表面活性物质在分泌性中耳炎咽鼓管开放功能中的作用

目的 探讨外源性的表面活性物质在分泌性中耳炎咽鼓管开放功能中的作用。方法 通过鼓室内注入灭活的肺炎链球菌悬液 ,建立分泌性中耳炎动物模型 ,测试咽鼓管的被动开放压。结果 测试了中耳有渗液者 2 7耳和正常者 2 1耳的咽鼓管被动开放压 ,有渗液耳的被动开放压高于正常耳的被动开放压 ,分别注入外源性的表面活性剂后 ,被动开放压均降低 (P <0 .0 1)。结论 外源性的表面活性剂可以降低咽鼓管的表面张力 。

通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究

目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV。在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白(GFP)基因后,使用pSSHG-CMV-GFP、GFP140和pAAV/Ad三种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV。应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度,并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞,荧光显微镜观察GFP表达。结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011cfu/mL,浓缩后可达2×1013cfu/mL,表明成功地构建了重组AAV载体。插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV。感染了重组GFP-AAV的大鼠NIH3T3细胞表达了明显的GFP荧光。结论构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV可转染外源基因,这为进一步的基因治疗奠定了基础。

外源性表面活性剂对咽鼓管开放功能影响的实验研究

外源性表面活性剂对咽鼓管开放功能影响的实验研究郑国玺汪立李宝树张正民朱有玲王学勤卫小红杨妙丽我们通过鼓室内注入外源性表面活性物质（ＳＡＳ），观察不同状态下咽鼓管的被动开放压（ＰＯＬ），为探索分泌性中耳炎的治疗方法提供实验依据。一、材料和方法１．材料：...

耳鼻咽喉头颈外科学住院医师规范化培训之实践与思考

住院医师规范化培训在培养具有独立工作能力的高素质住院医师过程中发挥着重要作用。西安交通大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科的住培教学中逐步从临床检查法过渡到内镜模拟训练、尸头解剖等方式,并根据手术分级制度循序渐进地对住院医师进行临床操作培训。教学模式不仅局限于课本和教案,而是采用PBL、CBL、临床路径及网络教程等多元模式,重视自主学习积极性及临床思维培养;同时加强医学人文教育,培养医患沟通技巧;并尝试建立客观、公正的考核模式进行住培评估,以培养更多高素质专科人才。

NT4-ADNF-9融合基因原核表达载体的构建

目的 构建神经营养素 (NT4 )与活性依赖性神经营养因子 9(ADNF 9)融合基因的原核表达载体pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9,为进一步对神经系统退行性疾病基因治疗的研究奠定基础。方法 采用非对称互补引物 /模板法 ,制备两端含有酶切位点的ADNF 9的cDNA ,将其连接到NT的信号肽和前导序列的 3′端 ,组成融合基因NT4 ADNF 9,再将该融合基因亚克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建为pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9。结果 经DNA测序 ,限制性内切酶酶切等方法证实已成功地将ADNF 9重组到NT4信号肽和前导序列的 3′端 ,并将融合基因亚克隆于pBV2 2 0内。结论 成功构建了NT4与ADNF 9融合基因的原核表达载体pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9。

咽异感症和胃食管反流的相关性

咽异感症和胃食管反流的相关性郑国玺康全清张全忠朱有玲董蕾罗金燕咽异感症临床常见且难于治愈。我们采用配戴式２４小时ｐＨ监测方法，对４８例有咽异感症症状而疑为胃食管反流病的患者进行了检查，并采用抗酸和促胃动力药治疗，初步探讨咽异感症与胃食管反流病之间的关...

hBDNF原核表达载体的构建及其表达

目的:利用基因重组技术构建人脑源性神经营养因子(human brain-derived neurotrophic factor,hBDNF)的原核表达载体pBV220/mhBDNF,诱导表达融合基因,鉴定BDNF的生物学活性。方法:制备重组质粒pGEM-T/hBDNF及hBDNF的成熟肽基因片段,经限制性内切酶联合酶切,将hBDNF亚克隆到原核表达载体pBV220,诱导表达克隆基因,培养鸡胚背根神经节,检测表达蛋白的活性。结果:重组原核表达质粒pBV220/mhBDNF构建正确,表达框架未发生改变。成功诱导表达了融合基因并成功地分泌表达hBDNF蛋白。表达蛋白组可见大量神经突起自神经节组织块外周缘向四周呈放射状长出,损伤组未见明显神经突起长出。结论:成功构建了原核表达载体pBV220/mhBDNF,重组质粒可分泌表达hBDNF蛋白,而且hBDNF蛋白有良好的生物活性。本实验为进一步开展hBDNF基因治疗感音神经性耳聋提供了可能。

腺伴随病毒介导的脑源性神经营养因子对耳蜗损伤保护作用的体外研究

目的:将携载脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的重组腺伴随病毒rAAV-BDNF转染体外培养的耳蜗组织,并观察该重组病毒对耳蜗损伤的保护作用。方法:体外分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞;应用新霉素建立体外耳聋模型;将重组病毒感染体外培养的新生SD大鼠耳蜗,观察其对体外毛细胞的保护作用。结果:成功分离培养了新生SD大鼠的耳蜗毛细胞后,可见外毛细胞和内毛细胞成排排列;rAAV-BDNF组毛细胞损伤程度较新霉素加害组明显为轻,而新霉素加害组可见毛细胞大量缺失,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:构建的重组病毒rAAV-BDNF对耳蜗具有保护作用,可用于基因治疗的研究。

简论构建社会主义核心价值体系的几个理论和实践问题

本文围绕"构建社会主义核心价值体系的理论与实践"这个主题,主要探讨了三个问题:社会主义核心价值体系的科学内涵;构建社会主义核心价值体系的重大意义;构建社会主义核心价值体系的实践对策。笫一个问题主要是要阐明这样一种见解:社会主义核心价值体系是从社会主义价值观角度讲的,不是从社会主义价值的角度讲的。笫二个问题是对胡锦涛同志讲述构建社会主义核心价值体系重大意义的一句经典式名言深入进行剖析。第三个问题主要是要阐明构建社会主义核心价值体系必须遵循人们价值观演变的客观规律,才能收到实效。

外耳道胆脂瘤

目的:探讨外耳道胆脂瘤临床特点与治疗方法,引起临床医生对该病的关注,提高对本病的认识。方法:对16例外耳道胆脂瘤的临床表现、手术治疗及效果进行了回顾性分析。结果:病变范围小,骨质破坏较轻者5例;虽有骨质破坏,但未进入乳突及上鼓室者6例;侵入上鼓室2例;侵入乳突者3例,并有外耳道后壁-乳突腔瘘形成。结论:外耳道胆脂瘤主要发生在中老年人,它和外耳道栓塞性角化病是两种不同的疾病,治疗的关键是彻底清除胆脂瘤囊袋和死骨。

马克思主义哲学的立场、观点、方法简论

学习马克思主义哲学(包括辩证唯物主义和历史唯物主义)究竟学什么,这是关系学哲学的导向问题,意义极为重大,很有必要弄清楚。正确的回答是:学习马克思主义哲学,要着重把握其观察、处理问题的立场、观点、方法,而不是仅仅懂得、记住一些概念、术语、条文。毛泽东早就说过:我们“要有目的地去研究马克思列宁主义的理论,要使马克思列宁主义的理论和中国革命的实际运动结合起来,是为着解决中国革命的理论问题和策略问题而去从它找立场,找观点,找方法的。”(《毛泽东选集》第3卷,第759页)下面就谈谈自己对这个问题的一些思考。

我国经济转型时期价值观建设的几个问题

我国经济转型时期价值观建设的几个问题郑国玺随着改革开放的深化、拓展，我国的经济管理体制由传统的计划经济体制逐步向现代的市场经济体制转型。经济基础的变化必然引起上层建筑的变革。作为意识形态核心内容的价值观的擅变，对人们的价值取向、行为取向、行为模式必然...

试论马克思主义的立场、观点、方法

试论马克思主义的立场、观点、方法郑国玺学习马克思主义，应着力把握其观察、分析、处理问题的立场、观点、方法，这是无产阶级革命导师和领袖的一贯教导。这个问题，关系着学习马克思主义特别是当代中国的马克思主义的导向问题，至关重要。本文特对什么是马克思主义哲学...

“三个代表”科学地揭示了社会发展的三个基本动力

“三个代表”科学地揭示了社会发展的物质动力、精神动力和载体动力(也就是政治动力)等三个基本动力。“三个代表”不仅是我国现阶段党建工作的指导纲领,还是国家工作的指导纲领。“三个代表”是理论创新的主要依据。

社会主义辩证观——对社会主义诸种认识困惑的解读

针对某些人对社会主义在认识上产生诸多困惑的主要原因,在于认识的片面性,本文着重探 讨了社会主义的10个辩证统一,即客观规律与历史定位、实质与名称、“够格”与“不够格”、经济与政治与 文化、共性与个性、前进性与曲折性、静态与动态、纯与不纯、成绩与问题、感性与理性的辩证统一。

SD大鼠Atoh1基因CDS区的克隆及序列分析

目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1 cDNA编码序列并测定分析其克隆序列。方法采用非对称互补引物/模板法,制备Atoh1 cDNA的编码序列,将其克隆入PMD-19T载体中并测序。结果经酶切鉴定、测序分析表明,扩增得到的大鼠Atoh1基因CDS区全长为1 056 bp,编码351个氨基酸;测定序列与GenBank中公布的参考序列对比,有2处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致。这两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP)位点,突变为无义突变,不影响蛋白的表达。结论成功克隆了Atoh1 cDNA编码序列,为进一步对感音神经性耳聋的基因治疗奠定了基础。

大鼠Atoh1基因真核表达载体的构建及转染293T细胞的实验研究

目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1基因CDS,构建大鼠核转录因子Atoh1的真核表达载体并在真核细胞中表达。方法从SD大鼠结肠粘膜提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增Atoh1基因CDS区序列并TA克隆至PMD-19T载体中。测序鉴定后将Atoh1基因连接于含有EGFP和内部核糖体转入位点(internal ribosome entrysite,IRES)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至293T细胞,荧光显微镜、PT-PCR和Western blot检测其在293T细胞中的表达。结果扩增得到大鼠Atoh1CDS区长1056bp,编码351个氨基酸,与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP),突变为无义突变,不影响蛋白表达。双酶切和测序结果证明Atoh1已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,转染293T细胞48h后,荧光显微镜下观察到荧光蛋白的表达,PT-PCR和Western blot证实Atoh1的mRNA和蛋白能在293T细胞中正确表达。结论成功构建了真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP,并在293T细胞中成功表达,为进一步研究Atoh1的功能、作用机制及感音神经性耳聋的基因治疗奠定了基础。

大鼠核转录因子Atoh1的克隆表达及鉴定

目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1基因CDS区序列,构建大鼠核转录因子Atoh1的真核表达载体并在真核细胞中表达。方法从两只SD大鼠结肠黏膜提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增Atoh1基因CDS区序列并亚克隆于PMD-19T载体中。测序鉴定后将Atoh1基因连接于含有EGFP和内部核糖体转入位点(IRES)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至293T细胞,荧光显微镜和Western blot检测其在293T细胞中的表达。结果扩增得到大鼠Atoh1 CDS区长1 056 bp,编码351个氨基酸,与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP),突变为无义突变,不影响蛋白表达。双酶切和测序结果证明Atoh1已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,荧光显微镜和Western blot证实Atoh1目的蛋白能在293T细胞中稳定表达。结论基因工程方法可成功克隆出Atoh1编码序列,真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达。

打工的农民向何处去──“民工潮”发展趋势预测

打工的农民向何处去「民工潮」发展趋势预测■郑国玺刘德骥李新从２０世纪８０年代末开始，在我国大地上出现了一道新的“风景线”——数千万的农民、特别是青年农民，冲破传统的城乡、地区分隔，由农村向城镇、由内地向沿海涌动，引起了国人的关注、议论、思考。对于这种...

试论“三个代表”的整体性规定与全面贯彻要求

本文的主旨是探讨全面贯彻“三个代表”重要思想的内在根据 ,本文初步形成的理念是 :“三个代表”的整体性规定是全面贯彻的内在要求。文中“从全面构成的理论系统看”、“从全面回答党的建设的一系列基本问题看”、“从全面揭示社会发展的三个基本动力看”、“从全面总结‘三个文明’建设的基本经验看”等四个方面 ,阐明“三个代表”重要思想的整体性规定。从“要着力把握其立场、观点、方法”、“要认真领会其精神实质”、“要结合本地实际”、“要讲求实效”等四个方面 ,论述全面贯彻要求。