食管癌组织吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO-1)高表达与食管癌患者不良预后相关

目的 基于多种生物信息学数据库和免疫组织化学染色分析吲哚胺2, 3-双加氧酶1(IDO-1)在食管癌中的表达及临床意义。方法 通过免疫组织化学染色法检测IDO-1在食管癌组织和癌旁组织的表达水平,利用肿瘤免疫评估资源数据库(TIMER)、基因表达谱交互分析数据库(GEPIA)、阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析数据库(UALCAN)、 Kaplan-Meier plotter、癌症基因组图谱数据库(TCGA)等数据库分析IDO-1在食管癌组织中的表达情况,IDO-1差异表达对食管癌患者预后的影响,IDO-1表达与肿瘤特征基因通路的相关性,IDO-1表达与免疫细胞浸润情况及免疫检查点表达情况的相关性。结果 免疫组织化学染色结果显示,IDO-1在食管癌组织中的阳性表达率为70%,明显高于癌旁组织的15%;IDO-1表达与患者年龄、性别无显著差异。IDO-1表达在低分化食管癌组织、高临床分期级有淋巴结转移的组织表达增加;GEPIA数据库和TIMER数据库分析结果显示,IDO-1在食管癌组织中表达水平显著高于癌旁组织;UALCAN数据库分析结果显示,IDO-1在低分化食管癌、有淋巴结转移的患者高表达;GEPIA数据库、 Kaplan-Meier plotter数据库、 UALCAN数据库分析结果显示,IDO-1高表达的食管癌患者,特别是食管鳞状细胞癌患者的生存时间显著缩短,但食管腺癌患者的IDO-1表达水平与生存时间并无显著相关性;TCGA数据库食管癌RNA-seq数据的通路富集、免疫细胞浸润、免疫检查点表达情况分析结果显示食管癌患者IDO-1的表达水平与多种食管癌恶性进展基因通路密切相关,并且IDO-1表达与多种免疫细胞浸润和免疫检查点表达关系密切。结论 IDO-1在食管癌中高表达并与患者不良预后密切相关,高表达IDO-1是食管癌恶性进展及免疫抑制微环境形成的关键因素。

RPRD1B对三阴性乳腺癌细胞生物学功能及上皮间质转化的影响

目的探讨核前mRNA结构域调节因子1B(RPRD1B)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT)的影响。方法免疫组化检测RPRD1B在三阴性乳腺癌组织和癌旁组织的表达水平,Western blot检测三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231和HCC-1937中RPRD1B的表达水平。三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231和HCC-1937分别用sh-RPRD1B慢病毒(sh-RPRD1B组)和sh-NC慢病毒(sh-NC组)感染,然后检测下调效率;CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot和qRT-PCR法检测敲低RPRD1B对三阴性乳腺癌细胞中上皮间质转化标志性蛋白E-cadherin和N-cadherin的影响。结果RPRD1B在三阴性乳腺癌组织和三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系和HCC-1937细胞系中均表达。CCK-8结果显示,与sh-NC组比较,sh-RPRD1B组MDA-MB-231和HCC-1937细胞增殖能力显著降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,与sh-NC组比较,sh-RPRD1B组细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。Transwell结果显示,与sh-NC组比较,sh-RPRD1B组细胞侵袭能力显著降低(P<0.01)。划痕实验结果显示,与sh-NC组比较,sh-RPRD1B组细胞迁移能力显著降低(P<0.01)。与sh-NC组比较,sh-RPRD1B组细胞上皮间质转化标志分子E-cadherin表达水平升高,N-cadherin表达水平降低。结论敲除RPRD1B表达使三阴性乳腺癌细胞的凋亡能力增强而增殖能力减弱,其侵袭和迁移能力的减弱可能与上皮间质转化过程相关。

细胞周期相关肿瘤高表达蛋白(CREPT)在前列腺癌高表达并促进前列腺癌进展

目的研究细胞周期相关肿瘤高表达蛋白(CREPT)在前列腺癌中的表达情况和对前列腺癌发生发展的影响。方法采用基因表达谱交互分析数据库2(GEPIA2)和癌基因组图谱(TCGA)数据库进行生物信息学分析,22Rv1前列腺癌细胞转染CREPT小干扰片段下调CREPT表达,采用CCK-8法、Transwell^(TM)实验和划痕愈合实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移。体内裸鼠荷瘤实验检测CREPT对前列腺癌发生发展的影响。结果CREPT在前列腺癌中异常高表达,并与无进展生存期、肿瘤T分期、N分期、前列腺特异性抗原(PSA)水平和Gleason评分相关。CREPT能够促进前列腺癌22Rv1细胞增殖、侵袭和迁移。体内裸鼠荷瘤实验表明CREPT能够促进前列腺癌的进展。免疫浸润分析结果表明CREPT高表达与CD8+T细胞的浸润呈负相关。结论CREPT是潜在前列腺癌预后标志物,有望成为前列腺癌新的治疗靶点。

阻断KIR2DL4(CD158d)增强NK细胞的杀伤功能

目的利用抗体阻断人原代培养的自然杀伤(NK)细胞表面的杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4),抑制其与配体人白细胞抗原G(HLA-G)的结合,观察对NK细胞杀伤功能的影响。方法用免疫磁珠法分离人NK细胞并培养,流式细胞术检测所得NK细胞的纯度;流式细胞术检测NK细胞表面KIR2DL4的表达水平和人乳腺癌SK-BR-3细胞表面HLA-G的表达水平;将NK细胞与SK-BR-3细胞共培养,并加入KIR2DL4的阻断抗体,ELISA检测NK细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)的水平,利用流式细胞术检测NK细胞表面CD107a的表达水平,以检测其脱颗粒情况。结果分离得到的人原代NK细胞纯度可达90%以上;共培养实验发现,KIR2DL4的阻断抗体可促进NK细胞分泌IFN-γ,且NK细胞表面CD107a的表达水平也明显提高,提示其脱颗粒能力增强。结论阻断KIR2DL4信号可明显促进NK细胞的杀伤功能,KIR2DL4在NK细胞杀伤靶细胞的过程中发挥抑制性作用。

E盒锌指结合蛋白1基因沉默抑制结肠癌HCT116细胞增殖并促进其凋亡

目的使用针对E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)的siRNA在结肠癌HCT116细胞中下调ZEB1的表达,研究其对HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人ZEB1的mRNA序列设计并合成2对针对ZEB1的siRNA,瞬时转染HCT116细胞后,利用实时荧光定量PCR,Western blot法分别在mRNA和蛋白水平检测siRNA对ZEB1的抑制效果;利用MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与对照组相比,针对ZEB1的siRNA可在mRNA和蛋白水平有效抑制ZEB1的表达,ZEB1的表达下调可有效抑制HCT116细胞的增殖,并促进细胞凋亡。结论 ZEB1对结肠癌细胞的生存和增殖具有重要作用,可能参与结肠癌的发生发展过程。

T细胞参与心肌缺血/再灌注损伤的研究进展

心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)是治疗心肌梗死过程中的并发症之一,中性粒细胞、巨噬细胞等固有免疫细胞引起的炎性反应是导致MI/RI的重要原因。众多免疫细胞如何在MI/RI中发挥作用是目前研究的热点问题。近年来,越来越多的研究表明T细胞在MI/RI中发挥重要作用。本文将阐述T细胞在MI/RI中的作用及机制的研究进展,并分析目前存在的问题及发展方向。

HLA-G调控自然杀伤细胞免疫功能的研究进展

人白细胞抗原G(HLA-G)属于非经典的HLAⅠ类分子,正常情况下主要表达于母胎界面绒毛外滋养层细胞。一些肿瘤细胞系、肿瘤组织、感染的组织细胞及正常组织细胞也可检测到HLA-G的表达。自然杀伤(NK)细胞是重要的固有免疫细胞,在免疫应答与免疫调节过程中发挥重要作用。HLA-G参与免疫调控引发了越来越多的关注,其功能由最初的"母胎耐受"逐渐扩展到肿瘤免疫逃逸、器官移植耐受等多个方面,本文重点回顾了HLA-G参与调控NK细胞免疫功能的各种机制:通过与受体相互作用抑制NK细胞的杀伤作用、调节NK细胞表面受体及细胞因子的表达、通过胞啃作用(trogocytosis)广泛引发免疫抑制、引发NK细胞凋亡。

下调环指蛋白2的表达促进U87脑胶质瘤细胞凋亡并增强其放射敏感性

目的在U87脑胶质瘤细胞中下调环指蛋白2(RNF2)的表达,观察对U87细胞生长及放射敏感性的影响。方法用含有针对RNF2基因小发夹RNA(shRNA)的表达载体转染U87细胞,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别在mRNA及蛋白水平验证RNF2的表达下调,用MTT法检测细胞增殖,用annexin V-FITC/PI标记结合流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况;经X射线照射后,用流式细胞术检测对照细胞和RNF2表达下调细胞的凋亡情况。结果 2条针对RNF2的shRNA均可有效抑制U87细胞中RNF2的表达。RNF2表达下调后,U87细胞的增殖受到显著抑制,S期细胞明显减少(shRNA-NC:27.31±1.35;shRNF2-1:16.72±2.90;shRNF2-3:10.35±1.33),G1期细胞显著增加(shRNA-NC:56.13±1.80;shRNF2-1:76.32±3.11;shRNF2-3:80.45±2.83),同时出现细胞凋亡。经X线照射后,RNF2下调的细胞凋亡率明显增加(shRNA-NC:20.88±0.64;shRNF2-1:39.69±0.57;shRNF2-3:47.82±0.45)。结论下调RNF2表达可明显抑制细胞生长,并增强U87细胞对放射的敏感性。

Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的检测Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达情况,并分析Notch1的表达与临床病理特征的相关性。方法利用免疫组织化学染色,Western blot法和实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测肾细胞癌组织及对应的癌旁正常肾组织中Notch1的表达,用qRT-PCR检测Notch下游靶分子Hes1的表达,并用SPSS17.0软件分析Notch1的表达水平与临床病理特征的相关性。结果免疫组织化学染色,Western blot法和qRT-PCR结果均显示Notch1在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织,qRT-PCR结果显示Hes1在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织,且Notch1的表达与肿瘤Fuhrman分级和AJCC分期呈负相关。结论 Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌的发生发展过程中可能具有肿瘤抑制基因的作用。

悬浮驯化CHO细胞并用于抗前列腺特异性膜抗原的抗体表达

目的将贴壁状态的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞驯化成用无血清培养基培养的悬浮CHO细胞(CHO-S),并验证用该悬浮细胞进行抗体表达的可行性。方法将贴壁状态的CHO-S细胞调整为悬浮培养后,再用逐步降低血清含量的方法将其驯化成用无血清培养基悬浮培养的CHO-S细胞。根据从噬菌体抗体库筛选获得的抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体的基因序列,人工设计并合成其重链和轻链基因,分别克隆入真核表达载体pc DNA3.1中,所得载体命名为pc DNA3.1-HC和pc DNA3.1-LC。将构建好的2个载体按照轻、重链比例为3∶1的量用Free Style MAX转染试剂瞬时转染CHO-S细胞,转染7 d后收集培养上清,用SDS-PAGE和Western blot法检测抗体表达情况,用流式细胞术检测其与PSMA阳性细胞的结合活性。结果成功将贴壁CHO细胞驯化成悬浮CHO-S细胞,成功构建了表达抗PSMA人源性抗体重链和轻链基因的真核表达载体,并在CHO-S细胞中实现了抗体的分泌表达,流式细胞术检测证实其可特异性结合PSMA阳性前列腺癌细胞。结论成功驯化获得悬浮CHO-S细胞,驯化后的CHO-S细胞可用于抗体的真核表达,为后续抗体的大量表达纯化及功能研究提供了工具。

非受体蛋白质酪氨酸磷酸酶14在胆管癌组织的表达及临床意义

目的检测非受体蛋白质酪氨酸磷酸酶14(PTPN14)蛋白在胆管癌组织中的表达,探讨PTPN14与胆管癌临床病理特征间的关系,并分析PTPN14的表达与胆管癌患者预后的关系。方法用免疫组织化学染色检测胆管癌组织及癌旁组织中PTPN14蛋白的表达;利用统计学分析软件分析PTPN14蛋白与胆管癌患者临床病理特征之间的关系;利用生存分析曲线分析PTPN14蛋白与胆管癌患者术后5年生存率的关系。结果 PTPN14蛋白在胆管癌组织中的阳性表达率为49.1%,在癌旁组织中的阳性表达率为75.4%;PTPN14蛋白的表达与胆管癌临床分期及分化程度密切相关,与胆管癌患者性别、年龄无显著相关性;PTPN14蛋白阳性表达的胆管癌患者术后5年生存率显著高于阴性表达的患者。结论 PTPN14在胆管癌组织低表达,且PTPN14低表达与胆管癌的良性临床病理特征及总体生存率呈负相关。

microRNA-93过表达促进A172脑胶质瘤细胞增殖并抑制其凋亡

目的探讨微小RNA-93(miR-93)对胶质瘤细胞A172增殖和凋亡的影响,观察miR-93对胶质瘤生物学行为的影响。方法通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测2例正常人脑组织、10例胶质瘤样本和5种胶质瘤细胞系中miR-93的表达;利用人工合成miR-93 mimic瞬时转染脑胶质瘤A172细胞,qRT-PCR检测细胞中miR-93的表达水平;采用MTT比色法检测A172细胞增殖情况;流式细胞术检测A172细胞周期与凋亡。结果胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中miR-93的表达量较瘤旁与正常胶质细胞系高,miR-93 mimic上调了A172细胞中miR-93的表达水平,促进了A172细胞的增殖能力。miR-93转染细胞后,进入S期细胞显著增加,而G1期细胞则明显减少,同时A172细胞的凋亡数量减少。结论 miR-93在胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中高表达,过表达miR-93有效促进了A172细胞的增殖,S期细胞增加G1期减少、细胞凋亡降低,提示miR-93可能成为胶质瘤诊断和治疗的新靶点。

HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定

目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌,划线接种传代50次;通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Western blot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性。结果成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体,并在BL21大肠杆菌中诱导表达;革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Western blot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好,可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid。结论成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体,鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性,为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础。

基于自然杀伤(NK)细胞的肿瘤免疫治疗研究新进展

针对程序性死亡蛋白1/程序性死亡蛋白1配体1(PD⁃1/PD⁃L1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)等免疫检查点分子的抑制剂在肿瘤临床治疗中的成功应用,开辟了肿瘤免疫治疗的全新领域。近年来,如何维持肿瘤微环境中的免疫细胞活性始终是肿瘤免疫治疗领域热点问题。随着研究的深入,自然杀伤(NK)细胞在肿瘤免疫治疗中的作用正在被逐步阐明。NK细胞在固有免疫应答和适应性免疫应答中都发挥关键作用,具有多种细胞毒作用机制,并能够通过产生细胞因子调节免疫反应。NK细胞作为肿瘤微环境中重要的效应细胞之一,其活化、增殖和杀伤效应依赖于多种受体间活化与抑制信号的协调与平衡,不受主要组织相容性复合体(MHC)表达限制,是T细胞肿瘤免疫治疗策略的重要补充手段。我们着重总结了基于NK细胞的肿瘤免疫治疗策略,并讨论了NK细胞免疫卡控分子作为新的肿瘤免疫治疗靶点的可能性。

泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)的功能及其参与肿瘤发生发展机制的研究进展

泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)是UHRF家族的重要成员。生理情况下,UHRF1参与调节淋巴细胞的发育和功能,并在维持子细胞的甲基化状态、细胞生长以及维持基因组稳定等方面也发挥重要作用。UHRF1在多种肿瘤中呈高表达,且其表达与患者的临床病理特征及不良预后密切相关。UHRF1可通过表观遗传学机制对多种肿瘤抑制基因的表达调控而实现对肿瘤细胞的生长、侵袭转移、氧化应激及DNA损伤修复等特性的调节。鉴于UHRF1在肿瘤中的特异性高表达及对细胞生长的重要作用,UHRF1有望作为抗肿瘤治疗的有效靶点。

下调含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1(UHRF1)的水平可抑制肾癌769-P细胞增殖并促进其凋亡

目的利用针对含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1(UHRF1)的小干扰RNA(siRNA)在肾癌769-P细胞中下调UHRF1的表达,探讨其对769-P细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人UHRF1的mRNA序列设计并合成2对针对UHRF1的siRNA,用脂质体将其瞬时转染入769-P细胞。利用实时定量PCR检测UHRF1 mRNA的水平,Western blot法检测UHRF1的蛋白水平;利用MTT法检测细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 UHRF1 siRNA可显著抑制UHRF1的mRNA和蛋白水平,下调769-P细胞UHRF1水平后,细胞增殖显著减弱,细胞凋亡显著增加。结论下调UHRF1的表达可抑制肾癌细胞的增殖并促进其凋亡。

免疫学综合实验教学的革新分析

生物医学是随着科技发展而逐渐发展起来的前沿学科。而免疫学又是生物医学中的前沿学科。其中的免疫学实验教学对于培养免疫学专业人才综合能力和创新能力发挥了关键性的作用。因此,免疫学实验学科的教学要具有严谨的系统性和科学性。完善缜密的综合实验教学可以更好的培养出优秀的生物医学人才。但是就当前免疫学实验学科的教学情况来看,教学情况不甚理想。针对这一问题,文章从实验教学改革的角度,分析了目前综合实验教学中存在的问题,阐述综合实验教学应有的教学思路及实施方法等等具体问题。以期为免疫学综合实验教学改革的有效开展提供更完善的理论指引。

基于主动学习法的《电磁学与电动力学》教学方法改革研究

主动学习法的独特之处在于让学生致力于对问题的思考和解决,将其应用到《电磁学与电动力学》课程的教学过程中,可以提高学生的学习兴趣,丰富课堂形式,进而达到改善课堂教学效果的目的.本文通过分析教师自我报告记录、对学生的问卷调查和学生考试成绩,来考察主动学习法对教学效果的影响.

智慧城市绿色建筑电梯阵列

随着城市化进程的发展,城市高楼日益增多,但城市高楼危机却日益突显。城市楼房在发生火灾时居民无法及时逃生;室内电梯封闭结构通风差、病毒等高危传播,封闭电梯结构还导致人身侵害犯罪频发,传统室内电梯的通风、照明日夜不停,浪费能源显著。城市高楼及电梯的上述问题,已经成为阻碍城市发展的最严峻技术瓶颈问题。为解决城市楼房及电梯结构设计存在的重大缺陷,提出了颠覆传统楼房结构、电梯及楼梯布局和结构的新型楼房,将每栋楼房建为至少具有两个在空间上分隔、且具有一定防火安全距离的单元,每个单元都通过连廊连接到室外电梯间,室外电梯间独立于楼房任何单元,电梯间内具有独立供电的电梯阵列、楼梯阵列以及可以通达任何一个楼房单元的廊道。室外电梯间及电梯采用通风防雨的通透结构。电梯阵列可以采用神经网络等智能优化控制策略。本设计的智慧城市绿色建筑电梯阵列突破了城市发展的技术瓶颈和危机,具有极其重要意义。

乌鲁木齐装配式外墙外保温板脱落原因及处理措施

在乌鲁木齐,外墙采用EPS板薄抹灰外墙外保温约占外保温系统80%,是应用最为广泛的外墙外保温系统,外保温板起鼓、开裂、脱落事故频发。一方面会影响保温效果、建筑结构的耐久性能,还可能砸伤行人造成更大的损失。本文使用文献查阅、现场踏勘等研究方法,从材料选择、施工、外界环境等方面分析了保温层脱落的原因,并提出了对策,为乌鲁木齐装配式外保温设计、施工提供理论指导,具有一定的现实意义。