD8+及NK细胞明显降低(P<0.01),CD8+T明显增高(P<0.01),CD3+T明显增高(P<0.05)。SF与CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+及NK细胞水平密切相关(P<0.01),与CD3+T水平密切相关(P<0.05)。结论:非小细胞肺癌患者存在不同程度的细胞免疫状态紊乱,且与CEA、SF变化密切相关。

不同血脂水平冠心病患者CD62p和CD63的检测(附50例分析)

目的探讨不同血脂水平冠心病患者血小板α颗粒膜糖蛋白(CD62p)和溶酶体膜蛋白(CD63)表达的意义。方法根据冠脉造影将71例可疑冠心病患者分为冠心病组(50例)和对照组(21例),应用流式细胞仪检测CD62p和CD63;并根据血清LDL-C水平分组,比较其表达水平。结果冠心病组CD62p[(5.23±4.29)%]和CD63[(5.17±3.38)%]水平高于对照组(P<0.01);高LDL-C组CD62p、CD63均高于低LDL-C组(P<0.01)。结论冠心病患者存在高度血小板活化,高LDL-C水平的冠心病患者血小板活化更为显著。

老年下呼吸道感染病人血降钙素原及C-反应蛋白测定的意义

目的了解血降钙素原(PCT)及C-反应蛋白(CRP)测定在老年下呼吸道感染病人中的临床意义。方法对伴有全身炎症反应综合征(SIRS)的老年下呼吸道感染病人(A组)和不伴有全身炎症反应综合征(SIRS)的老年下呼吸道感染病人(B组)各40例进行PCT、C-反应蛋白(CRP)的测定。PCT采用半定量固相免疫测定法来测定,CRP采用免疫比浊法测定。结果A组病例PCT阳性率明显高于B组病例,A组病例CRP明显高于B组病例;预后差者(死亡或未愈)PCT阳性率明显高于预后好者,但其CRP比较无显著差异。结论虽然老年下呼吸道感染病人PCT阳性率不高,但是PCT测定可作为判断预后的客观依据之一。CRP不能提示预后。

正常孕妇与非孕妇女T淋巴细胞亚群检测的比较

本文利用流式细胞术检测正常孕妇和非孕妇女的T淋巴细胞亚群表达百分率,探讨正常孕妇T淋巴细胞的变化。1资料和方法1.1临床资料选择2011年5月～2011年6月来我院门诊产科做产前检查的妊娠妇女37例（妊娠组）,经B超、

血浆血栓前状态分子标志物水平变化在围手术期血栓形成早期诊断中的应用

目的了解动态监测血浆血栓前状态分子标志物水平在围手术期血栓形成早期诊断中的应用价值。方法选择40例妇科、泌尿外科恶性肿瘤（未转移）、20例良性和非肿瘤手术患者及20例健康体检者。分别于术前、术后6 h3、d和7 d用ELISA、透射免疫比浊法检测其血浆血栓前状态分子标志物D-二聚体（D-dimer,D-D）、血栓前体蛋白（thrombus precursor protein,TpP）、凝血酶抗凝血酶复合物（thrombin-antithrombin complexes,TAT）、组织因子（tissue factor,TF）、P选择素（P-Selectin,P-S）、组织因子途径抑制物（tissue factor pass inhibitory,TFPI）、纤溶酶原激活物抑制物1（plasminogen activator inhibitory-1,PAI-1）的水平。结果恶性肿瘤患者血浆TF、TpP和D-D水平在术后6 h3、d持续升高达峰值,TF、D-D术后7 d仍高于术前,TpP基本恢复到术前水平。P-S、TAT水平术后6 h已升到最高值,P-S术后3 d仍偏高,7 d基本恢复到术前水平。TAT术后3 d已下降到术前水平。TFPI、PAI-1术后6 h降低,3 d开始升高,之后TFPI维持在接近术前水平,PAI-1偏高,到第7 d才降到术前水平。良性病变患者除TF、PAI-1术后6 h高于术前,其它无明显变化。结论妇科、泌尿外科恶性肿瘤患者血浆血栓前状态标志物P-S、TpP和TF、D-D水平在围手术期的第1-3 d和第1-7 d分别明显高于术前;良性病变组术后6 d TF、PAI-1高于术前,表明此时机体处于血栓前状态或容易形成血栓,恶性肿瘤组术后6 h同时有PAI-1下降、D-D升高的原、继发性纤溶亢进存在,所以临床采取早期干预措施时应全面考虑。

妊娠期高血压疾病血小板活化功能的变化及意义

目的:探讨妊娠期高血压疾病患者血小板活化功能的变化及意义。方法:采用流式细胞术分别检测48例妊娠期高血压疾病患者(研究组)、38例正常孕妇(正常妊娠组)和30例正常非妊娠妇女(对照组)的血小板CD62p、CD63、CD41、CD61的阳性表达率。结果:正常妊娠组及研究组CD62p、CD63、CD41、CD61表达水平均明显高于对照组,差异有显著性或非常显著性(P<0.05或P<0.01);研究组与正常妊娠组比较差异有显著性或非常显著性(P<0.05或P<0.01)。结论:妊娠期高血压疾病患者存在血小板过度激活,检测CD62p、CD61、CD63、CD41的表达水平将有助于对血栓形成并发症的认识,有利于预防血栓并发症的发生。

肾癌CMTM5肿瘤抑制基因甲基化的临床研究

目的分析肿瘤抑制基因CMTM5甲基化在肾癌表达,为临床诊断治疗提供参考。方法检测肾癌细胞系和正常人肾细胞株中CMTM5的表达及甲基化水平。选取本院及部分苏大附一院肾癌患者为研究对象,检测患者血液、尿液中CMTM5的甲基化水平。征得患者同意后,肾癌患者手术治疗,留取标本,进行CMTM5的甲基化检测。结果正常人肾细胞株CMTM5蛋白阳性率显著高于肾癌细胞株(χ2=3.2641,P<0.05),CMTM5甲基化阳性率显著低于肾癌细胞株(χ2=3.6944,P<0.05)。肾癌组织中CMTM5蛋白阳性率(52.4%)显著低于正常肾组织(76.7%)(χ2=7.8889,P<0.05),CMTM5甲基化阳性率(73.0%)显著高于正常肾组织(48.3%)(χ2=7.8889,P<0.05),预后较差患者CMTM5表达较低。CMTM5甲基化表达与肾癌患者年龄、性别、病理分级无关,早期肾癌CMTM5甲基化表达显著低于Ⅲ期以后患者(χ2=6.3087,P<0.05)。结论 CMTM5在肾癌组织中表达下调,且和其甲基化程度密切相关。肾癌患者的血液或尿液标本能检测到CMTM5的甲基化,可能为肾癌的早期诊断提供新的参考。

外周血HBV cccDNA检测的临床应用

目的通过对乙型肝炎患者外周血单个核细胞及血浆中共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测,初步探讨其外周血检测对乙型肝炎诊治的价值。方法将86例确诊为乙型肝炎患者根据病情分为3组,急性乙型肝炎(AHB)、慢性乙型肝炎(CHB)及HBsAg无症状携带者(ASC)组。采集外周血,分别检测ALT、AST、总胆红素(TBIL)、cccDNA、HBV-DNA。结果三组血浆cccDNA检测结果有显著性差异(P<0.01)。单个核细胞cccDNA 7个标本阳性,血浆cccDNA与HBV-DNA、ALT、AST、TBIL相关系数分别为0.817、0.402、0.450、0.221。结论血浆cccDNA在乙型肝炎患者的各个病程有显著性差异,单个核细胞cccDNA储存池确实存在但浓度较低难以检测。血浆cccDNA与HBV-DNA、ALT、AST相关,但与TBIL无明显相关。

肺腺癌细胞免疫指标、癌胚抗原、血清铁蛋白与预后因素的关系

目的研究肺腺癌患者细胞免疫指标、癌胚抗原（CEA）、血清铁蛋白（SF）与预后因素的关系。方法回顾性分析81例肺腺癌患者的临床资料，统计分析其一般情况、T淋巴细胞亚群、CEA和SF变化及其与TNM分期、淋巴结转移的关系。结果（1）CD^＋4、CD^＋4/CD^＋8随TNM分期增加呈降低趋势；CD^＋8、CEA及SF随TNM分期增加呈增高趋势。（2）有淋巴结转移较无淋巴结转移患者，CD^＋4、CD^＋4/CD^＋8明显降低[分别为（25．8±7．5）％比（34．9±9．1）％、0．7±0．4比1．1±0．5，P〈0．01]，CD^＋8、CEA及SF明显增高[分别为（39．7±9．5）％比（34．0±8．1）％、（14．2±10．8）μg／L比（6．1±6．1）μg／L、（374．4±192．9）μg／L比（276．3±167．4）μg／L，P〈0．01或〈0．0530（3）CEA（＋）较CEA（-）患者，CD^＋4、CD^＋4／CD^＋8明显降低[分别为（26．9±7．5）％比（35．6±9．7）％、0．7±0．4比1．2±0．5，P〈0．01]，CD^＋8及SF明显增高[分别为（40．4±9．1）％比（32．4±7．1）％、（371．9±181．5）μg／L比（261．5±174．0）μS／L，P〈0．01]。（4）SF（＋）较SF（-）患者，CD^＋4、CD^＋4／CD^＋8明显降低[分别为（26．7±7．9）％比（33．3±9．7）％、0．7±0．4比1．1±0．5，P〈0．01]，CD^＋3、CD^＋8及CEA明显增高[分别为（71．1±8．5）％比（66．2±10-4）％、（40．5±8．6）%比（34．2±8．7）％、（13．7±10．6）μg／L比（7．3±7．1）μg／L，P〈0．05或〈0．01]。结论肺腺癌患者存在不同程度的细胞免疫功能紊乱，且与CEA、SF变化及TNM分期、淋巴结转移密切相关。

急性冠脉综合征患者血小板活化状态的临床研究

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者的血小板活化状态及其意义。方法根据冠脉造影将66例可疑急性冠脉综合征患者分为ACS组(45例)和对照组(非冠心病组21例),用流式细胞仪检测CD62P和CD63。并根据性别、冠脉病变严重程度和血LDL-C水平对ACS患者分组,分别比较各组间CD62P和CD63的表达。结果ACS组CD62P(5.12±3.95)%、CD63(5.20±3.54)%,分别高于对照组CD62P(2.64±1.31)%、CD63(2.57±1.67)%(均P<0.01);两指标测定ACS的敏感性为73.33%和71.11%,而特异性为71.43%和76.19%,其界值点分别为2.59%和3.05%。在ACS患者中,性别对血小板的CD62P和CD63影响不显著(P>0.05);三支组和双支组的CD62P和CD63的表达均高于单支组(P<0.05);三支组与双支组间的CD62P、CD63差异无显著性意义(P>0.05);高LDL-C组的CD62P、CD63高于低LDL-C组(P<0.01)。结论ACS患者存在高度的血小板活化,性别对ACS患者血小板活化无显著影响,血小板活化程度随冠脉病变加重和高LDL-C水平而增加。

血小板膜糖蛋白CD62P CD63在2型糖尿病微血管并发症患者的表达及临床意义

目的 探讨血小板膜蛋白CD6 2P、CD6 3在 2型糖尿病微血管并发症中的表达及临床意义。方法 空腹采取静脉血 ,分别检测FBG、HbAIc、胆固醇、甘油三脂、血小板膜糖蛋白CD6 2P及CD6 3,检测结果数据以 x±s表示。 结果 2型糖尿病血小板膜糖蛋白CD6 2P和CD6 3与正常对照组比较显著升高。结论 检测血小板膜蛋白CD6 2P、CD6 3,对预测 2型糖尿病血管病变的发生、发展 ,判断微血管病变程度有重要临床价值。

妊娠期高血压疾病患者脂联素与胰岛素抵抗的相关性

目的观察妊娠期高血压疾病患者血清脂联素(APN)的变化,进一步探讨APN与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性。方法正常对照组39例,妊娠期高血压疾病组45例,其中妊娠期高血压12例,轻度子痫前期20例,重度子痫前期13例。用ELISA法测定空腹血清脂联素和胰岛素浓度。结果妊娠期高血压疾病组APN水平明显高于正常对照组(P<0.05),两组HOMA-IR差异无统计学意义(P>0.05)。随着病情加重,APN逐渐升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。血清APN水平与HOMA-IR呈负相关(r=-0.110,P<0.05)。结论妊娠期高血压疾病患者的血清APN参与胰岛素抵抗,并参与妊娠期高血压疾病的发生发展。